Geri Dön

Endoplazmik retikulum stres modeli oluşturulan HTR-8/svneo insan trofoektoderm hücre hattında hücresel dinamiklerin moleküler araştırılması

Investigation the effects of endoplasmic reticulum stresss on intracellular dynamics in HTR-8/svneo human trophectoderm cell line

  1. Tez No: 663489
  2. Yazar: GURUR GARİP
  3. Danışmanlar: PROF. DR. AYŞEGÜL UYSAL
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Histoloji ve Embriyoloji, Histology and Embryology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2021
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Ege Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 133

Özet

İmplantasyon başarısızlığı patogenezi nedenlerinden olabileceği düşünülen ER stresinin implantasyondaki rolü henüz tam olarak ortaya konmamıştır. İmplantasyon penceresinin bileşenlerindeki moleküler mekanizmalar ve buradan yola çıkarak öncelikle embriyonun trofoektoderm hücrelerinin ER stresindeki moleküler değişikliklerinin aydınlatılması gerekmektedir. Bu tez çalışmasında insan trofoektoderm hücre hattı 2 boyutlu ve 3 boyutlu sferoid hücrelerinde endoplazmik retikulum ve kalsiyum üzerinden oluşturulan ER stresinin, hücre içi dinamiklerine ilişkin olarak ER stres, apoptoz, otofaji, hücre iskeleti, hipoksi, adezyon molekülleri mekanizmaları özelinde oluşturulan panellerde gen ekspresyon analizleri RT-qPCR ve aktif genlerle ilişkilendirilecek proteinlerin analizleri için immunfloresan boyama yöntemlerinden yararlanılarak araştırılması amaçlanmıştır. Çalışmada insan trofoektoderm hücreleri HTR-8/SVneo hücre hattı ile temsil edilerek 2 boyutlu ve insan embriyosundaki trofoektoderm tabakasındaki yapıyı taklit etmek amacıyla hücreler sferoid halinde kültür edilerek 3 boyutlu sferoid hücre kültürlerinde kontrol ve ilaç deney grupları oluşturuldu. Deney gruplarına ER stresi oluşturmak amacıyla Thapsigargin uygulama dozunu belirlemek için farklı doz ve saatlerde MTT, Tripan mavisi, Muse hücre canlılık analizleri yapıldı. 2 ve 3 boyutlu kontrol ve deney gruplarında gen ekspresyon analizleri için belirlenen 6 panelde 21 gen ifadelenmelerindeki değişim gerçek zamanlı RT-qPCR yöntemi gerçekleştirildi. Aktif genlere ilişkin protein analizleri için belirlenen 8 antikor immunfloresan boyama yöntemi ile boyanarak 2 ve 3 boyutlu örneklerin floresan mikroskop görüntüleri Image J programı ile değerlendirildi. Sonuç olarak, Thapsigargin'in HTR-8/SVNeo hücrelerinde endoplazmik retikulum kalsiyum homeostazını etkileyerek ER stres oluşumuna yol açtığı; oluşan ER stresin 2 ve 3 boyutlu hücrelerde davranış farklılıkları ortaya çıkararak apoptoz ve otofaji gibi sağkalım mekanizmalarında değişiklikler meydana getirdiği, hipoksi mekanizmasını etkilediği, hücre iskeleti ve hücre adezyon moleküllerinde hücre-hücre etkileşimlerinde değişikliklere yol açtığı saptanmıştır. Bu çıktılar doğrultusunda Thapsigargin ile hücre içi kalsiyum homeostazındaki değişikliklere bağlı olarak oluşan ER stresi insan trofoektoderm hücrelerindeki hücre içi dinamikler aydınlatılmış olup terapötik hedef moleküllerin implantasyon başarısını arttırabileceği düşünülmektedir.

Özet (Çeviri)

Endoplasmic reticulum stress is thought to be one of the causes of implantation failure pathogenesis and its role in implantation has not yet been fully lighted up. Molecular mechanisms in all components of the implantation window, based on this especially the molecular changes in ER stress of the trophectoderm cells of the embryo, should be clarified. In this thesis study, human trophectoderm cell line gene expression analyzes in panels created specifically for the mechanisms of ER stress, apoptosis, autophagy, cytoskeleton, hypoxia, adhesion molecules related to the intracellular dynamics of ER stress generated through endoplasmic reticulum and calcium channels in 2-dimensional and 3-dimensional spheroid cells RT-qPCR and proteins to be associated with active genes by using immunfluorescent staining methods. In this study, control and drug experimental groups were formed in 2-dimensional in the HTR-8/SVneo cell line representing human trophoectoderm cells and in 3-dimensional spheroid cell cultures that cultured as spheroids to mimic the structure in the trophectoderm layer of the human embryo. MTT, Trypan blue, Muse cell viability analyzes were performed at different doses and times to determine the application dose of Thapsigargin, which was administered to experimental groups to create ER stress. Real time RT-qPCR method was performed to change 21 gene expressions in 6 panels determined for gene expression analysis in 2 and 3-dimensional control and experimental groups. Eight antibodies determined for protein analysis for active genes were stained by immunofluorescent staining method. Fluorescence microscope images of 2 and 3- dimensional samples were evaluated with Image J program. As a result, it was found that Thapsigargin caused ER stress creation by affecting endoplasmic reticulum calcium homeostasis in human trophectoderm HTR-8/SVneo cells; the resulting ER stress caused changes in the survival mechanisms such as apoptosis and autophagy by revealing behavioral differences in 2 and 3-dimensional cells, affected the mechanism of hypoxia, and caused changes in the cell-cell interactions in the cytoskeleton and cell adhesion molecules. In line with the outcomes of this thesis project, the intracellular dynamics in ER stress human trophectoderm cells caused by changes in intracellular calcium homeostasis with Thapsigargin, and it is thought that therapeutic target molecules can increase the success of implantation.

Benzer Tezler

  1. Endoplazmik retikulum stres modeli oluşturulan insan meme kanseri (MCF-7) hücrelerinde linearolün endoplazmik retikulum stres markerleri üzerine etkilerinin araştırılması

    IInvestigate the effects of linearol on the endoplasmic reticulum markers by using the endoplasmic reticulum stress generated model of human breast cancer cells (MCF-7).

    HALİL TURHAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    BiyolojiAfyon Kocatepe Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. İBRAHİM HAKKI CİĞERCİ

  2. Endoplazmik retikulum stres modeli oluşturulan fare ovaryumlarında katlanmamış protein yanıtının araştırılması

    Investigation of unfolded protein response in mouse ovaries created with an endoplasmic reticulum stress model

    GİZEM ÖZTAŞ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    Histoloji ve EmbriyolojiEge Üniversitesi

    Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. AYŞEGÜL UYSAL

  3. Dapagliflozin ve trimetazidin'in tip 1 diyabetli sıçanlarda doksorubusine bağlı kardiyak disfonksyon üzerine endoplazmik retikulum stresi yoluyla kardiyoprotektif etkileri

    Cardioprotective effects of dapagliflozin and trimetazidine on doxorubusin-induced cardiac dysfunction in rats with type 1 diabetes through endoplasmic reticulum stress

    MUHAMMED MÜRSEL ÖĞÜTVEREN

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    KardiyolojiSağlık Bakanlığı

    Kardiyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ÖMER ŞATIROĞLU

  4. Deneysel diyabet modelinde beyin ve karaciğer dokusunda koenzim Q10'nun oksidatif stres ve endoplazmik retikulum stresi üzerine etkisi

    The effect of coenzyme Q10 on oxidative stress and endoplasmic reticulum stress in brain and liver tissue in experimental diabetes model

    MUHAMMET SAİT TOPRAK

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2020

    Biyokimyaİstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa

    Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. HÜSEYİN AVNİ SÖNMEZ

  5. Ratlarda oluşturulan deneysel sepsis modelinde kurkuminin over üzerine etkisinin araştırılması

    Investigation of the effect of curcumin on the ovary in an experimental sepsis model in rats

    BETÜL AHMAD

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    Histoloji ve EmbriyolojiAtatürk Üniversitesi

    Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. TUBA DEMİRCİ