Investigating the function of Cx26-I30N and D50Y mutations in squamous cell carcinoma cell line SCC-25
Skuamöz hücreli karsinom hücre hattı SCC-25'de Cx26-I30N ve D50Y mutasyonlarının fonksiyonunun araştırılması
- Tez No: 684200
- Danışmanlar: DOÇ. DR. GÜLİSTAN MEŞE ÖZÇİVİCİ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Genetik, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2021
- Dil: İngilizce
- Üniversite: İzmir Yüksek Teknoloji Enstitüsü
- Enstitü: Mühendislik ve Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Oluklu bağlantılar çok hücreli canlılarda, hücre homeostazından sorumludur ve hücre-hücre ve hücre-ECM iletişimini sağlar. Oluklu bağlantı yarıkanalları, insan fizyolojisi için çok önemli olan işlevleri olan connexin (Cx) proteinlerinden oluşur. Ayrıca, Cx mutasyonları çeşitli genetik hastalıklarla ilişkilidir. Örneğin, Cx26 genindeki 10'dan fazla hatalı mutasyon, Keratit-İktiyozis-Sağırlık (KID) sendromuna neden olur. Bunlar arasında Cx26-I30N ve Cx26-D50Y anormal yarı kanallar oluşturarak hücre içine aşırı kalsiyum girişine izin verir. Ayrıca, KID hastalarında skuamöz hücreli karsinom (SCC) insidansı daha yüksektir ve bu hastalarda SCC daha erken yaşta görülür. İmmünohistokimya boyamaları, KID hastalarının örneklerinde anormal E-cadherin ve B-catenin yayılımı göstermiştir. Bu çalışmada, insan epitelyal SCC hücre hattı SCC-25'te KID sendromu ile ilişkili Cx26-I30N ve Cx26-D50Y mutasyonlarının etkilerini araştırmayı amaçladık. Bu amaçla stabil MSCV, Cx26-WT, Cx26-I30N ve Cx26-D50Y hücre hatları oluşturuldu ve ekspresyon seviyesi, lokalizasyon ve canlılık analizi için RT-qPCR, Western blot, immün boyama ve MTT testleri yapıldı. Bu 4 farklı hücre durumu için Cx26 mRNA seviyelerinde önemli bir artış tespit edildi, ancak protein seviyelerinde tespit edilmedi. Epitel dokusunda bol olan ve Cx26 gibi perinükleer bölgede lokalize olan Cx43 düzeyinde fark bulunmadı. Ek olarak, mutasyonlara paralel olarak E-cadherin protein seviyeleri artmış ve lokalizasyonları perinükleer alandan plazma membranına doğru değişmiştir. Ayrıca, Ca2+'suz ortamda büyütülen hücrelerin aksine, kontrole kıyasla yüksek hücre dışı Ca2+ ortamında büyütülen hücrelerde canlılıkta önemli düşüşler gözlendi.
Özet (Çeviri)
Gap junctions are responsible for cell homeostasis and provide cell-cell and cell-ECM communications in multicellular organisms. Gap junction hemichannels consist of connexin (Cx) proteins which functions are crucial for human physiology. Moreover, Cx mutations are associated with various genetic diseases. For example, more than 10 missense mutations in the Cx26 gene cause keratitis-ichthyosis-deafness (KID) syndrome. Among these, Cx26-I30N and Cx26-D50Y cause to form abnormal hemichannels and allow excessive calcium influx into the cell. Furthermore, KID patients have higher squamous cell carcinoma (SCC) incidence and SCC is seen at an earlier age in these patients. Immunohistochemistry stainings have demonstrated aberrant E-cadherin and B-catenin spread in KID patients' samples. In this study, we aimed to effects of Cx26-I30N and Cx26-D50Y mutations associated with KID syndrome in human epithelial SCC cell line SCC-25. For this purpose, stable MSCV, Cx26-WT, Cx26-I30N and Cx26-D50Y cell lines were generated and RTqPCR, Western blotting, immunostaining and MTT assays were done for expression level, localization and viability analysis. For these 4 different cell conditions, a significant increase was detected at Cx26 mRNA levels, but not at protein levels. No difference was found in Cx43 level, which is abundant in epithelial tissue, and was localized in the perinuclear area like Cx26. Additionally, E-cadherin protein levels increased and their localization changed in parallel with the mutations from the perinuclear area to the plasma membrane. Moreover, significant decreases in viability were observed in cells grown in high extracellular Ca2+ medium compared to control in contrast to cells grown in Ca2+-free medium.
Benzer Tezler
- Investigating the role of connexin 32 in breast cancer
Meme kanserinde connexin 32'nin rolünün araştırılması
DENİZ UĞUR
Doktora
İngilizce
2020
Biyolojiİzmir Yüksek Teknoloji EnstitüsüMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. GÜLİSTAN MEŞE ÖZÇİVİCİ
- Seri bağlı geri devirli aktif çamur sistemlerinde biyolojik kalıcı ürün oluşumunun modellenmesi
Modelling of biological microbial product formation in activated sludge systems in series with recycle
FEHİMAN ÇİNER
- Investigating the function of ERCC1 in the control of DNA damage response and cell survival
ERCC1'in DNA hasar yanıtı ve hücre sağkalım kontrolündeki işlevinin araştırılması
ŞULE ERDEMİR SAYAN
Doktora
İngilizce
2024
BiyokimyaGebze Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. TAMER YAĞCI
- Investigating the oncogenic function of brain specific cyp4x1 gene in glioblastoma cancer cells using RNA-i mediated gene repression strategy
Glioblastom kanser hücrelerinde beyine özgü cyp4x1 geninin onkojenik fonksiyonunun RNA-i aracılı gen susturma stratejisiyle incelenmesi
ÖZLEM DURUKAN
Doktora
İngilizce
2023
BiyokimyaOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. ORHAN ADALI
PROF. ŞEVKİ ARSLAN
- Investigating the emotion regulation function of episodic counterfactual thinking in an emotional context
Duygusal bağlamda epizodik karşı-olgusal düşüncelerin duygu düzenleme fonksiyonlarının incelenmesi
EMİNE ŞEYMA ÇAĞLAR KURTULMUŞ
Yüksek Lisans
İngilizce
2023
PsikolojiKadir Has ÜniversitesiPsikoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. SEZİN ÖNER YAMAN
