Antraks'ın PA virülans faktörüne karşı fajgösterim teknolojisiyle nötralizanantikor geliştirilmesi
Neutralizing antibodydevelopment against PA virulantfactor of anthrax with phagedisplaying technology
- Tez No: 621021
- Danışmanlar: PROF. DR. YELDA ÖZDEN ÇİFTÇİ, DR. BERTAN KORAY BALCIOĞLU
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2020
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Gebze Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Antraks (Şarbon), Bacillus anthracis bakterisinin sebep olduğu dünya çapında geniş yayılımlar gösteren ciddi bir enfeksiyondur. Şarbona neden olan Antraks toksini, Bacillus anthracis'in virülent suşları tarafından salgılanan üç proteinli bir ekzotoksindir. Antraks toksini, koruyucu antijen (PA) olarak bilinen bir hücre bağlayıcı protein ve ödem faktörü (EF) ve ölümcül faktör (LF) olarak adlandırılan iki enzim bileşeninden oluşur. Bakteri toksisitesini, koruyucu antijenin bir dizi proteolitik süreçlerden sonra ölümcül faktör ve ödem faktörüne bağlanması ve ödemli toksin ve ölümcül toksin oluşturarak sitozol içine EF/LF girişini teşvik etmesiyle gerçekleştirir. Tez kapsamında, Antraksın toksisitesini oluşturan üç bileşenden, konakçı hücre sitozolüne girişte kritik rolü üstlenen PA (koruyucu antijen) koruyucu antijenine karşı tek zincirli değişken antikor (scFv) yapılması amaçlanmaktadır. Bu amaç doğrultusunda, PA'nın nötralizasyonunda etkili olduğu gösterilmiş epitop bölgelerinden oluşan peptitlerden yola çıkılarak üç farklı fare ırkına (CD1, C57BL/6 ve BALB/C) immünizasyon yapılmıştır. İmmünizasyon sonrası serum örneklerinden yapılan ELİZA ile farelerin immünize oldukları görülmüştür. İmmünize edilmiş farelerden alınan dalaklardan elde edilen RNA'lardan yola çıkarak rekombinant antikor kütüphanesi oluşturulmuştur. Faj gösterim teknolojisi uygulanarak, antikor kütüphanesi faj yüzeyinde gösterilmiştir. Oluşturulan antikor kütüphanesi 'Biopanning' yöntemiyle taranarak PA'ya spesifik rekombinant fajlar seçilmiştir. Faj ELİZA ile rekombinant antikorların hedef antijene bağlanmaları kontrol edilmiştir. Seçilen klonların dizi analizi yapılmış ve gen sekansları belirlenmiştir. Elde edilen faj klonlarının çözünük halde ekspreyonlarının yapılması ve çözünük haldeki antikorların karakterizasyonunun yapılması hedeflenmektedir.
Özet (Çeviri)
Anthrax is a serious infection caused by the bacterium Bacillus anthracis. Anthrax toxin is a multimeric exotoxin secreted by the virulent strains of Bacillus anthracis. The anthrax toxin consists of a cell binding protein known as protective antigen (PA) and two enzyme components called edema factor (EF) and lethal factor (LF). The toxin accomplishes its bacterial toxicity by binding the protective antigen to a lethal factor and edema factor after a series of proteolytic processes. This promotes the introduction of EF / LF into the cytosol by forming edematous toxin and lethal toxin. In this thesis, it is aimed to generate a single chain variable antibody (scFv) against PA (protective antigen) protective antigen which is critical for the entry of the toxin into the host cell cytosol. For this purpose, three different mouse strains (CD1, C57BL/6 and BALB/C) were immunized with peptides corresponding to neutralizing epitopes on PA. Serum samples were collected during immunization process and tested with ELISA for the anti-PA immune response. The antibody library was established from the RNA collected from immunized mice spleens. The phage display technology was applied for displaying the library on phage surface. The antibody library was screened by 'Biopanning' method to obtain PA-specific recombinant phages. The binding properties of the recombinant antibodies to the target antigen were determined by phage ELISA and the selected clones were sequenced. The soluble expression of the scFvs and their characterization is intended.
Benzer Tezler
- Antraks koruyucu antijeninin immunojenik özellik gösteren bölgelerini içeren peptitlerin farklı immünizasyon protokolleri ile etkinliklerinin belirlenmesi
Immunization effectiveness of different immunization protocols by using anthrax protective antigens immunogenic epitopes
EZGİ YILDIZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
BiyolojiGebze Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ASUMAN DEMİROĞLU ZERGEROĞLU
DR. BERTAN KORAY BALCIOĞLU
- Toprak örneklerinden Bacillus anthracis'in izolasyonu, identifikasyonu ve karakterizasyonu
B. anthracis from soil samples isolation, identification and characterization
İLKER GEDİKLİ
Yüksek Lisans
Türkçe
2014
MikrobiyolojiKafkas ÜniversitesiVeterinerlik Mikrobiyolojisi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MİTAT ŞAHİN
- Hiperimmün at plazmasindan yüksek verimlilikte immünoglobülinG (IgG) elde edilmesinde yöntem optimizasyonlarinin sağlanmasi
Providing method optimization in high efficiency immunoglobulin G (IgG) from hyperimmune horse plasm
ÖZGE AKSOY
Yüksek Lisans
Türkçe
2021
Allerji ve İmmünolojiGebze Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. UYGAR HALİS TAZEBAY
DR. ARZU EKİZ
- Rekombinant dna teknolojisi ile ef antijeni üretimi ve saflaştırılması
Production and purification of ef antigen with recombinant dna technology
MELİKE OYUNCAKÇI
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
GenetikGebze Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. UYGAR HALİS TAZEBAY
DR. DİĞDEM AKTOPRAKLIGİL AKSU
- Antraks atağında ajanın hızlı deteksiyon ve identifikasyonu için yöntemlerin irdelenerek saptanması
Comparison of the methods for rapid detection and identification of agent in any anthrax attack
MESUT ORTATATLI