Pazı (Beta vulgaris L. var. cicla)'dan karbonik anhidraz enziminin saflaştırılması ve bazı özelliklerinin incelenmesi
Purification and investigation of some properties of carbonic anhydrase from chard (Beta vulgaris L. var. cicla)
- Tez No: 150753
- Danışmanlar: PROF. DR. REFİYE YANARDAĞ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Kimya, Biochemistry, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2004
- Dil: Türkçe
- Üniversite: İstanbul Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 85
Özet
ÖZET PAZI (Beta vulgaris L. var. cicla)' DAN KARBONİK ANHİBRAZ ENZİMİNİN SAFLAŞTIRILMASI VE BAZI ÖZELLİKLERİNİN İNCELENMESİ Bu çalışmada, ülkemizde bol miktarda yetiştirilen pazı bitkisinin yapraklarından karbonik anhidraz enzimi ilk kez saflaştırıldı ve bazı özellikleri incelendi. Pazı yapraklarından 0.01 M (3-merkaptoetanol içeren 0.05 M sodyum fosfat (pH= 7.0) tampon çözeltisi ile pazı ham ekstresi hazırlandı. Pazı ham ekstresine % 50'lik (NH4)2S04 çöktürmesi uygulandıktan sonra, DEAE-selüloz kolonuna tatbik edildi. Kolondan 0.01 M P-merkaptoetanol içeren 0.2 M Tris asetat (pH= 7.0) tamponu ile elüsyon sonucunda tek pik elde edildi. Saflaştırma işlemleri sırasında protein miktar tayini Bradford yöntemi ile; karbonik anhidraz esteraz aktivitesi p-nitrofenil asetat substratı kullanılarak Verpoorte yöntemine göre; CCVhidrataz aktivitesi ise Rickli tarafindan modifiye edilen Wilbur-Anderson yöntemine göre tayin edildi. Bu işlemler sonucunda pazı yapraklarından karbonik anhidraz enzimi esteraz aktivitesi olarak 11.12 kez, CO2 -hidrataz aktivitesi olarak 22.66 kez saflaştırıldı. Poliakrilamid jel elektroforezinde tek bir protein bandı görüldü ve bu protein bandının molekül ağırlığı 199 kDa olarak tayin edildi. SDS-PAGE ile enzimin altı alt ünitesi (heksamer yapıda) olduğu ve her birinin 29 kDa civarında molekül ağırlığına sahip olduğu saptandı. Pazıdan saflaştınlan karbonik anhidraz enzimi ile yapılan karakterizasyon çalışmalarında optimum pH'nın pH=7.0 ve optimum sıcaklığın 80°C olduğu bulundu. Enzimin çeşitli substratlara karşı ilgisi incelendi ve ilginin en yüksek olduğu p- nitrofenilasetata karşı Km ve Vmax değerleri hesaplandı. Çeşitli organik bileşiklerin ve anorganik tuzların enzim aktivitesi üzerine etkileri incelendi. Buna göre; organik bileşiklerden sistin ve triptofanın karbonik anhidrazı % 77 inhibe ederken DTNB'nin % 29 aktive ettiği, anorganik bileşiklerden ise CaCC>3 ve MnSCVın karbonik anhidrazı % 100, kuvvetli inhibitörlerden biri olan Al3+ tuzlarının % 97-98 oranlarında inhibe ettiği; Ba2+ tuzlarının ise % 299'a varan oranlarda aktive ettiği bulundu. Çahşmamızda pazıdan elde edilen karbonik anhidraz enzimi üzerine sülfanilamid, asetazolamid, sodyum azid, sistin, triptofan, KCN ve KSCN gibi inhibitörlerin etkisi incelendi. İnhibitörlerin Ki değerlerine bakıldığında en düşük Ki değerine sahip olan maddelerin sülfanilamid ve KSCN olduğu; I50 değerlerine bakıldığında ise organik bileşikler arasında en güçlü inhibitörün sülfanilamid, asetazolamid ve sodyum azid; anorganik tuzlar arasında da KCN ve KSCN olduğu görülmektedir. ıx
Özet (Çeviri)
SUMMARY PURIFICATION AND INVESTIGATION OF SOME PROPERTIES OF CARBONIC ANHYDRASE FROM CHARD (Beta vulgaris L. var. cicla) In this study, the carbonic anhydrase from chard leaves which are grown abundantly in Turkey, was purified and some properties of this enzyme were investigated. The crude extract was prepared with 0.05 M sodium phosphate buffer (pH= 7.0) containing 0.01 M J3-mercaptoethanol from chard leaves. After the 50 % ammonium sulfate saturation, the crude extract was applied to DEAE-cellulose column. The column was eluted 0.2 M Tris acetate buffer (pH= 7.0) containing 0.01 M j3-mercaptoethanol and this was resulted in the recovery of the carbonic anhydrase. At the purification steps, protein was determined by Bradford method; esterase activity of carbonic anhydrase was determined according to method of Verpoorte by using p-nitrophenyl acetate as substrate; CO2 hydration activity was determined according to the method of Wilbur- Anderson which was modified by Rickli. At the end of these purification steps, carbonic anhydrase was purified 11.12 fold as esterase activity and 22.66 fold as CO2 hydration activity from chard leaves. The purified enzyme revealed one protein band by PAGE and the molecular weight of the protein band determinated as 199 kDa. It was determinated purified enzyme has 6 subunits (heksamer) and its molecular weight was estimated 29 kDa. It was found that optimum pH was pH=7.0 and optimum temperature was 80°C in characterization steps which was made with carbonic anhydrase that was purified from chard. The effects of various organic compounds and inorganic salts on enzyme activity were examined. According to this; from organic compounds cystine and tryptophan inhibit CA at the rate of 77 %; while DTNB activates CA at the rate of 29 %. From inorganic salts CaC03 and MnS04 and Al3+ salts inhibit CA respectively 100 %, 100 % and 97-98 %. And Ba2+ salts activates CA at the rate of 299 %. The effects of inhibitors such as sulphanilamide, acetazolamide, sodium azide, cystine, trytophan, KCN and KSCN on Ca enzyme which was obtained from chard. According to the Ki values of inhibitors; the substances which have the lowest Ki values are sulphanilamide and KSCN. According to the I50 values; the strongest inhibitors are sulphanilamide, acetazolamide and sodium azide among the organic compounds, KCN and KSCN among the inorganic compounds.
Benzer Tezler
- Yerel pazı (Beta vulgaris L. var. cicla) genotiplerinin agronomik özelliklerinin belirlenmesi
Determination of agronomic properties of local swiss chard (Beta vulgaris L. var. cicla) genotypes
EMRE DEMİREL
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
ZiraatEge ÜniversitesiBahçe Bitkileri Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MEHMET KADRİ BOZOKALFA
- Farklı tuz konsantrasyonlarına sahip sulama sularının pazının büyüme ve gelişimine olan etkileri
The effects of irrigation water having different salt concentration on the growth and development in chard
ŞÜKRÜ ÖZTÜRK
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
ZiraatNamık Kemal ÜniversitesiBahçe Bitkileri Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MURAT DEVECİ
- Peroksidazın üç fazlı ayırma yöntemi ile pazıdan (Beta vulgaris L.var. cicla) saflaştırılması
Purificaton of peroxidase from chard (Beta vulgaris L. var. cicla) by three phase partitioning method
MEHMET YAMAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
Biyokimyaİstanbul Üniversitesi-CerrahpaşaKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. REFİYE YANARDAĞ
- Sıçanlarda valproik asit ile oluşturulan toksisitede beyin hasarı üzerine pazının koruyucu etkileri
Protective effects of chard on brain damage in valproic acid induced toxicity in rats
ESRA ŞULE ÇİMEN
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
Biyokimyaİstanbul Üniversitesi-CerrahpaşaKimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. SEVİM TUNALI
- Giresun yöresindeki bazı yenilebilir bitkilerin farklı çözücülerdeki ekstrelerinin anti-üreaz aktivitelerinin incelenmesi
Investigation of anti-urease activities of extracts in different solvents of same edible plants in the region of giresun
YASEMİN ŞAHİN