Tetrahymena thermophila'da nöroprotektif potansiyeli olan bir insan proteininin rekombinant üretimi
Tetrahymena thermophila'da nöroprotektif potansiyeli olan bir insan proteininin rekombinant üretimi
- Tez No: 684300
- Danışmanlar: DOÇ. DR. MUHİTTİN ARSLANYOLU
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biyomühendislik, Biyoteknoloji, Biology, Bioengineering, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2021
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Eskişehir Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Lisansüstü Eğitim Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: İleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Biyoteknoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 139
Özet
Moleküler biyoteknoloji çağının başlamasıyla birlikte rekombinant DNA yöntemleri ile geliştirilen organizmal platformlarda terapötik ilaçların üretiminde artış gözlenmiştir. Bu tez kapsamında alternatif protein üretim konakçısı ökaryotik tek hücreli, silli Tetrahymena thermophila'da insan terapötik proteinlerinden nöroprotektif etki potansiyeli olan bir rekombinant proteinin üretimi amaçlanmıştır. Glikozile bir protein olan bu proteinin birincil görevi hematokrit (alyuvar üretimini arttırıcı) etki olsa da özellikle glikozil çatallarındaki sialik asit kalıntılarının uzaklaştırılması ile ikincil görevi olan koruyucu-yenileyici etkisi (sinir, kalp ve böbrek dokularında) ortaya çıkmaktadır. Bu tez çalışması ile Tetrahymena thermophila'da O-glikozilasyon, sialik asit, galaktoz ve fukoz içermeyen iki çatallı N-glikozilasyonlu özgün yapıda bir rekombinant protein üretiminin organizma biyolojisi ile gerçekleşebileceği hipotezlenmiştir. TtAC2.1 vektöründeki HSP70.2 promotörünün ısı şoku ile indüklenmesiyle, Tetrahymena thermophila hücrelerinde proteinin glikozile formda hücre dışına salgılatılarak üretilebildiği sırasıyla; Ni-NTA afinitik saflaştırma, PNGase F enzimiyle N-glikozilasyon çatalı kesimi ve Western blot analizleri ile gösterilmiştir. Hücre koruyucu-yenileyici etkisi tanımlanabilmesi durumunda üretilen proteinin sinir sistemi hastalıklarının (ALS, parkinson, alzheimer vb.) tedavisinde terapötik ajan olarak kullanımı hedeflenmektedir.
Özet (Çeviri)
The production of therapeutic drugs has been accelerated drastically in the organismal platforms developed by recombinant DNA methodswith the beginning of the molecular biotechnology era. In this thesis, a human protein with neuroprotective potential, which is one of the human therapeutic proteins, is aimed to be produced in an alternative protein production host, eukaryotic unicellular ciliate Tetrahymena thermophila. Although the hematocrit effect (increasing red blood cell production) of this glycosylated protein is considered as the main function, it also shows protective-regenerative effect on the nerve, heart, and kidney tissues, especially with the lack of sialic acid residues in the glycan structure. It was hyphothesised that the production of the novel recombinant protein in Tetrehymena thermophila consisted of a bi-positional N-glycosylation structure without sialic acid, galactose and fucose residues depending on the organism's biology in this thesis. Ni-NTA affinity purification, cleavage of N-glycoside bond by PNGase F enzyme, and Western blot analyzes shown that the protein could be produced by Tetrahymena thermophila cells and secreted externally in glycosylated form by means of the heat shock induction of the HSP70.2 promoter in the TtAC2.1 vector. If its cell-protective-regenerative effect can be defined undoubtedly, Tt-EPO can be used as a therapeutic agent in the treatment of nervous system related diseases (e.g. ALS, Parkinson's, Alzheimer's).
Benzer Tezler
- Tetrahymena thermophila'ya kodon uyumu yapılmış superfolder GFP (sfGFP)'nin T. thermophila'da rekombinant protein üretimi ve flüoresan özelliğinin karakterizasyonu
Recombinant protein production of codon adapted superfolder GFP (sfGFP) in Tetrahymena thermophila and its fluorescence characterization
GÜRKAN YILMAZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
BiyolojiAnadolu Üniversitesiİleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. MUHİTTİN ARSLANYOLU
- Tetrahymena thermophila'da rekombinant ilaç üretim verimliliğini düşürebilecek bir proteaz geninin gen silme yöntemiyle genomdan silinmesi ve karakterizasyonu
Elimination and characterization of a Tetrahymena thermophila protease gene that can reduce recombinant drug production efficiency by gene knock-out method
ŞEYMA DURAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
BiyolojiEskişehir Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MUHİTTİN ARSLANYOLU
- Tetrahymena thermophila'da afinitik takılı insan büyüme hormonu'nun tetrahymena yapay koromozom vektör altyapısı ile rekombinant üretimi, saflaştırılması ve karakterizasyonu
Recombinant production, purification and characterization of affinity-tagged human growth hormone with tetrahymena artificial chromosome vector system in tetrahymena thermophila
MEHMET ÇALISEKİ
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
BiyolojiEskişehir Teknik Üniversitesiİleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MUHİTTİN ARSLANYOLU
- Bioinformatics analysis and gene expression profile of one of the topoisomerase enzymes in Tettrahymena thermophila
Tetrahymena thermophila 'da bulunan topoizomeraz enzimlerinden birinin biyoinformatik analizi ve gen ekspresyon profili
HÜSNA KARABOĞA
Yüksek Lisans
İngilizce
2012
BiyolojiFatih ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. SEVİM IŞIK
ÖĞR. GÖR. MEHMET TAHA YILDIZ
- Tetrahymena thermophila programlı çekirdek ölümünde rol alan dnaz enzimlerinin kimliklendirilmesi ve moleküler karakterizasyonu
Identification and molecular characterizaton of dnase enzymes involved in programmed nuclear death of Tetrahymena thermophila
ERHAN ASLAN
Doktora
Türkçe
2021
BiyokimyaEskişehir Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MUHİTTİN ARSLANYOLU