Role of AXL in hepatocellular carcinoma
AXL'ın karaciğer kanserindeki rolü
- Tez No: 722582
- Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ EZGİ KARACA EREK, PROF. MEHMET ÖZTÜRK
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Antikorlar-monoklonal, DNA hasarı, Hepatoselüler karsinom, Karsinoma-hepatoselüler, Ksenograft, Poliploit, Protein-tirozin kinaz, Antibodies-monoclonal, DNA damage, Hepatocellular carcinoma, Carcinoma-hepatocellular, Xenograft, Polyploidy, Protein-tyrosine kinases
- Yıl: 2022
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Dokuz Eylül Üniversitesi
- Enstitü: İzmir Uluslararası Biyotıp ve Genom Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Genom Bilimleri ve Moleküler Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Bir reseptör tirozin kinaz olan AXL, TAM (TYRO3, AXL, MER) ailesinin bir üyesidir. AXL, Hepatoselüler Karsinoma (HSK) da dahil olmak üzere birçok kanserde yüksek ifade göstermektedir. Yüksek ekspresyonu, genellikle doğrudan kötü prognozla ve hem kemoterapiye hem de hedefe yönelik tedavilere karşı gelişmiş dirençle ilişkilidir. Bugün AXL, HSK da dahil olmak üzere birçok kanserlerde umut verici bir terapötik hedef olarak kabul edilmiştir, çünkü cabozantinib, mesela HSK'da ikinci basamak tedavi için yakın zamanda FDA' den onay almış küçük bir moleküldür ve hedef olarak AXL ve başka reseptör tirozin kinazın aktivitesini inhibe eder. Bu kadar önemli olmasına rağmen, diğer kanserlere kıyasla HSK'da AXL ile ilgili az ve sınırlı sayıda fonksiyonel çalışma yapılmıştır. Bu nedenle, bu çalışmamızda AXL'in HSK'daki bilinmeyen rollerine odaklandık. Çalışmalarımıza, büyük bir HSK hücre hattı panellerinde AXL ifade seviyelerini analiz ederek başladık ve AXL'in mezenkimal benzeri HSK hücre hatlarında yüksek oranda eksprese edildiğini ve epitel benzeri hücre hatlarında ise nadiren eksprese edildiğini gösterdik. İndüklenebilir bir TRex sistemi kullanarak epitel benzeri HSK hücre hattı Hep3B'de AXL'i aşırı ifade ederek fonksiyonel çalışmalar gerçekleştirdik. AXL'i çok fazla ifade eden hücrelerde, bir mezenkimal hücre belirteci olan vimentin ifadesinin arttığını, hücrelerin çoğalma ve koloni oluşum hızının azaldığını gösterdik, ancak hücreler 3 boyutlu olarak büyütülürse daha büyük tümör küresi oluşturabildiklerini gösterdik. Ayrıca HSK hücre hattı olan SNU475'de CRISPR-Cas9 yöntemi ile AXL nakavtı oluşturduk. Laboratuvar ortamında yapılan çalışmalarımızda; hücre morfolojisinde anormallik, DNA hasar yanıtı artışı, hücre bölünmesinin süresinin uzaması, hücre döngüsünde G2 tutulması ve poliploidizasyon; hayvan deneyinde ise tümörijenitede azalma gibi dramatik ölümcül etkiler gözlemledik. AXL'ı AXL seçici inhibitörü R428 ile farmakolojik olarak inhibe ettiğimizde benzer fakat daha az şiddetli hücre döngüsünde G2 tutulması ve poliploidizasyonun varlığını gösterdik. Böylece AXL'ı nakavt olan hücrelerinin sonuçlarının AXL'nin yokluğuna özgü olduğunu kanıtladık. Bildiğimiz kadarıyla bu sonuçlar, HSK hücrelerinde AXL bağımlılığının ilk gösterimidir. Buna paralel olarak laboratuvarımızda AXL'a karşı monoklonal antikorlar (mAb) geliştirdik. Sırasıyla AXL-6 ve AXL-8 olarak adlandırılan AXL'a karşı üretilen iki mAb'ın biyoaktiviteleri hem in vitro hem de in vivo çalışmalarla test edildi. AXL-6 ve AXL-8'in AXL'a bağlanabildiğini gösterdik. AXL-8'ın AXL-6'ya göre, hücre zarındaki AXL reseptörlerini azaltmada daha iyi performansa sahip olduğunu ve SNU475 hücrelerinde bizim nakavt sonuçlarından elde ettiğimiz benzer G2 tutulması ve poliploidizasyon oluşturduğunu gözlemledik. Ayrıca AXL mAblarının her birinin Sorafenib ile kombine etkisini Hep40 hücrelerinin ksenograftlarını taşıyan bağışıklık yetersizliği olan bir farelerde test ettik. Kontrol antikoru ile karşılaştırıldığında AXL mAblarının, tümör boyutu açısından Sorafenib yanıtı etkilemediğini gözlemledik Sonuç olarak, gözlemlerimiz bazı HSK hücrelerinde AXL ifadesinin komple silinmesinin bunun hücreler için ölümcül olduğunu göstermektedir. Bununla birlikte, AXL'ın antikorlar veya kinaz inhibitörleri tarafından deneysel olarak inhibisyonu, HSK'ya karşı daha az etkili olabilir.
Özet (Çeviri)
A receptor tyrosine kinase AXL is a member of the TAM (TYRO3, AXL, MER) family. AXL has elevated expression in many cancers including hepatocellular carcinoma (HCC). Its elevated expression is often directly associated with poor prognosis and acquired resistance to both chemotherapy and targeted therapies. Today, AXL has been accepted as a promising therapeutic target in cancers including HCC since cabozantinib, for example, a recently FDA-approved small molecule for second-line HCC treatment inhibits the activity of AXL and other several receptor tyrosine kinases. However, there have been comparatively few and limited functional studies on AXL in HCC compared to other cancer. Therefore, in this study, we focused on the unelucidated role of AXL in HCC. We initiated our studies by analyzing the expression levels of AXL in a large HCC cell line panels and we showed that AXL is highly expressed in mesenchymal-like HCC cell lines and rarely expressed in epithelial-like cell lines. We carried out functional studies by overexpressing AXL in epithelial-like HCC cell line Hep3B using an inducible TRex system. We demonstrated that AXL overexpressing cells gain more mesenchymal character exhibiting increased expression of vimentin, mesenchymal cell marker and showed decreased proliferation and colony formation rate but if they were cultured in 3-dimension, larger spheroids formed. We also generated CRISPR-Cas9 mediated AXL knock-out in the SNU475 HCC cell line. We observed aberrance in the morphology of cells and dramatic lethal effects such as increased DNA damage response, the extension of doubling time, G2 arrest, and polyploidization in vitro, and a decrease of tumorigenicity in vivo. Similar but less severe G2 arrest and polyploidy were also demonstrated with pharmacological inhibition of AXL by AXL selective inhibitor R428 proving the results of AXL knock-out cells were specific to the absence of AXL. To our knowledge, this is the first demonstration of AXL dependence in HCC cells. In parallel, we developed monoclonal antibodies (mAb) against AXL in our lab. The bioactivities of generated two mAbs of AXL called AXL-6 and AXL-8, respectively were tested with both in vitro and in vivo studies. We showed that AXL-6 and AXL-8 were specially bound to AXL. AXL-8 has better performance in decreasing AXL receptors in the cell membrane and also it generates similar G2 arrest and polyploidization in SNU475 cells. We also tested the combinational effect of each of AXL mAb with Sorafenib in an immunodeficient mouse bearing xenografts of Hep40 cells. Compared to the control antibody, AXL mAbs did not affect the response to sorafenib in terms of tumor size. Taken together, our observations demonstrate that the total knockout of AXL expression in some HCC cells is lethal. However, its experimental inhibition by either antibodies or kinase inhibitors may be less effective against HCC.
Benzer Tezler
- İnsan kolanjiokarsinoma hücre hattında silibinin'in GAS6/AXL ve JAK/STAT yolağı ile olan ilişkisinin araştırılması
Investigation of the relationship of silibinin with GAS6 / AXL and JAK/STAT pathway in human cholangiocarcinoma cell line
ZEHRA NUR ÇALIŞKAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
BiyokimyaErciyes ÜniversitesiTıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÜLDEN BAŞKOL
- Üçlü negatif meme kanserinde axl hedeflenmesi: Amuvatinib'in etkileri ve miRNA-3142 ile miRNA-5687 ifadelenmesi
AXL targeting in triple-negative breast cancer: Effects of Amuvatinib and expression of miRNA-3142 and miRNA-5687
EREN SON
Doktora
Türkçe
2026
Eczacılık ve FarmakolojiEskişehir Osmangazi ÜniversitesiTıbbi Farmakoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SEMRA YİĞİTASLAN
- Diabetes mellituslu hasta trombositlerinde tyro-3, axl ve mer (TAM) reseptör sayılarının belirlenmesi
Quantification of tam receptors on platelet surface in patients with diabetes mellitus
HÜSNİYE DAĞDEVİREN
- Sebebi bilinmeyen tekrarlayan gebelik kayıplarında tam reseptör kinazların ve ligandlarının ekspresyon düzeylerinin araştırılması
Investigation of the expression levels of tam receptor kinases and ligands in unexplained recurrent pregnancy loss
ESMA KONUK
Doktora
İngilizce
2017
Allerji ve İmmünolojiAkdeniz ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NECDET DEMİR
- Mezenkimal kök hücre farklılaşmasında Gas6 (Growth arrest specıfıc gene 6)'nın rolü
The role of Gas6 (Growth arrest specific gene6)on mesencymal stem cell differentiation
NEŞE ERİZ