Geri Dön

Pazı kökü (Beta vulgaris L. var. cicla) peroksidaz enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu ve substrat spesifikliğinin belirlenmesi

Purification, characterization and determination of substrate specificity of the chard (Beta vulgaris L. var. cicla) peroxidase enzyme

  1. Tez No: 659477
  2. Yazar: BETÜL BOLDAZ
  3. Danışmanlar: PROF. DR. HASAN ÖZDEMİR
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2021
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Atatürk Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Biyokimya Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 67

Özet

Bu çalışmada, 4-Amino-3floro benzohidrazid ligandı sentezlenerek afinite jelinin hazırlanması ve pazı bitkisinden peroksidaz enziminin tek kademede saflaştırılması, saflaştırılacak peroksidaz enzimi için kinetik çalışmalar ve substrat spesifikliğinin belirlenmesi amaçlanmıştır. 4-Amino-3floro benzoat molekülü ticari olarak temin edildi ve bu molekülden 4-Amino-3-floro benzohidrazid sentezi yapıldı. Sentezlen molekül Sepharose-4B-L tirozine kenetlendirildi ve pazı peroksidaz enzimi tek basamakta saflaştırıldı. Saflaştırılan POD enzimi üzerine KM, Vmax, Ki, optimum pH, optimum sıcaklık ve inhibisyon etkileri incelendi. 4-Amino-3-floro benzohidrazid molekülü ligand olarak kullanılarak sentezlenen afinite jeli ile pazı POD enzimi %8,83 verimle 50,3 kat saflaştırıldı. Saflaştırma sonucunda elde edilen enzim için sodyum dodesil sülfat–poliakrilamid jel elektroforez (SDS-PAGE) yapıldı ve yaklaşık 37 kDa'da tek bant gözlendi. Saflaştırılan enzim üzerine kinetik çalışmalar guaiakol substratı varlığında yapılarak kullanılan ligandın dönüşümlü inhibisyon gösterdiği belirlendi ve IC50 değeri 577 µM ve Ki değeri 523,11±145,11 µM bulundu. Enzimin substrat spesikliği çalışmaları kapsamında 5 farklı substrat kullanılarak her bir substrat için sırasıyla, hidrojen peroksit için KM 0,05 mM, Vmax 5,91 EU/mL, ABTS için KM 0,074 mM, Vmax 37,04 EU/mL, pirokatekol için KM 1,295 mM, Vmax 58,82 EU/mL, o-Dianisidin için KM 1,724 mM, Vmax 55,55 EU/mL, guaiakol için KM 15,15 mM, Vmax 20,66 EU/mL değerleri hesaplandı. Guaiakol substratı ile yapılan çalışma sonucunda optimum pH ve optimum sıcaklık değerleri sırasıyla 5,5 ve 30 °C olarak bulundu. Yapılan çalışmada pazı peroksidaz enzimi, sentezlenen 4-Amino-3-floro benzohidrazid ligandı ile yüksek verim ve saflıkta elde edildi. Optimum pH 5,5 olarak hesaplanan ve substrat spesifite çalışmalarından en iyi substratının Lineweaver – Burk grafikleri kullanılarak guaiakol olduğu bulunmuştur.

Özet (Çeviri)

In this study, it was aimed to prepare affinity gel with synthesed 4-Amino-3-fluoro benzohydrazide molecule for one-step purification of peroxidase enzyme from chard plant. Then, kinetic studies and determination of substrate specificity of the purified peroxidase were carried out. The 4-Amino-3-fluoro benzoate molecule was commercially available and hydrazide was synthesized from this molecule. The synthesized molecule was bound to the Sepharose-4B column as a ligand and by purifying the chard peroxidase enzyme, Km, Vmax, Ki, optimum pH, optimum temperature and inhibition effects on the purifield POD enzyme were investigated. POD enzyme with 4-Amino-3-fluoro benzohydrazide ligand was bound to Sepharose-4B-L-Tyrosine gel meterial and purified 50,3 times by affinity chromatography in 8,83 % yield. Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) were made and a single band a 37 kDa were observed fort he enzymes obtained in purification. Kinetic studies on the purified enzyme were performed with the guaiacol substrate. It was determined that the used ligand showed alternating inhibition and the IC50 value was 0,577 mM and the Ki value was 0,5231±0,1451 mM. For substrate specificity of the enzyme, try 5 different substrates, primary for one substrate, KM 0,05 mM for hydrogen peroxide, Vmax 5,91 EU/mL, KM 0,074 mM for ABTS, Vmax 37,04 EU/mL, KM 1,295 mM for pyrocatecol, Vmax 58,82 EU/mL, KM 1,724 mM for o-Dianicidine, Vmax 55,55 EU/mL, KM 15,15 mM for guaiacol, Vmax 20,66 EU/mL were calculated. In the case of working with guaiacol substrate, optimum pH and optimum temperatures were found between 5,5 and 30 °C. In the study carried out, chard peroxidase enzyme was obtained in high efficiency and purity with the synthesized 4-Amino-3-fluoro benzohydrazide ligand. Using Lineweaver- Burk plots, it was found that the best substrate from substrate specificity studies, which was calculated as the optimum pH of 5,5 was guaiacol.

Benzer Tezler

  1. Pazı (Beta vulgaris L. var. cicla)'dan karbonik anhidraz enziminin saflaştırılması ve bazı özelliklerinin incelenmesi

    Purification and investigation of some properties of carbonic anhydrase from chard (Beta vulgaris L. var. cicla)

    BİHTER YEŞİLYAPRAK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2004

    Biyokimyaİstanbul Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. REFİYE YANARDAĞ

  2. Yerel pazı (Beta vulgaris L. var. cicla) genotiplerinin agronomik özelliklerinin belirlenmesi

    Determination of agronomic properties of local swiss chard (Beta vulgaris L. var. cicla) genotypes

    EMRE DEMİREL

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2020

    ZiraatEge Üniversitesi

    Bahçe Bitkileri Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MEHMET KADRİ BOZOKALFA

  3. Observations of the physical structure and nutrient distribution of the Cilician Basin, northeastern Mediterranean

    Kuzeydoğu Akdeniz Cilician Baseninin fiziksel yapısı ve nutrient dağılımı

    İDİL PAZI

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2007

    Deniz BilimleriDokuz Eylül Üniversitesi

    Deniz Bilimleri ve Teknolojisi Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. FİLİZ KÜÇÜKSEZGİN

  4. Hieronymus Bosch'un eserlerinin Nietzsche'nin ahlak eleştirisi üzerinden okunması

    Reading Hieronymus Bosch's works through Nietzche's criticism of morality

    BAŞAR PAZI

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    Sanat TarihiAnadolu Üniversitesi

    Sanat Tarihi Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. NURDAN KÜÇÜKHASKÖYLÜ