Geri Dön

Fermantation and recovery of ecori endonuclease using two different genetically enginereed E.coli strains

Başlık çevirisi mevcut değil.

PDF İndir

  1. Tez No: 65059
  2. Yazar: CANDAN YILDIR TAMERLER
  3. Danışmanlar: PROF. DR. BETÜL KIRDAR, PROF. DR. Z. İLSEN ÖNSAN
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Mühendislik Bilimleri, Engineering Sciences
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 1997
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Boğaziçi Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 256

Özet

EcoRI restriksiyon endonükleazını saflaştırmak için geliştirilen ufak ölçekli saflaştırma yöntemi iki farklı rekombinant Esherichia coli susuna uygulanmıştır. Saflaştırma sonucunda E.coli M5248 için 1.3xl05 U/g-hücre ve E.coli 294 için 3.3xl06 U/g-hücre verim elde edilmiştir. EcoRI endonükleazının her iki rekombinant E.coli susundan üretim verimini arttırmak amacıyla indüklenme parametreleri incelenmiştir. Ecoli 29 A (pPG430) susundan 595 nm dalga boyunda 1.2 optik yoğunluğa erişildiğinde eklenen 0.1 mM IPTG ile 6 saatlik indüklenmenin enzim üretimi için optimum koşullan sağladığı saptanmıştır. Ecoli M5248 (pSCC2) susundan EcoRI eldesi için optimum koşullar 590 nm dalga boyunda 1.0 optik yoğunluğa erişildiğinde fermentasyon sıcaklığını 32°C den 42°C ye yükselterek 5 saat süre ile indüklenmesi olarak bulunmuştur. Plasmid pPG430 ve pSCC2'nin kararlığına ilişkin çalışmalar, Ecoli 294 (pPG430) susu için, minimal besi ortamında büyütüldüğünde enzim üretkenliğinin ve plasmid kararlılığının azaldığını, E.coli M5248 (pSCC2) susu için ise, sıcaklık artışının plasmid kararlılığının ve EcoRI üretkenliğinin azalmasına neden olduğunu göstermiştir. Ecoli 29 A ve Ecoli M5248 hücrelerinin büyüme kinetiğinin yapısal olmayan sübstrat-kısıtlaması içeren modeller ile tanımlanabildiği belirlenmiştir. 3-kademeli bir yapısal model kullanılarak E.coli 29 A hücrelerinin hücre içi bileşenlerinin değişimini tanımlayan bir kinetik model geliştirilmiş ve 10g/L başlangıç glikoz derişiminde elde edilen deneysel verilere uygunluğu saptanmıştır.

Özet (Çeviri)

A laboratory scale procedure developed for the purification of EcoBl restriction endonuclease has been applied to two different overproducing Escherichia coli strains. The yields obtained at the final stage of the purification are 1.3x10s U/g cells for Ecoli M5248 and 3.3xl06 U/g cells for Ecoli 294. Induction parameters were optimized in order to increase the yield of the EcoKL endonuclease isolated from both recombinant E.coli strains. For the Ecoli 294 (pPG430) strain, 0. 1 mM IPTG concentration at an optical density of 1.2 at 595 nm over an induction period of 6 hours were determined to be the optimum conditions for induction. For the Ecoli M5248 (pSCC2) strain, the induction of EcoKL endonuclease was achieved by a temperature-shift from 32°C to 42 °C at an optical density of 1.0 at 590 nm over an induction period of 5 hours. Investigation of the stability of plasmids pPG430 and pSCC2 showed that in the case oîE.coli 294 (pPG430), minimal medium results in a decrease in enzyme productivity and plasmid stability, and in the case of Ecoli M5248 (pSCC2) cells, temperature-upshift leads to a decrease in the percentage of plasmid-containing cells and in EcoKL productivity. The unstructured modeling of cell growth has shown that substrate-inhibited kinetics is successful in predicting the growth behavior of both Ecoli 294 and Ecoli M5248. A three-compartment model was developed to describe the dynamic changes in the intracellular components of Ecoli 294 cells. The model gives a good description of the growth kinetics with an initial glucose concentration of 10 g/L.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    15719

    A Small scale purification procedure for EcoRI endonuclease

    Başlık çevirisi yok

    CANDAN TAMERLER

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1991

    Kimya MühendisliğiBoğaziçi Üniversitesi

    PROF.DR. ZEYNEP İLSEN ÖNSAN

  2. Tez No

    688848

    Recombinant production and characterization of serine protease enzyme from Virgibacillus sp. AGTR strain using site directed mutagenesis

    Virgibacillus sp. AGTR suşundan izole edilen serin proteaz enziminin bölgeye yönelik mutagenez yöntemi kullanılarak rekombinant üretimi ve karakterizasyonu

    EVRİM KAPUCU

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    Biyokimyaİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NEVİN GÜL KARAGÜLER

  3. Tez No

    363538

    Sıvı sıvı ekstraksiyonu ile maya atıksuyu membran çıkışından uçucu yağ asidi geri kazanımı

    Recovery of volatile fatty acids from anaerobic fermantation broth by liquid liquid extraction

    AYŞEGÜL NALAN ÖZTÜRK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    Çevre Mühendisliğiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Çevre Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. MAHMUT ALTINBAŞ

  4. Tez No

    275402

    Katı faz fermantasyon (solid state fermantation; SSF) yöntemiyle Bacillus licheniformis ATCC 14580'den proteaz üretimi

    Production of protease from Bacillus licheniformis ATCC 14580 with the method of solid state fermantation

    MUHAMET AFŞİN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2010

    BiyolojiDicle Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. FİKRET UYAR

  5. Tez No

    397821

    Su kefiri taneleri ile fermente edilmiş vişne, nar ve üzüm suyunun antioksidan miktarı ve in vitro biyoerişilebilirliğinde meydana gelen değişimler

    Changes in antioxidant quantity and bioavailability of sour cherry, black grape and pomegranate juices fermented with water kefir grain

    HANDE YÜCE

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    Gıda Mühendisliğiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ESRA ÇAPANOĞLU GÜVEN

Geri Dön