Glutatyon redüktaz enziminin koyun dalak dokusundan saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı antibiyotiklerin enzim aktivitesi üzerine etkilerinin araştırılması
Purification, characterization of glutathion reductase enzyme from sheep splen tissue and investigation of the effects of some chemical substances on enzyme activity
- Tez No: 714235
- Danışmanlar: PROF. DR. MEHMET ÇİFTCİ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2022
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Bingöl Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 111
Özet
Bu çalışmada antioksidan metabolizmasının kilit enzimi olan Glutatyon redüktaz (EC 1.8.1.7; GR, Glutatyon: NADP+ oksidoredüktaz) enzimi koyun dalak dokusundan saflaştırıldı. Bu işlem %20-70 arası amonyum sülfat çöktürmesi ve 2', 5'-ADP Sepharose 4B afinite kormatografisi uygulanarak gerçekleştirildi. Neticede enzim %40,61 verimle ve 1564,8 kat saflaştırıldı. SDS-PAGE ile enzimin saflık derecesi kontrol edilip karakterizasyonu yapıldı. Karekterizasyon çalışmalarında; optimum pH : 8,0 ( KH2PO4 tamponu ), optimum iyonik şiddet : 100 mM (KH2PO4 tamponu), stabil pH : 7,0 (KH2PO4 tamponu), optimum sıcaklık : 400C, alt birim molekül kütlesi : 91 kDa olarak tespit edildi. Ayrıca enzimin GSSG ve NADPH substratlarına olan ilgisini belirlemek amacı ile substratların KM sabiti ve Vmax değerleri tespit edildi. NADPH için ; KM sabiti : 0,0061 mM, Vmax değeri 0,259 EÜ/mL, GSSG için ise, KM sabiti : 0,351 mM, Vmax değeri 0,604 EÜ/mL olduğu belirlendi. Bu sonuçlara göre; GR enziminin substratları olan NADPH'a afinitesinin GSSG'ye olandan daha fazla olduğu tespit edildi. Ayrıca koyun dalak GR enzim aktivitesi üzerine bazı ilaçların etkileri araştırıldı. Ampisilin, streptomisin sülfat, gentamisin, sefoperazone sodyum ve prekort-liyo'nun inhibisyon etkisi gösterdiği belirlendi. Bu ilaçların IC50 (mM) değerleri; prekort-liyo :1,27 mM, ampisilin : 3,22 mM, streptomisin sülfat : 7,95 mM, sefoperazon sodyum : 16,97 mM, gentamisin :17,20 Mm, Ki sabitleri; ampisilin : 1,057 ± 0,110, gentamisin : 20,770 ± 8,169, streptomisin sülfat : 3,386 ± 1,305, sefoperazon sodyum : 4,910 ± 0,960 ve precort-liyo : 0,466 ± 0,387, inhibisyon türleri ise; ampisilin ve gentamisin yarışmasız, streptomisin sülfat, sefoperazon sodyum ve precort-liyo yarışmalı olarak tespit edilmiştir.
Özet (Çeviri)
In this study, the enzyme Glutathione reductase (Glutathione: NADP+ oxidoreductase, EC 1.8.1.7; GR), which is the key enzyme of antioxidant metabolism, was purified from sheep spleen tissue. Purification was carried out using 20-70% ammonium sulfate precipitation and 2', 5'-ADP Sepharose 4B affinity chromatography. As a result, the enzyme was purified in 40.61% yield and 1564.8 fold. The purity level of was checked by SDS-PAGE and characterizated. In characterization studies; optimum pH: 8.0 (KH2PO4 buffer), optimum ionic strength: 100 mM (KH2PO4 buffer), stable pH: 7.0 (KH2PO4 buffer), optimum temperature: 400C, subunit molecular mass: 91 kDa. In addition, KM constant and Vmax values of the substrates were determined in order to determine the affinity of the enzyme to GSSG and NADPH substrates. For NADPH; KM constant: 0.0061 mM, Vmax value was 0.259 EU/mL, for GSSG, KM constant: 0.351 mM, Vmax value was 0.604 EU/mL. According to these results; It was determined that the affinity of the GR enzyme to the NADPH substrate was higher than its affinity to the GSSG substrate. In addition, the effects of some drugs on sheep spleen GR enzyme activity were investigated. It was determined that ampicillin, streptomycin sulfate, gentamicin, cefoperazone sodium and precort-lyo showed inhibitory effects. IC50 values of these drugs; precort-lyo: 1.27 mM, ampicillin: 3.22 mM, streptomycin sulfate: 7.95 mM, cefoperazone sodium: 16.97 mM, gentamicin: 17.20 mM, Ki constants; ampicillin : 1.057 ± 0.110, gentamicin : 20.770 ± 8.169, streptomycin sulfate : 3.386 ± 1.305, cefoperazone sodium : 4.910 ± 0.960 and precort-lio : 0.466 ± 0.387, inhibition types; Ampicillin and gentamicin were determined as noncompetitive, streptomycin sulfate, cefoperazone sodium and precort-lyo were determined competitively.
Benzer Tezler
- Koyun karaciğerinden glütatyon redüktaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu
Purification and characterization of glutathione reductase enzyme from sheep liver
GÖKTUĞ ULUSU
- Koyun beyni glutatyon redüktazının saflaştırılması ve bazı özelliklerinin incelenmesi
Başlık çevirisi yok
N.LEYLA AÇAN
- Üç farklı kabak türünün antioksidan aktivitelerinin belirlenmesi
Determination of antioxidant activities of three different cucurbita species
SELİN TÜMER
- Glutatyon redüktaz enziminin iskorpit balığı (scorpaena porcus) karaciğer dokusundan saflaştırılması ve bazı ağır metal inhibisyon kinetiklerinin incelenmesi glutatyon redüktaz enziminin iskorpit balığı (Scorpaena porcus) karaciğer dokusundan saflaştırılması ve bazı ağır metal inhibisyon kinetiklerinin incelenmesi
Purification of glutathione reductase enzyme from scorpion fish (Scorpaena porcus) liver tissue and investigation of some heavy metal inhibition kinetics
KÜBRA IŞIK
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
BiyoteknolojiOndokuz Mayıs ÜniversitesiTarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ERCAN SOYDAN
- Glutatyon redüktaz enziminin biberiye bitkisinden ekstraksiyonu ve karakterizasyonu
Extraction and characterization of glutathione reductase enzyme from rosemary plant
BÜŞRA TOSUN