Geri Dön

Prokaryotik yeni (novel) P450 Monooksigenazların klonlanması, rekombinant ekspresyonu, enzimatik karakterizasyonu

Cloning, recombinant expression and charactezation of novel prokaryotic P450 monooxygenases

PDF İndir

  1. Tez No: 742398
  2. Yazar: DİDEM YILDIRIM
  3. Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ YUNUS ENSARİ, DR. ÖĞR. ÜYESİ CEM ÖZİÇ
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Biyomühendislik, Biyoteknoloji, Biology, Bioengineering, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2022
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Kafkas Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 156

Özet

Enzimler proteinlerin büyük bir grubunu oluşturan biyopolimerlerdir. Günümüzde gıda, ilaç, kağıt ve kağıt hamuru, deterjan ve biyoteknoloji gibi birçok alanda yaygın olarak başarılı bir şekilde kullanılırlar. Sitokrom P450 monooksigenazların katalize edebildiği reaksiyonlar sayesinde biyoteknolojideki rolleri oldukça büyüktür. Bu zamana kadar tanımlanmış ve endüstride kullanılan P450 monooksigenaz enzimleri substratlara karşı düşük aktivite gösterirler. Bu olumsuzlukları ortadan kaldırmak için yeni P450 monooksigenaz enzimlerinin tanımlanması ve aktif protein olarak ifade edilmesi biyoteknolojik çalışmalar için büyük bir öneme sahiptir. Bu tez çalışmasında Azorhizobium caulinodans bakterisinde yer alan ve endüstriyel öneme sahip P450 monooksigenaz enziminin Escherichia coli'ye aktarılıp recombinant protein olarak üretilmesi hedeflenmiştir. Bu amaçla PZR yöntemi ile çoğaltılan Azorhizobium caulinodans P450 monooksigenaz geni pQE30 ve pET28a vektörlerine klonlamıştır. Elde edilen rekombinant plazmitler iki farklı E.coli ırkına aktarılarak P450 monooksigenaz için en uygun ırk E.coli Rosetta ırkı, başarılı sonuç veren klonlama ise pET28a vektörü ile sağlanmıştır. Bu belirlemelerden sonra P450 monooksigenaz enziminin daha verimli bir şekilde üretilebilmesi için sıcaklık, besiyeri, IPTG, ALA ve FeCl3 konsantrasyonu, ekspresyon süresi gibi optimizasyon çalışmaları gerçekleştirilerek daha iyi verim elde edilmiştir.

Özet (Çeviri)

Enzymes are biopolymers that make up a large group of proteins. Today, they are widely used in many fields such as food, medicine, paper and pulp, detergent and biotechnology. Cytochrome P450 monooxygenases have a major role in biotechnology due to the reactions catalyzed by them. The enzymes P450 monooxygenase that have been identified so far and used in industry show low activity towards substrates. In order to eliminate these drawbacks, the identification of new P450 monooxygenase enzymes and their expression as active proteins are of great importance for biotechnological studies. In this thesis study, it is aimed to produce industrially important Azorhizobium caulinodans P450 monooxygenase enzyme in Escherichia coli as recombinant protein. For this purpose, the Azorhizobium caulinodans P450 monooxygenase gene was propagated by PCR method and cloned into pQE30 and pET28a vectors. The obtained recombinant plasmids were transformed into two different E.coli strains and the most appropriate vector was pET28a and the most appropriate strain was E.coli Rosetta for the production of P450 monooxygenase. Afterwards, recombinant protein expression conditions including temperature, medium, IPTG, ALA and FeCl3 concentration, expression time were optimized in order to produce P450 monooxygenase enzyme more efficiently.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    603312

    A novel post-translational modification on the central CRISPR enzyme: Discovery of CAS9 ubiquitylation

    CRISPR sisteminin kilit enzimi üzerinde yeni birposttranslasyonel modifikasyon: CAS9 ubikitinasyonununkeşfi

    ARDA BARAN ÇELEN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2019

    BiyolojiBoğaziçi Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ALİ RİZA UMUT ŞAHİN

  2. Tez No

    662053

    Systematic evolution of novel 2′F-PY RNA aptamers targeting the membrane protein l-arginine/agmatine antiporter purified in mild detergent

    Hafif deterjanda saflaştirilmiş l-arjinin/agmatin antiport membran proteinini hedefleyen yeni 2′f-PY RNA aptamerlerinin sistematik evrimi

    NOORALDEEN FATHI NOORALDEEN AYOUB

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2021

    BiyokimyaOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ÇAĞDAŞ DEVRİM SON

    DR. MÜSLÜM İLGÜ

  3. Tez No

    851545

    Avşa ve Marmara Adaları'ndan aktinobakterilerin izolasyonu, polifazik taksonomisi ve genom analizleri

    Isolation, polyphasic taxonomy and genome analyses of actinobacteria from Avşa and Marmara Islands

    AHMET RIDVAN TOPKARA

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    BiyolojiOndokuz Mayıs Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. KAMİL IŞIK

  4. Tez No

    726221

    Structural studies of N. maritimus acetyl-CoA/Propionyl-CoA carboxylase with X-Ray crystallography approach

    N. maritimus asetil-CoA/Propiyonil-CoA karboksilaz enziminin X-ışını kristalografisi ile yapısal çalışmaları

    SABRİ ÖZKAN BESLER

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2021

    BiyolojiKoç Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ HASAN DEMİRCİ

  5. Tez No

    609809

    Molecular studies on the cloning and expression of human beta interferon gene in E. coli

    İnsan beta interferon geninin klonlanması ve E.coli'de ekspresyonu üzerine moleküler çalışmalar

    ZALİHE OMAY

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2020

    BiyoteknolojiBolu Abant İzzet Baysal Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MEHMET ÖZTÜRK

Geri Dön