Glutatyon redüktaz enziminin koyun kalp dokusundan saflaştırılması ve karakterizasyonu
Purification and characterization of glutathione reductase enzyme from sheep heart tissue
- Tez No: 952780
- Danışmanlar: PROF. DR. MEHMET ÇİFTCİ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Bingöl Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Biyokimya Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Glutatyon redüktaz (GR; E.C.1.8.1.7), GSSG'nin GSH'a indirgenmesini katalizleyen bir enzim olup flavin koenzimi (FAD) ve piridin-nükleotide (NADPH) bağımlı disülfit oksidoredüktaz ailesinin bir üyesidir. Bu çalışmada glutatyon redüktaz enzimi koyun kalp dokusundan saflaştırıldı. Bu saflaştırma işleminde %30-70 arası amonyum sülfat çöktürmesi ve 2', 5'-ADP Sepharose 4B afinite kromatografisi yöntemleri uygulandı. 5,35 EÜ/mg. protein spesifik aktivitesine sahip olan GR enzimi %72,82 verimle 191 kat saflaştırıldı. SDS-PAGE yöntemi ile enzimin saflık derecesi kontrol edildi ve denatüre edici şartlarda molekül kütlesi yaklaşık olarak 70 kDa bulundu. Karakterizasyon çalışmalarında ise enzimin optimum pH, stabil pH, optimum iyonik şiddet ve optimum sıcaklık değerleri sırasıyla 6,0 (0,1 M KH2PO4 tamponunda), 8,0 (0,1 M KH2PO4 tamponunda), 240 mM (0,1 M KH2PO4) ve 70°C olarak bulundu. Ayrıca NADPH ve GSSG substratları için KM ve Vmax değerleri için sırasıyla 7,776 mM, 0,1678 EÜ/mL ve 0,593 mM, 0,0306 EÜ/mL olduğu belirlendi.
Özet (Çeviri)
Glutathione reductase (GR; E.C.1.8.1.7) is an enzyme that catalyzes the reduction of GSSG to GSH and is a member of the flavin coenzyme (FAD) and pyridine-nucleotide (NADPH) dependent disulfide oxidoreductase family. In this study, glutathione reductase enzyme was purified from sheep heart tissue. In this purification process, 30-70% ammonium sulfate precipitation and 2', 5'-ADP Sepharose 4B affinity chromatography methods were applied. GR enzyme, which has a protein specific activity of 5.35 EU/mg, was purified 191-fold with a yield of 72.82%. The purity of the enzyme was checked by SDS-PAGE method and the molecular mass was found to be approximately 70 kDa under denaturing conditions. In the characterization studies, the optimum pH, stable pH, optimum ionic strength and optimum temperature values of the enzyme were found to be 6.0 (in 0.1 M KH2PO4 buffer), 8.0 (in 0.1 M KH2PO4 buffer), 240 mM (0.1 M KH2PO4) and 70°C, respectively. In addition, the KM and Vmax values for NADPH and GSSG substrates were determined to be 7.776 mM, 0.1678 EÜ/mL and 0.593 mM, 0.0306 EÜ/mL, respectively.
Benzer Tezler
- Kreatin kinaz izozimlerinin sıçan kalbinden saflaştırılması kinetik özelliklerinin ve nitrozolu karsinojen bileşiklerin etkilerinin araştırılması
The Investigation on creatine kinase isozymes purfied from mouse liver kinetic properties and the effects of carcinogen nitroso compounds
YÜKSEL KOCA
- Kordon kanında glukoz-6-fosfat dehidrogenaz varyantlarının araştırılması ve kinetik özelliklerinin incelenmesi
Başlık çevirisi yok
NURTEN DİKMEN
- Sıçanlarda koledok kanalı ligasyonu ile oluşturulan karaciğer fibrozunda karaciğer lipit peroksit ve glutatyon düzeyleri
Başlık çevirisi yok
NİLGÜN ALPTEKİN
