Small molecule-mediated human HSC expansion and development of HSC expansion medium
Küçük molekül-aracılı insan HKH çoğaltımı ve HKH çoğaltımı için besiyeri geliştirilmesi
- Tez No: 637220
- Danışmanlar: DOÇ. DR. FATİH KOCABAŞ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyomühendislik, Biyoteknoloji, Genetik, Bioengineering, Biotechnology, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2020
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Yeditepe Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 179
Özet
Multipotent ve kendini yenileme yetenekleri ile bilinen hematopoietik kök hücreler (HKH) bilhassa hematolojik kanser ve hastalıklarının tedavisi için HKH transplantasyonu için kullanılır. HKH transplantasyonu için alternative olan göbek kordon kanı (GGK) ve mobilize periferik kan (mPK), HKH sayısının azlığı ile sınırlıdır. Gecikmiş hematopoietik iyileşmeye sebep olan çift GGK unitesi kullanımına kıyasla HKH'lerin ex vivo çoğaltılması yaklaşımı, bu sınırlandırmanın üstesinden gelebilmek için daha umut verici bir terapötik yaklaşımdır. Biz daha önce HKH dormansi genlerinin susturulmasının in vivo HKH havuzunu arttırdığını gösterdik. Bu yüzden, HKH dormansi düzenleyicilerinin küçük moleküller kullanılarak hedeflenmesinin, ex vivo insan mPK ve GKK kökenli HKH çoğaltılması için kullanılabileceğini hipotez olarak ileri sürdük. En etkili hematopoeitik küçük molekülleri ve kombinasyonunu tanımlamayı ve bu küçük molekül veya kombinasyonu içeren iyi üretim uygulamaları (İÜU)-kalitesinde bir insan HKH çoğaltma besiyeri gelişirmeyi amaçladık. Bu çalışmada, HKH dormansi genlerini hedefleyen 35 hematopoietik küçük molekül kullandık. BML-20 ve TAME moleküllerinin hem mPK'da hemde GKK'ında HKH içeriğini arttırdığını ve hücrelerin tekrar hücre döngüsüne girişini tetiklediğini bulduk. Koloni oluşturucu birim analizi de moleküllerin çok-soylu olma potansiyelini arttırıcı etkisini teyit etmiştir. Ayrıca, BML-260 molekülünün TAME molekülüne kıyasla çoğalan hücrelerin canlılığı konusunda daha güvenilir olduğu bulunmuştur. Gen ekspresyon analizleri, BML-260 ve TAME moleküllerinin hücre döngüsü elemanlarının modülasyonunu sağlayarak insan HKH'lerini çoğalttığını göstermiştir. Diğer yandan, etkili olan kimyasal olarak tanımlanan HKH çoğaltma besiyerinin tanımlanması ile ilgili öncü sonuçlar göstermektedir ki; 10 percent fetal bovin serum, sitokinler (SCF, TPO and FLT-3), insülin-transferrin-selenyum (ITS) ve BML-260 molekülü eklenmiş RPMI 1640 besiyeri kimyasal olarak tanımlanmış insan HKh çoğaltma besiyeri için umut vaadedici olabilir. Bu bulgular, bu moleküllerin ve bu besiyeri içeriğinin, insan HKH çoğaltılması için geliştirilebileceğini ortaya koymaktadır.
Özet (Çeviri)
Hematopoietic stem cells (HSC), known by their ability of multipotency and self-renewal are mostly utilized in HSC transplantation for treatment of hematological disorders and malignancies. Umbilical cord blood (UCB) and mobilized peripheral blood (mPB) which are alternatives to bone marrow (BM) for HSC transplantation, are limited by lack of efficient HSC number. To overcome this limitation, ex-vivo expansion of HSCs is a highly promising therapeutic applications rather than usage of double cord blood unit, which causes delay of hematopoietic recovery. We have previously shown that knockout of HSC quiescence genes could increase HSC pool in vivo. Thus, we hypothesized that targeting the HSC quiescence regulators using small molecules may be utilized for ex vivo mPB and UCB-HSC expansion. We aimed to identify the most effective hematopoietic small molecules (HSMs)/HSM combinations and develop good manufacturing practises (GMP)-grade human HSC expansion medium including the identified HSMs for successful HSC transplantation. We used 35 HSMs targeting HSC quiescence genes for HSC expansion. We found that BML-260 and TAME molecules increased the mPB and UCB-HSC content and triggered the re-entry to cell cycle. Colony forming-unit (CFU) assay confirmed their enhanced multilineage potential effects. BML-260 was safer rather than TAME on viability of the expanded cells. Gene expression analysis showed that BML-260 and TAME molecules contribute to HSC expansion through modulation of cell cycle kinetics including p27, Skp2 and Cdh1. On the other hand, the preliminary data about identification of the effectice chemically-defined HSC expansion medium showed that RPMI 1640 basal medium suplemented with 10 percent FBS, cytokines (SCF, TPO, FLT-3), insulin-transferrin-selenium (ITS) and BML-260 molecule could be promising for development of GMP-grade human HSC expansion medium. These findings reveal that these small molecules and this medium composition could be improved for human HSC expansion.
Benzer Tezler
- Small molecule ubiquitin-proteasome system inhibitor library screen reveals botulinum neurotoxin type a inhibitors
Botulinum nörotoksin serotip a inhibitörlerinin ubikitin-proteazom sistem inhibitör kütüphanesinin taranmasıyla belirlenmesi
EDANUR ŞEN
Yüksek Lisans
İngilizce
2020
BiyolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ERKAN KİRİŞ
- İmikimod ile uyarılmış fare psöriazis modelinde sistemik ursolik asit kullanımının tedavi edici etkisi
Treatment effect of use of systemic ursolic acid in imiquimod induced mouse psoriasis model
FEYZA FERAH
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2021
DermatolojiCumhuriyet ÜniversitesiDeri ve Zührevi Hast. Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ RUKİYE YASAK GÜNER
- Investigating the roles of CREBBP/EP300 and BRD9 in somatic cell reprogramming to pluripotency
CREBBP/EP300 ve BRD9'un somatik hücrelerin pluripotensiye yeniden programlamasındaki rollerinin araştırılması
KENAN SEVİNÇ
Doktora
İngilizce
2021
GenetikKoç ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. TEVFİK TAMER ÖNDER
- Mikro ve nano boyutlu polimer esaslı floresans kemosensörlerin dizaynı
Designing of micro and nano sized polymer based fluorescence chemosensors
ECE AKKOÇ
- Glioma hücrelerinde stres proteinlerinin anlatımında HSF1'in rolü
The role of HSF1 on stress proteins expressions in glioma cells
ELÇİN GÜNGÖR
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
Genetikİstanbul ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. EVREN ÖNAY UÇAR