Geri Dön

Mürdüm eriğinden (Prunus insititia) polifenol oksidaz enziminin saflaştırlması ve karakteriazsyonu

Purification and characterization of polyphenol oxidase enzyme from damson plum (Prunus insititia)

PDF İndir

  1. Tez No: 682272
  2. Yazar: SELİNNUR YILDIZ
  3. Danışmanlar: PROF. DR. EMİNE KARAKUŞ, DR. ÖĞR. ÜYESİ ÇİĞDEM BİLEN
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2021
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Yıldız Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Biyokimya Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 78

Özet

Polifenol oksidaz (PFO) enzimi, monofenollerin o-difenollere hidroksilasyonu ve odifenollerin o-kinonlara oksidasyon reaksiyonlarını katalizleyen bir oksidoredüktaz enzimi olup, meyve ve sebzelerde esmerleşme reaksiyonlarını gerçekleştirir. Enzim kaynağı olarak çalışmamızda yüksek oranda fenolik madde ve antioksidan aktiviteye sahip olan Prunus insititia mürdüm eriği kullanılmıştır. Çalışmamızın ilk aşamasında, Prunus insititia mürdüm eriğinden sırasıyla, % 0-80 amonyum sülfat çöktürmesi ve diyaliz işlemleri ile kısmi saflaştırılan polifenol oksidaz enzim ekstraktı (KSP) elde edilmiştir. Prunus insititia KSP enzimi kullanılarak, maksimum enzim aktivitesinin gözlendiği optimum reaksiyon koşullarının belirlenmesi amacıyla karakterizasyon çalışmaları yapılmıştır. Enzimin katekol, 4-metil katekol, progallol ve kafeik asit substratları için elde edilen optimum koşullar sırasıyla; 0,05M/ pH:7,2/ 25°C; 0,2M/ pH:4,5/ 10°C; 0,01M/ pH:6,8/ 5°C ve 0,2M/ pH:8,5/ 10°C olarak belirlenmiştir. Enzimin her bir substratı için hesaplanan Vmax ve KM kinetik sabitleri ise aynı substratlar için sırasıyla; 17219,97 U/(mL*dk) ve 11,67mM; 7309,73 U/(mL*dk) ve 5mM; 12580,12 U/(mL*dk) ve 3,75mM; 12100,41 U/(mL*dk) ve 6,25mM olarak hesaplanmış ve katekol substratı ile ölçülen PFO enzim aktivitesi diğer substratlarla kıyaslandığında, en yüksek Vmax değerini verdiği belirlenmiştir. İkinci aşamada, KSP enzim ekstraktından Sefaroz 4B-L-tirozin-p-amino benzoik asit ve Sefaroz 6B-L-tirozin-p-amino benzoik asit afinite jelleri kullanılarak, afinite kromatografisi ile saflaştırma işlemi yapılmıştır. Her iki afinite jeli ile saflaştırılan Prunus insititia PFO enzim çözeltileri sırasıyla, SDS poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) ve doğal jel elektroforezine (NATIVE PAGE) uygulanarak yaklaşık 50-55 kDa civarında tek band gözlenmiştir. Sepharose-4B-L-tirozin-p-amino benzoik asit ve Sepharose-6B-L-tirozin-p-amino benzoik asit afinite jelleri kullanılarak saflaştırılan Prunus insititia PFO enzimi için sırasıyla, 90,01 ve 10,18 kat saflaştırma derecesi elde edilmiştir. Sefaroz 6B-L-tirozin-p-amino benzoik asit afinite jeli ile yapılan herhangi bir saflaştırma işlemine ve PFO enziminin Prunus insititia mürdüm eriğinden afinite kromatografisi ile saflaştırılmasına literatürde rastlanmadığından, bu çalışma ile literatüre yeni bir jel ve afinite kromatografisinde yeni bir PFO enzim kaynağı kazandırılmıştır.

Özet (Çeviri)

Polyphenol oxidase (PPO) enzyme performs browning reactions in fruits and vegetables that catalyzes the hydroxylation of monophenols to o-diphenols and the oxidation reactions of o-diphenols to o-quinones as an oxidoreductase enzyme. Prunus insititia damson, which has a high rate of phenolic substances and antioxidant activity, was used as an enzyme source in this study. In the first stage of our study, partially purified polyphenol oxidase enzyme extract (PPE) was obtained from Prunus insititia damson plum by the processes 0-80% ammonium sulfate precipitation and dialysis processes, respectively. Characterization studies were carried out by using Prunus insititia PPE enzyme for the aim of the determination the optimum reaction conditions in which maximum enzyme activity was observed. The optimum conditions were obtained by using catechol, 4-methyl catechol, pyrogallol and caffeic acid substrates as 0.05M/ pH:7.2/ 25°C; 0.2M/ pH:4.5/ 10°C; 0.01M/ pH:6.8/ 5°C and 0.2M/ pH:8.5/ 10°C, respectively. The kinetic constants of Vmax and KM calculated for the same substrates as 17219.97 U/(mL*min) and 11.67mM; 7309.73 U/(mL*min) and 5mM; 12580.12 U/(mL*min) and 3.75mM; 12100.41 U/(mL*min) and 6.25 mM, respectively. It was determined that PPE enzyme activity was measured by using catechol substrate gave the highest Vmax value when compared to other substrates. In the second step, purification was performed in terms of affinity chromatography by using Sepharose 4B-L-tyrosine-p-amino benzoic acid and Sepharose 6B-Ltyrosine-p-amino benzoic acid affinity gels from PPE enzyme extract. Prunus insititia PPO enzyme solutions purified by both affinity gels were applied to SDS polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and native gel electrophoresis (NATIVE PAGE), respectively, and a single band of approximately as 50-55 kDa was observed. 90.01 and 10.18 purification degrees were obtained for Prunus insititia PPO enzyme by using Sepharose-4B-L-tyrosine-p-amino benzoic acid and Sepharose-6B-L-tyrosine-p-amino benzoic acid affinity gels, respectively. Since no any purification process with Sepharose 6B-L-tyrosine-p-amino benzoic acid affinity gel and any purification by affinity chromatography of PPO enzyme from Prunus insititia damson were found in the literature, an original gel and a new PPO enzyme source in affinity chromatography were gained to the literature in this study.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    762960

    Mürdüm eriğinin (Prunus insititia L.) antioksidatif, antidiabetik ve antibakteriyel özelliklerinin belirlenmesi

    Determination of antioxidative, antidiabetic and antibacterial properties of mürdüm plum (Prunus insititia L.)

    BÜŞRA BOZKURT

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    Gıda MühendisliğiAdana Alparslan Türkeş Bilim Ve Teknoloji Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. AYSUN ŞENER GEDÜK

  2. Tez No

    259545

    Eriğin (Prunus domestica) osmotik dehidrasyon parametrelerinin ve kurumaya etkisinin incelenmesi

    Investigation of osmotic dehydration parameters of plum (Prunus domestica) and theirs? effect on drying

    SABİRE ERÜNAL

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2010

    Gıda MühendisliğiAfyon Kocatepe Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. İNCİ TÜRK TOĞRUL

  3. Tez No

    474129

    Eriğin kurutulmasında mikrodalga tekniğinin ürün kalitesi üzerine etkilerinin belirlenmesi

    Determination of the effects on product quality of microwave technology in plum drying

    DİLAY KART

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    Gıda MühendisliğiCelal Bayar Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. ÖZLEM ÇAĞINDI

  4. Tez No

    654960

    Farklı kurutma yöntemlerinin erik meyvesinin fizikokimyasal özellikleri ve biyoaktif maddelerinin sindirilebilirliği üzerine etkisi

    The effect of different drying methods on the physicochemical properties and the digestibility of bioactive substances of plum fruit

    ELİF YENER

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2020

    Gıda MühendisliğiYıldız Teknik Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. AYŞE KARADAĞ

  5. Tez No

    255475

    Ayçiçeği, keten tohumu, yulaf ve mürdüm eriği kurusu ile zenginleştirilmiş sütlü, acı (bitter) ve beyaz çikolataların raf ömrü boyunca bazı fiziksel, kimyasal ve duyusal özelliklerinin araştırılması

    Investigation of some physical, chemical and sensory properties of sunflower seed, flax seed, oat and dried damson plum enriched milk, dark and white chocolates during shelf life

    ÖZLEM ÇAĞINDI

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2009

    Gıda MühendisliğiEge Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SEMİH ÖTLEŞ

Geri Dön