Geri Dön

Scytalidium thermophilum katalazının merkezi kanalının katalitik aktivitedeki rolünün araştırılması

Investigation of the role of central channel on catalytic activity of scytalidium thermophilum catalase

  1. Tez No: 747118
  2. Yazar: BEDİRHAN ÖZTÜRK
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. YONCA YÜZÜGÜLLÜ KARAKUŞ
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Mikrobiyoloji, Biology, Microbiology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2022
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Kocaeli Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 69

Özet

Katalaz enzimi antioksidan metalloenzimler grubuna dâhil olup başlıca işlevi hidrojen peroksitin su ve moleküler oksijene parçalanmasıdır. Katalazlar ile 100 yılı aşkın bir süredir çalışılmaktadır. Bu süreç içinde bu enzimler birçok farklı organizmadan izole edilmiş, saflaştırılmış ve karakterize edilmiştir. Bunlardan biri termofilik bir mantar olan Scytalidium thermophilum tarafından büyümeye paralel olarak üretilen katalaz enzimidir. Bu enzim önceleri birçok difenolik bileşiği okside edebilme yeteneğinden dolayı fenol oksidaz olarak isimlendirilmiş ancak sonrasında yapılan ayrıntılı saflaştırma ve dizi analizleri sonucunda aslında fenol oksidaz aktivitesi gösteren bir katalaz olduğu bulunmuş ve CATPO (katalaz/fenol oksidaz) olarak isimlendirilmiştir. Bu çalışmada, CATPO'nun aktif merkezine uzanan kanallardan biri olan merkezi kanalın enzimin katalitik mekanizmadaki olası rolünün araştırılması amaçlandı. Bu amaç doğrultusunda, merkezi kanalda bulunan amino asitler (A80, T372, N375, N377 ve G378) hedef olarak seçilerek nokta mutasyonlar gerçekleştirildi. Rekombinant DNA sistemi kullanarak üretilen ve saflaştırılan CATPO varyantlarının katalitik etkinliklerinde meydana gelen değişiklikler, spektrofotometrik analizler ile değerlendirildi. N375H, N375E ve N375S hariç diğer amino asit dönüşümlerini içeren proteinler başarılı bir şekilde üretildi. Saf haldeki tüm varyantların ölçülebir miktarda hem-d içerdikleri tespit edildi. T372A ve T372S varyantlarının katalaz aktivitelerinde CATPO'ya göre sırasıyla %10 ve %14 oranında bir düşüş gözlenirken N377L ve A80I'da sırasıyla %263 ve %148'lik bir artış gözlendi. Fenol oksidaz aktivitelerinde T372A hariç diğer varyantlarda önemli bir değişiklik kaydedilmedi. T372A'nın fenol oksidaz aktivitesinde CATPO'ya göre %38 oranında bir kayıp gözlendi. Bulgular, merkezi kanalın katalitik aktiviteyi etkilediğini göstermekte olup endüstriyel uygulamalara yönelik daha etkin bir katalaz enziminin üretilme potansiyelinin olduğuna işaret etmektedir.

Özet (Çeviri)

Catalase enzyme belonging to antioxidant metalloenzyme group catalyze the decomposition of hydrogen peroxide to water and molecular oxygen. Catalases have been studied for over 100 years, with the result that examples of the enzyme have been isolated, purified and characterized from many different organisms. Among them, the catalase enzyme produced by thermophilic fungus, Scytalidium thermophilum, is of our interest. This enzyme was previously named phenol oxidase because of its ability to oxidize many diphenolic compounds, but as a result of detailed purification and sequencing analyzes, it was found to be actually a catalase with phenol oxidase activity and was named CATPO (catalase/phenol oxidase). In this study, it was aimed to investigate the possible role of the central channel, which is one of the channels extending to the active center of CATPO, in the catalytic mechanism of the enzyme. For this purpose, the amino acids (A80, T372, N375, N377 and G378) residing in the central channel were selected and mutated. The changes in the catalytic activities of the CATPO variants, produced and purified using the recombinant DNA system, were evaluated by spectrophotometric analyses. Almost all recombinant proteins except N375H, N375E and N375S were successfully produced. All CATPO variants were found to contain a measurable amount of hem-d. The T372A and T372S variants exhibited a 10% and 14% decrease in catalase activity with respect to CATPO enzyme, whereas the N377L and A80I variants presented a 263% and 148% increase in catalase activity, respectively. In terms of phenol oxidase activity, no significant change was detected among variants but T372A presenting 38% loss in activity. The results have shown that the central channel affects the catalytic activity and by mutations on this channel more efficient variants than wild type enzyme can be produced and tested for their potential use in industrial applications.

Benzer Tezler

  1. Purification, characterization, crystallization and preliminary x-ray structure determination of scytalidium thermophilum bifunctional catalase and identification of its catechol oxidase activity

    Scytalıdıum thermophılum çift fonksiyonlu katalazının saflaştırılması, karakterizasyonu, kristalizasyonu, ilk aşama x-ışını yapısının belirlenmesi ve katekol oksidaz aktivitesinin tanımlanması

    DİDEM SUTAY

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2007

    Kimya MühendisliğiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. UFUK BAKIR

    PROF. ZÜMRÜT BEGÜM ÖGEL

  2. Scytalidium thermophilum katalaz-fenol oksidaz enzimi ana kanal yapısının katalitik aktivitedeki rolünün araştırılması

    The role of Scytalidium thermophilum catalase-phenol oxidase enzyme to investigate catalytic activity of the main channel structure

    MELİS ZENGİN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    BiyokimyaKocaeli Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. SEVGİ TÜRKER KAYA

  3. Scytalidium thermophilum ksilanazının kromatografik yöntemlerle saflaştırılması ve biyokimyasal karakterizasyonu

    Purification of Scytalidium thermophilum xylanase by chromatographic methods and biochemical characterization

    SEVGİ GÜDER

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    BiyokimyaKaramanoğlu Mehmetbey Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. DİDEM SUTAY KOCABAŞ

  4. Analysis of phenol oxidation products by Scytalidium thermophilum bifunctional catalase/phenol oxidase (CATPO)

    Scytalidium thermophilum çift aktiviteli katalaz/fenol oksidazı (CATPO) ile fenol oksidasyon ürünlerinin analizi

    GÜLDEN AVCI

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2011

    BiyolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoteknoloji Bölümü

    PROF. DR. GÜRKAN KARAKAŞ

    PROF. DR. ZÜMRÜT BEGÜM ÖGEL

  5. Functional and structural analysis of catalase-phenol oxidase from Scytalidium thermophilum

    Scytalidium thermophilum katalaz-fenol oksidazının fonksiyonel ve yapısal analizi

    YONCA YÜZÜGÜLLÜ

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2010

    BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MİCHAEL J. MCPHERSON

    PROF. DR. ZÜMRÜT B. ÖGEL