Çeşitli kanser hücre dizilerinde CCT3 genini hedef alan miRNA'ların terapötik etkilerinin araştırılması
Investigation of the therapeutic effects of miRNAs targeting CCT3 gene in various cancer cell lines
- Tez No: 661367
- Danışmanlar: PROF. DR. EMEL ŞAHİN
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Genetik, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Apoptozis, Genler, Hücre dizisi, Kanser, Mikro RNA, Neoplazmlar, RNA, Apoptosis, Genes, Cell line, Micro RNA, Neoplasms, RNA
- Yıl: 2020
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Gaziantep Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Moleküler şaperon proteinleri ve hatalı protein katlanması kanser patogenezinde kritik bir rol oynamaktadır. Ökaryotik şaperonların sekiz alt ünitesinden biri olan CCT3, hücre bölünmesi, proliferasyon ve apoptozis yolağında görevli proteinlerin doğru katlanmasını katalizler. Ayrıca, CCT3 ifadesi karsinogenez ile uyumlu bir biçimde artmaktadır. Bununla birlikte, CCT3'ün kanserleşme sürecine nasıl etki ettiği henüz bilinmemektedir. Bu çalışmada, CCT3'ün apoptotik yolaklar ve hücre stresörleri ile arasındaki mekanistik ve fonksiyonel ilişki araştırılmıştır. İlk olarak, 16 farklı hücre hattının CCT3 gen ekspresyonu seviyeleri belirlenmiş ve CCT3 ifadesinin CRL-2329 ve PC-3 hücre hatlarında anlamlı olarak arttığı bulunmuştur. Daha sonra, miR-24-3p, miR-128-3p ve miR-149-5p mimikleri aracılığı ile CRL-2329 ve PC-3 hücre hatlarının CCT3 gen ekspresyonu baskılanmış ve acridin orange/ethidium bromide (AO/EB) ve AnnexinV/PI boyaması, hücre döngüsü ve mitokondri membran potansiyeli (MMP) analizi, hücre içi reaktif oksijen seviyesi (ROS) ölçümü ve apoptotik modülatör gen ekspresyon analizleri ile hücrelerin CCT3 baskılanmasına karşılık gelişen apoptotik yanıtlar ölçülmüştür. CCT3'ün baskılanmasından sonra, hücre döngüsünün G0/G1 fazında tutulduğu, MMP'nin bozulduğu ve hücre içi ROS seviyesinin arttığı görülmüştür. Bu apoptotik akış işaretleri morfolojik görüntülerle, apoptotik genlerin (FADD, CAS8, CAS3, P53, BAX, BCL-2, NOXA, CAS9, APAF1 ve CYCS) istatistiksel olarak artan ifadeleri ile ve hücre içi serbest amino asit profilindeki değişimlerle doğrulanmıştır. Çarpıcı bir şekilde, CCT3'ün baskılanması, enerji metabolizmasında rol alan glutamin, beta-alanin, glisin, serin, asparagin ve sarkozin aminoasit seviyelerinde değişikliğe yol açmıştır. Sonuç olarak, CCT3'ün miRNA mimik transfeksiyonu ile baskılanması, hücre içi ROS homeostazını ve enerji metabolizmasındaki serbest aminoasit profilini değiştirerek apoptozisi tetiklemiştir. Birlikte ele alındığında, CCT3'ün miRNA-aracılı baskılanmasının, ROS-aracılı geleneksel hücre toksisitesi yaklaşımının yanında enerji yoksunluğu etkisiyle“ikili terapötik strateji”sağlayabileceği ön görülmektedir.
Özet (Çeviri)
Molecular chaperone proteins and protein misfolding play a critical role in cancer pathogenesis. CCT3, one of the eight subunits of eukaryotic chaperons, catalyzes the correct folding of proteins involved in cell division, proliferation, and apoptosis pathways. Moreover, CCT3 expression is increased responsively with carcinogenesis. However, how CCT3 drives the cancerous process has not been known. In this study, the mechanistic and functional interactions among CCT3, apoptotic pathways and cell stressors were probed. First, CCT3 expression levels of different 16 cell lines were profiled and CCT3 expressions of CRL-2329 and PC-3 were found to be significantly increased. Then, CCT3 expressions of CRL-2329 and PC-3 lines were suppressed by miR-24-3p, miR-128-3p, and miR-149-5p mimics, and the apoptotic responses of the cell lines to the knockdown of CCT3 were measured by acridine orange/ethidium bromide and Annexin V/PI staining, cell-cycle and mitochondria membrane potential (MMP) analyses, intracellular reactive oxygen species (ROS) measurement and expression levels of the apoptotic gene. After having suppressed CCT3, the cell cycle was arrested in the G0/G1 phase, MMP was impaired, and the intracellular ROS level was increased. These signs of apoptotic flux were corroborated by morphological images, statistically enhanced expression levels of the apoptotic genes (FADD, CAS8, CAS3, P53, BAX, BCL-2, NOXA, CAS9, APAF1, and CYCS), and intracellular free amino acids profile. Strikingly, the suppressed-CCT3 shifted intracellular levels of glutamine, beta-alanine, glycine, serine, asparagine and sarcosine, which are employed in energy metabolism. Consequently, suppression of CCT3 by miRNA mimic transfection spurs apoptosis by unbalancing the homeostasis of intracellular ROS and the profile of free amino acids in energy metabolism. Taken together, it was anticipated that miRNA-mediated inhibition of CCT3 might provide“dual therapeutic strategy”through the conventional ROS-mediated cellular toxicity approach as well as energy withdrawal effect.
Benzer Tezler
- In-vitro evaluation cytotoxic potential of novel isoindole derivatives on various cancer cell lines
Çeşitli kanser hücre dizilerinde yeni izoindol türevlerinin sitotoksik potansiyelinin in-vitro değerlendirilmesi
EGEHAN YEMEZTAŞLICA YETİŞKİN
Yüksek Lisans
İngilizce
2021
Biyokimyaİzmir Yüksek Teknoloji EnstitüsüKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÜLŞAH ŞANLI MOHAMED
- Kardiyak glikozit aracılıklı sitotoksisite ile rho/rho kinaz yolağının olası bağlantısının kanser hücre dizilerinde incelenmesi
Investigation of the possible link between cardiac glycosides mediated cytotoxicity and RHO/RHO kinase pathway on cancer cell lines
AYSUN ÖZDEMİR
Doktora
Türkçe
2014
Eczacılık ve FarmakolojiGazi ÜniversitesiFarmakoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MUSTAFA ARK
- Stbm/vangl (strabismus/vangogh like) gen ekspresyonunun hepatosellüler kanser hücre dizilerinde hücre davranışı üzerine olan etkileri
The effects of stbm/vangl (strabismus/van gogh like) gene expression on cell behaviour in hepatocellular cancer cell lines
GÖKHAN OZAN ÇETİN
Doktora
Türkçe
2006
Tıbbi BiyolojiDokuz Eylül ÜniversitesiTıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF.DR. MERAL SAKIZLI
PROF.DR. UĞUR YILMAZ
- Tirozin kinaz inhibitörlerine duyarlı ve dirençli hücre dizilerinde sentetik kannabinoid ajanı JWH-073'ün antiproliferatif etkinliğininaraştırılması
Investigation of antiproli ferative effects of synthetic cannabinoid agent JWH073 in cell lines sensitive and resistant to tyrosine kinase inhibitors
HÜLYA ÇİNAR
Yüksek Lisans
Türkçe
2024
Tıbbi BiyolojiEge ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. BURÇİN KAYMAZ
- Meme kanseri hücre dizilerinde MYC ifadesine bağlı olarak değişen eksozom biyolojik etkinliğinin araştırılması
İnvestigation of MYC dependent biological effects of exosomes on breast cancer cell lines
BÜŞRA ÇELİKKAYA
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
OnkolojiPamukkale ÜniversitesiKanser Biyolojisi Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ ONUR TOKGÜN