Selülaz enziminin sulu ikili-faz ekstraksiyon sistemleri ile saflaştırılması ve karakterizasyonu
Purifacation and characterization of cellulase enzyme by aqueous two-phase extraction systems
- Tez No: 691514
- Danışmanlar: PROF. DR. SEÇİL ÖNAL
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2021
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ege Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 203
Özet
Selülazlar (endoglukanaz, ekzoglukanaz ve β-glukozidaz, EC 3.2.1.4) endüstriyel alanda özellikle tekstil, kâğıt, deterjan ve gıda endüstrisinde kullanılan hidrolitik enzimlerdir. Protein ve enzim saflaştırılması işlemlerinde kullanılan pek çok biyokimyasal izolasyon ve saflaştırma metodu mevcut olmasına rağmen afiniteye dayalı yeni bir teknik olan sulu ikili-faz sistemleri (Aqueous two-phase systems, ATPS) son yıllarda enzim saflaştırılmasında sıklıkla kullanılmaktadır. Bu çalışmada, selülaz enzimi bezelyeden (Pisum sativum ) ekstrakte edilerek PEG/Tuz sulu ikili faz sistemi ile saflaştırıldı ve karakterize edildi. Sulu ikili-faz sisteminin optimizasyonu gerçekleştirilmiş, enzim aktivitesine etki eden bazı parametrelerin etkisi incelenerek kararlılık testleri (termal, pH, depo) yapılmıştır. Enzim aktivitesi dinitrosalisilik asit (DNS) metodu ile, protein tayini ise Bradford metodu ile gerçekleştirilmiştir. %15 (w/w) PEG-6000, %10 (w/w) Na2SO4 (pH 6,0, 25 ⁰C) kullanılarak hazırlanan sulu ikili-faz sisteminde selülaz enzimi tuzca zengin alt fazda toplandı ve 2 kat saflaştırıldı. Enzimin optimum pH ve sıcaklığı ise sırasıyla pH 4.5 ve 55⁰C olarak belirlendi. Enzimin KM ve Vmax değerleri sırasıyla 1,7 g/mL ve 37,2 U olarak belirlendi. Polimer-tuz tabanlı ATPS ile saflaştırılan bezelye selülazı geniş bir pH ve sıcaklık aralığında oldukça kararlı bir enzimdir. Geleneksel metodlara kıyasla, selülazın saflaştırılmasında kullanılan bu tek adımlı ekstraksiyon metodu basit, ekonomik ve etkili bir metod olup hazırlanan enzim preparatı ise sahip olduğu katalitik özellikleri bakımından gıda ve yem sanayindeki uygulamalarında kullanılabilecek uygun bir preparattır.
Özet (Çeviri)
Cellulases (endoglucanase, exoglucanase and β-glucosidase, EC 3.2.1.4) are hydrolytic enzymes that used in the industrial area, especially in the textile, paper, detergent and food industry. Although there are many biochemical isolation and purification methods used in protein and enzyme purification processes, Aqueous two-phase systems (ATPS), a new technique based on affinity, has been frequently used in enzyme purification in recent years. In this study, cellulase was extracted from pea (Pisum sativum) and purified by using a PEG/Salt aqueous two-phase system and characterized. Optimization of the aqeous two-phase system was carried out and stability tests (thermal, pH and storage) were performed by examining the effect of some parameters affecting enzyme activity. The enzyme activity and protein amount were determined by the dinitrosalicilic acid and Bradford methods, respectively. The cellulase enzyme was partitioned in the salt-rich bottom phase of % 15 (w/w) PEG-6000, % 10 (w/w) Na2SO4 (pH 6.0, 25⁰C) aqueous two-phase system and purified with 2 fold. The optimum pH and temperature were determined as to be pH 4.5 and 55⁰C, respectively. The KM ve Vmax values were found as 1,7 g/mL and 37,2 U, respectively. The pea cellulase purified with a polymer-salt based ATPS is a very stable enzyme over a wide range of pH and temperature. Compared to the traditional methods this single-step extraction method used in purification of cellulase is a simple, economical and effective method. The enzyme is a suitable preparation that can be used in food and feed applications due to its catalytic properties.
Benzer Tezler
- Lignoselulozik biyokütlenin immobilize enzim ile hidroliz kinetiğinin incelenmesi ve bazı hidroliz ürünlerinin değerlendirilmesi
Investigation of the hydrolysis kinetics of lignocellulosic biomass with immobilized enzyme and evaluation of some hydrolysis products
SEDA ÇINAR
Doktora
Türkçe
2024
BiyokimyaManisa Celal Bayar ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. TÜLİN AYDEMİR
- Bacillus megaterium M22'den lipaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu
Purification and characterization of the lipase enzyme from Bacillus megaterium M22
REFİYE TEKİNER
- Pektin-hidroksipropil metil selüloz (HPMC) taşıyıcı sistemlerin geliştirilmesi ve kolona taşınması
Development of pectin-hydroxypropyl methyl cellulose (HPMC) systems and delivering to the colon
TİMUÇİN UĞURLU
Yüksek Lisans
Türkçe
2001
Eczacılık ve FarmakolojiMarmara ÜniversitesiFarmasötik Teknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ.DR. MURAT TÜRKOĞLU
- Kazeinomakropeptid içeren puding formülasyonunun geliştirilmesi
Development of formulation of pudding containing caseinomacropeptide
MAHDI DERAZSHAMSHIR
Yüksek Lisans
Türkçe
2017
Gıda Mühendisliğiİstanbul Teknik ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MERAL KILIÇ AKYILMAZ
- Patates kabuğu, kolza tohumu, karanlık ve aydınlıkta yetiştirilmiş kolza filizlerinden asit fosfataz enziminin kısmi saflaştırılması
The Study of the properties of acid phosphatase enzyme obtained from potato skin, rapeseed and rapeseed germs
YEŞİM TANIK AYKANAT
Yüksek Lisans
Türkçe
2001
Kimya Mühendisliğiİstanbul Teknik ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. YÜKSEL AVCIBAŞI GÜVENİLİR