Sağlıklı insan uyarılmış pluripotent kök hücrelerinden (uPKH'lerden) NGN2, LHX3 ve ISL1 üçlü kasedi kullanarak motor nöron eldesi
Motor neuron generation from healthy human induced pluripotent stem cells (iPSC) Using NGN2, LHX3 and isl1 triple cassette
- Tez No: 752381
- Danışmanlar: PROF. DR. FAHRİYE DUYGU UÇKAN ÇETİNKAYA, DOÇ. DR. AYÇA ARSLAN ERGÜL
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Genetik, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2022
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kök Hücre Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Kök Hücre Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 89
Özet
Nörodejeneratif hastalıklar bireylerin yaşam standartını düşüren, önemli fonskiyonel kayıplara yol açan, ilerleyici ve ölümcül hastalıklardır. Amyotropik lateral skleroz (ALS) hastalığı motor nöron dejenerasyonunun yol açtığı bir hastalıktır ve alt-üst motor nöronları etkilemektedir. ALS hastalığında Superoxide dismutaz (SOD1) genin yanı sıra yaklaşık 40 gen mutasyonunun da bu hastalıkta etkin olduğu görülmüştür. Spinal müsküler atrofi (SMA), SMN1 ve SMN2 genlerindeki mutasyonlar sonucu ortaya çıkan kalıtsal bir hastalıktır. SMA hastalığı motor nöronları etkileyerek kas distrofisine sebep olur. Bireyin merkezi, periferik ve iskelet kas sisteminin kontrollü kas hareketlerini etkiler ve giderek artan güçsüzlük, kas kütlesi kaybı semptomları ile karakterizedir. Nörodejeneratif hastalıkları çalışabilmek için çeşitli yöntemler kullanılmakta fakat insan uyarılmış pluripotent kök hücreler (uPKH'ler) insan hastalıklarının seyrini anlayabilmek ve kişisel tedavi yöntemlerini geliştirmek için güçlü bir alternatif oluşturmaktadır. Bu tez çalışmasında sağlıklı insan uPKH'lerinden Neurogenin 2 (NGN2), Islet 1 (ISL1), LIM homeobox 3 (LHX3) üçlü piggyBac plasmid kaseti kullanılarak motor nöron elde edilmiştir. uPKH'lere piggyBac üçlü kaseti lipid-aracılı transfeksiyon yöntemi ile transfekte edilmiş ve stabil transfekte olan hücreler puromisin seleksiyonu ile seçilmiştir. Doksisiklin ile uyarılan hücrelerde transkripsiyon faktörlerinin aşırı ifadesi sağlanarak uPKH'lerin nöral soya geçişi sağlanmıştır. Elde edilen motor nöronların karakterizasyonu nöronal gen ifadelerine bakılarak ve nöronal belirteçlerle immün floresan boyanarak yapılmıştır. İleride çeşitli ilaç denemelerinin yapılacağı motor nöron hastalıklarını modellemek için kullanılacak bu yöntem ile ön veri sağlanmış ve yöntem optimize edilmiştir.
Özet (Çeviri)
Neurodegenerative diseases are progressive and fatal diseases that reduce the standard of living of individuals and cause significant functional losses. Amyotropic lateral sclerosis (ALS) is a disease caused by motor neurone degeneration and affects upper and lower motor neurons. In addition to the Superoxide dismutase (SOD1) gene, approximately 40 gene mutations have been found to be effective in ALS. Spinal muscular atrophy (SMA) is an inherited disease caused by mutations in the SMN1 and SMN2 genes. SMA affects motor neurons and causes muscular dystrophy. It affects the controlled muscle movements of the individual's central, peripheral and skeletal musculature and is characterised by symptoms of progressive weakness and loss of muscle mass. Various methods have been used to study neurodegenerative diseases, but human induced pluripotent stem cells (iPSCs) represent a powerful alternative to understand the course of human diseases and to develop personalised therapies. In this thesis, motor neurons were obtained from healthy human iPSCs using Neurogenin 2 (NGN2), Islet 1 (ISL1), LIM homeobox 3 (LHX3) triple piggyBac plasmid cassette. iPSCs were transfected with the piggyBac triple cassette by lipid-mediated transfection method and stably transfected cells were selected by puromycin selection. In doxycycline-stimulated cells, transcription factors were overexpressed and iPSCs were transferred to neural lineage. The obtained motor neurons were characterized by analyzing neuronal gene expression and immunofluorescent staining with neuronal markers. With this method, preliminary data was provided and the method was optimized to be used to model motor neuron diseases for future drug trials.
Benzer Tezler
- İn-vitro hepatik organoid modelinin geliştirilmesi
Development of in-vitro hepatic organoid model
SOHEIL AKBARI
Doktora
Türkçe
2018
Endokrinoloji ve Metabolizma HastalıklarıDokuz Eylül ÜniversitesiTıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ŞERİFE ESRA ERDAL BAĞRIYANIK
PROF. DR. NUR ARSLAN
- Sağlıklı insan uyarılmış pluripotent kök hücrelerinden kortikal nöron elde edilmesi
Generation of cortical neurons from healthy human pluripotent stem cells
MELİS TEMEL ÖZKILIÇ
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
GenetikHacettepe ÜniversitesiKök Hücre Ana Bilim Dalı
PROF. DR. FAHRİYE DUYGU ÇETİNKAYA
DOÇ. DR. AYÇA ARSLAN ERGÜL
- Generation and characterization of induced pluripotent stem cell lines from multiple sclerosis patients and healthy individuals
Multipl skleroz hastalarından ve sağlıklı bireylerden uyarılmış pluripotent kök hücre hatlarının üretimi ve karakterizasyonu
ONUR CAN BEGENTAŞ
Yüksek Lisans
İngilizce
2021
BiyolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ERKAN KİRİŞ
- KCNQ1 geni CRISPR/CAS9 sistemi ile düzenlenmiş insan uyarılmış pluripotent kök hücre kaynaklı kardiyomiyositlerin karakterizasyonu
Characterization of crispr/CAS9 edited kcnq1 gene variants in human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes
TUĞCE TORUN
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
Genetikİstanbul Medipol ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ESRA ÇAĞAVİ
- ALS ile ilişkili C9ORF72 mutasyonu taşıyan hasta kökenli uyarılmış pluripotent kök hücrelerden farklılaştırılan kardiyomiyosit ve duyu nöronlarının karakterizasyonu
Characterization of als associated C9ORF72 mutation carrying cardiomyocytes and sensory neurons derived from induced pluripotent stem cells
AYLİN NEBOL
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
Tıbbi Biyolojiİstanbul Medipol ÜniversitesiTıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ESRA ÇAĞAVİ