Geri Dön

Meme kanseri hücreleri (MDA-MB-231) ve THP-1 orjinli makrofaj hücrelerinin KO-kültürü ile oluşturulacak mikroçevrede kanser hücre lizatı, oleuropein, alum ve QS-21'in etkilerinin araştırılması

Investigation of cancer cell lysate, oleuropein, alum and QS-21 effect on CO-culture microenvironment of THP-1 origin macrophages and breast cancer cells

PDF İndir

  1. Tez No: 640629
  2. Yazar: BÜŞRA ÇAKIR
  3. Danışmanlar: PROF. DR. AYŞE NALBANTSOY
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyomühendislik, Bioengineering
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2020
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Ege Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 233

Özet

Kanser mikroçevresinde birçok immün hücresi bulunmakta ve bunlardan biri olan makrofaj hücreleri hem doğal immün hem de adaptif immün yanıtı tetiklemektedir. Makrofajlar 2 ana fenotipte olabilmektedir. M1 polarize makrofajlar anti-tümör, pro-enflamatuvar ve sitotoksik etki gösterirken bunun aksine M2 polarize makrofajlar immünosupresifdir, anjiyogenez, doku onarımını desteklemekte ve metastazı teşvik etmektedir. Kanser mikroçevresinde bu iki fenotip birbirine zıt etki göstermektedir ve kanserin ilerleyişinde önemlidir. Yapılan tez çalışmasında kanserin ilerlemesinde kanser mikroçevresinde bulunan makrofajların farklı fenotiplere polarizasyonu ve bu fenotiplerin kanser hücreleri üzerine etkisinin araştırılması amaçlanmıştır. Bu amaçla MDA-MB-231 meme kanseri hücreleri ile THP-1 orjinli makrofaj hücrelerinin ko-kültürünün transwell sisteminde yapılarak kanser mikroçevresinde makrofaj polarizasyonunun belirlenmesidir. İndüklenmeyen(M0), LPS(M1) ve IL-4(M2) ile indüklenen THP-1 orjinli makrofajların ayrıca QS-21, alum ve oleuropein varlığında MDA-MB-231 hücreleri üzerine apoptotoik etkisi ve makrofaj polarizasyonu araştırılmıştır. Kanser mikroçevresinin makrofaj polarizasyonun meme kanseri tedavisinde katkılarının belirlenmesi, QS-21, alum adjuvanı ve oleuropeinin kanser tedavisindeki rolünün belirlenmesi ve makrofajlar üzerindeki etkisini bulunması sonucu yeni tedavi yöntemlerinin geliştirmesine katkı sağlaması hedeflenmektedir. Yürütülen tez çalışmasında THP-1 monosit hücreleri PMA ile makrofaja farklılaştırılmış ve FITC-CD11b antikoru ile flow sitometre cihazında analiz edilmiştir. Çalışmada kullanılan oleuropein, QS-21 ve alumun sitotoksik potansiyeli MTT yöntemi ile belirlenmiştir. Daha sonra transwell sisteminde üst membrana THP-1 orijinli makrofaj hücreleri, alt tabakasına MDA-MB-231 hücreleri ekilmiştir. İndüklenmeyen(M0), LPS(M1) ve IL-4(M2) ile indüklenen makrofaj hücrelerine kanser hücre lizatı, oleuropein, QS-21 ve alum eklenerek 24 saat inkübe edilmiştir. İnkübasyon sonunda makrofaj hücrelerinde FITC-CD86, FITC-CD11b, FITC-CD163 ve PE-CD80 antikorları ile boyanarak makrofaj polarizasyonuna etkileri flow sitometre cihazında belirlenmiştir. Ayrıca inkübasyon sonrada makrofaj hücrelerindeki GAPDH hedef geni kullanılarak RT-qPCR yöntemi ile CD86, CD11b, CD80 ve CD163 gen ifadeleri saptanmıştır. MDA-MB-231 hücreleri üzerine etkisi ise FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit kullanılarak flow sitometri cihazında analiz edilmiştir. Makrofajların süpernatantlarında IL-6, TNF-α, IL-1α, IL-1β ve IL-10 sitokin miktarlarını ELISA ile belirlenmiştir. Yapılan tez çalışması ile elde edilen veriler ışığında tüm çalışma gruplarında CD11b ekspresyonu %99 oranında olduğu belirlenmiştir. LPS ile indüklenen gruplarda M1 polarize makrofaj belirteci CD86 ve CD80 ekspresyon seviyeleri artmaktadır. Kanser hücre lizatı, oleuropein, QS-21 ve alum eklenen gruplarda ise CD80 ekspresyonu indüklenmeyen ve LPS ile indüklenen gruplarda en yüksek ekspresyon seviyesinde olduğu saptanmıştır. M2 polarize makrofaj belirteci olan CD163 ekspresyon seviyeleri genel olarak tüm gruplarda artmakta olduğu gözlenmiştir. CD11b geni için LPS ile indüklenen makrofajlarda azalma gösterirken IL-4 ile indüklenen makrofajlarda artış olduğu saptanmıştır. LPS ile indüklenen gruplarda CD86 ve CD80 gen ifadelerinde flow sitometri sonuçları ile korele olarak artış olduğu belirlenmiştir. LPS ile indüklenen gruplarda oleuropeinin CD86 geni ifadesini inhibe ettiği ve anti-enflamatuvar etki gösterdiği saptanmıştır. IL-6, TNF-α, IL-1α, IL-1β ve IL-10 sitokin miktarları LPS ile indüklenen gruplarda arttığı saptanmıştır. Oleuropein anti-enflamatuvar etki gösterirken alum adjuvanı pro-enflamatuvar etki göstermiştir. MDA-MB 231 hücrelerinin üzerine en yüksek apoptotik etkinin ise maddelerin birlikte kullanıldığı grupta belirlenmektedir. Bunun yanında oleuropeinin MDA-MB-231 hücreleri üzerine pre-apoptotik etkisinin olduğu saptanmıştır. Sonuç olarak QS-21, alum ve anti-enflamatuvar etki gösteren oleuropeinin makrofaj polarizasyonuna etkisinin olduğu ayrıca oleuropeinin kanser hücreleri üzerine apoptotik etkisinin olduğu ileri çalışmaların yapılması bu molekülün kanser tedavisinde etkili olabileceğini vaad etmektedir.

Özet (Çeviri)

There are many immune cells in the cancer microenvironment, and one of them, macrophage cells response both natural immune and adaptive immune response. Macrophages can be in 2 main phenotypes. While M1 polarized macrophages show anti-tumor, pro-inflammatory and cytotoxic effects, contrarily, M2 polarized macrophages are immunosuppressive, support angiogenesis, tissue repair and promote metastasis. These two phenotypes have opposite effects in cancer microenvironment and are important in the progression of cancer. In the thesis study, it was aimed to polarize the macrophages in the cancer microenvironment into different phenotypes and to investigate the effects of these phenotypes on cancer cells. For this purpose, MDA-MB-231 breast cancer cells and THP-1 origin macrophage cells are co-cultured in the transwell system to determine macrophage polarization in the cancer microenvironment. The apoptotoic effect and macrophage polarization of both non-induced, LPS-induced and IL-4-induced THP-1 origin macrophages on MDA-MB-231 cells were investigated in the presence of QS-21, alum and oleuropein. Determination of the contribution of macrophage polarization of cancer microenvironment in the treatment of breast cancer, determination of the role of QS-21, alum adjuvant and oleuropein in cancer treatment and As a result of its effect on macrophages, it is aimed to contribute to the development of new treatment methods. In the thesis study, THP-1 monocyte cells were differentiated to macrophage by PMA. It was stained with FITC-CD11b antibody and analyzed in flow cytometer. The cytotoxic potential of oleuropein, QS-21 and alum used in the study was determined by the MTT method. Then, in the transwell system, THP-1 origin macrophage cells were added to the upper membrane, and MDA-MB-231 cells were added to the under layer. Cancer cell lysate, oleuropein, QS-21 and alum were incubated for 24 hours by adding non-induced, LPS-induced and IL-4-induced macrophage cells. After an incubation period macrophage cells with FITC-CD86, CD11b-FITC, CD163-FITC and PE-CD80 antibodies by staining was determined polarization effects of macrophages in flow cytometry. Also, after incubation, gene expressions of CD86, CD11b, CD80 and CD163 markers were determined by RT-qPCR method using the GAPDH target gene in macrophage cells. The apoptotic effect on MDA-MB-231 cells was analyzed in the flow cytometry device using the FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit. The amounts of IL-6, TNF-α, IL-1α, IL-1β and IL-10 cytokines to the supernatants of macrophages were determined by ELISA. The data obtained in the thesis study determined that CD11b expression was 99% in all study groups. The expression levels of M1 polarized macrophage marker CD86 and CD80 increase in LPS-induced groups. Cancer cell lysate, oleuropein, QS-21 and alum added in groups were found to have the highest expression level in non-induced and LPS-induced groups. CD163 expression levels, which are M2 polarized macrophage markers, were generally observed to be increasing in all groups. For the CD11b gene, there was a decrease in LPS-induced macrophages while an increase in IL-4-induced macrophages was found. In LPS-induced groups, there was an increase in CD86 and CD80 gene expression correlated with flow cytometry results. In LPS-induced groups, oleuropein has been found to inhibit CD86 gene expression and show anti-inflammatory action. IL-6, TNF-α, IL-1α, IL-1β and IL-10 cytokine levels were found to be increased in LPS-induced groups. Oleuropein exhibited anti-inflammatory effect while alum adjuvant exhibited pro-inflammatory effect. The highest apoptotic effect on MDA-MB 231 cells is determined in the group in which the substances are used together. In addition, oleuropein has been found to have a pre-apoptotic effect on MDA-MB-231 cells. As a result, QS-2, anti-inflammatory effects oleuropein and alum has an effect on macrophage polarization also, oleuropein has apoptotic effect on cancer cells and that this molecule can be effective promises in the treatment of cancer.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    798914

    Monosit ve lenfosit hücreleriyle oluşturulan in vitro meme kanseri modelinde PD1, PDL1 inhibisyonu ve ilaç direnci ile ilişkisinin incelenmesi

    Investigation of the relationship with PD1, PDl1 inhibition and drug resistance in the in vitro breast cancer model created by monocyte and lymphocyte cells

    GÜNEŞ ÖZEN EROĞLU

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    Moleküler Tıpİstanbul Üniversitesi

    Moleküler Tıp Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. DÜRDANE SERAP KURUCA

  2. Tez No

    827465

    Çip-üstü-meme kanseri modelinde bağışıklık hücrelerinin rolü

    The role of immune cells in breast cancer-on-a-chip model

    YAĞMUR FİLİZ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    BiyomühendislikEge Üniversitesi

    Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ÖZLEM YEŞİL ÇELİKTAŞ

  3. Tez No

    718959

    İnsan makrofajlarında nitrik oksit sentaz 2 (NOS2) ifade ve aktivitesinin bazal benzeri meme kanseri hücrelerinden üretilen faktörler varlığında incelenmesi

    Investigation of nitric oxide synthase 2 (NOS2) expression and activity in human macrophages in the presence of factors produced from basal-like breast cancer cells

    GÖZDE BİLİR

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    BiyolojiHacettepe Üniversitesi

    Temel Onkoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GÜNEŞ ESENDAĞLI

    DR. ÖĞR. ÜYESİ NEŞE ÜNVER

  4. Tez No

    611083

    Meme kanseri ve meme kanseri kök hücrelerinde bIbR1532'nin epitelyal mezenkimal transizyon üzerine moleküler etkilerinin incelenmesi

    Investigation of the effects of telomerase inhibitor ''BIBR1532'' on epithelial mesenchymal transition on breast cancer and breast cancer stem cells

    ALİCAN KUŞOĞLU

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2019

    Tıbbi BiyolojiEge Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ÇIĞIR BİRAY AVCI

  5. Tez No

    513630

    Mir-144 ve foxo1 ilişkisinin meme kanseri hücreleri üzerinde araştırılması

    Mir-144 and foxo1 relationship research on the breast cancer cells

    MERVE AYDIN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    Eczacılık ve FarmakolojiSivas Cumhuriyet Üniversitesi

    Farmasötik Biyokimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ÖZGE ÇEVİK

Geri Dön