Geri Dön

Termofilik bir küf olan Scytalidium thermophilum'dan proteaz enziminin üretimi, saflaştırılması ve kısmi karakterizasyonu

Production, purification and partial characterization of protease enzyme from thermophilic fungus Scytalidium thermophilum

  1. Tez No: 702650
  2. Yazar: GÜLEN SİNEM İNCİ
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. YONCA YÜZÜGÜLLÜ KARAKUŞ
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyokimya, Biyoloji, Mikrobiyoloji, Biochemistry, Biology, Microbiology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2021
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Kocaeli Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 76

Özet

Protein yapısındaki peptit bağlarının hidrolizinden sorumlu olan proteazlar, oldukça geniş bir grubu temsil etmektedir. Çalışmada, termofilik bir küf olan Scytalidium thermophilum'dan hücre dışı proteaz enziminin optimum fermantasyon koşullarında üretimi, saflaştırılması ve kısmi karakterizasyonu amaçlandı. Buna göre, %4 (a/h) glukoz, %1 (a/h) maya ekstraktı, %0,05 (a/h) MgSO4.7H2O, %0,04 (a/h) KCl ve %0,1 (a/h) K2HPO4 içeren 250 mL YpSS Broth besiyerinde büyütülen mikroorganizmadan üç günlük fermantasyon sonunda hücreler uzaklaştırılarak ham enzim ekstraktı elde edildi. Saflaştırma hem klasik kromatografi hem de sulu ikili faz sistemi (ATPS) uygulanarak gerçekleştirildi ve saflaştırma bulguları karşılaştırıldı. ATPS'ye maruz bırakılan ham ekstrakt örneğinden 5,1-kat ve %78 aktivite geri kazanımla proteaz enzimi saflaştırıldı. HiPrep Q XL (16/10) kolonundan ise proteaz enzimi %22 geri kazanımla yaklaşık 3-kat saflaştırıldı. SDS-PAGE'de her iki yolla saflaştırılan proteaz örneğine ait tek bant gözlendi, protein bandının molekül ağırlığı ⁓80 kDa olarak hesaplandı. Enzimin optimum sıcaklık ve pH değerleri sırasıyla 60 °C ve 8,0 olarak tespit edildi. Kararlı olduğu sıcaklık aralığı 30–60 °C, pH aralığı ise 4,0–9,0 olarak belirlendi. S. thermophilum'dan ilk defa bu çalışmada saflaştırılan proteaz enziminin sıcaklık ve pH değişimlerine gösterdiği kararlılık, enzimin farklı endüstriyel uygulamalarda kullanımına yatkın olduğuna işaret etmektedir

Özet (Çeviri)

Proteases, which are responsible for the hydrolysis of peptide bonds in the protein structure, represent a very large group of enzymes. In this study, it was aimed to produce, purify and partially characterize extracellular protease enzyme from a thermophilic fungus, Scytalidium thermophilum, under optimum fermentation conditions. For this purpose, S. thermophilum was grown in 250 mL of YpSS Broth medium including 4% (w/v) glucose, 1% (w/v) yeast extract, 0.05% (w/v) MgSO4.7H2O, 0.04% (w/v) KCl and 0.1% (w/v) K2HPO4. After three days of fermentation, the cells were removed and crude enzyme extract was obtained. Purification was carried out using both conventional chromatography and aqueous two-phase partitioning system (ATPS), and purification parameters observed were compared. The protease enzyme was purified with a 5.1-fold and 78% activity recovery from ATPS. With HiPrep Q XL (16/10) column, purification fold and activity recovery values were 3-fold and 22%, respectively. The purity was checked with SDS-PAGE analysis where a single band corresponding to ⁓80 kDa was observed. The optimum temperature and pH values of the purified enzyme were determined as 60 °C and 8.0, respectively. The enzyme was found stable in a temperature range of 30–60 °C, while it was stable in pH values varying from 4.0 to 9.0. The stability of the S. thermophilum protease enzyme, purified here for the first time, against different temperature and pH values, indicates that the enzyme has a potential for its use in different industrial applications.

Benzer Tezler

  1. Scytalidium thermophilum'dan ksi̇lanaz üreti̇mi̇ni̇n opti̇mi̇zasyonu, endüstri̇yel uygulamalar i̇çi̇n saflaştirilmasi ve karakteri̇zasyonu

    Optımızatıon of xylanase productıon from scytalıdıum thermophılum, purıfıcatıon and characterızatıon for ındustrıal applıcatıons

    NESLİHAN ÖZBEN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    BiyolojiKaramanoğlu Mehmetbey Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. DİDEM SUTAY KOCABAŞ

  2. Scytalidium thermophilum ksilanazının kromatografik yöntemlerle saflaştırılması ve biyokimyasal karakterizasyonu

    Purification of Scytalidium thermophilum xylanase by chromatographic methods and biochemical characterization

    SEVGİ GÜDER

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    BiyokimyaKaramanoğlu Mehmetbey Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. DİDEM SUTAY KOCABAŞ

  3. Purification, characterization, crystallization and preliminary x-ray structure determination of scytalidium thermophilum bifunctional catalase and identification of its catechol oxidase activity

    Scytalıdıum thermophılum çift fonksiyonlu katalazının saflaştırılması, karakterizasyonu, kristalizasyonu, ilk aşama x-ışını yapısının belirlenmesi ve katekol oksidaz aktivitesinin tanımlanması

    DİDEM SUTAY

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2007

    Kimya MühendisliğiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. UFUK BAKIR

    PROF. ZÜMRÜT BEGÜM ÖGEL

  4. Scytalidium thermophilum polyphenol oxidase: Production and partial characterization

    Scytalidium thermophilum polyphenol oxidase: Üretimi ve kısmi karakterizasyonu

    SİBEL METE

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2003

    BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ZÜMRÜT ÖĞEL

    PROF. DR. UFUK BAKIR

  5. Cloning of the Scytalidium thermophilum bifunctional catalase/phenol oxidase gene and expression in Aspergillus sojae

    Scytalidium thermophilum çift aktiviteli katalaz/fenoloksidaz geninin klonlanması ve Aspergillus sojae'de heterolog ifadesi

    HATİCE ÖZLEM ERÇİN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2008

    BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. UFUK BAKIR

    PROF. DR. ZÜMRÜT BEGÜM ÖGEL