Geri Dön

Meme kanseri tedavisinde manyetik hipertermi ve gen terapisi ile dual terapi yaklaşımı

Dual therapy approach with magnetic hyperthermia and gene therapy in breast cancer treatment

PDF İndir

  1. Tez No: 757885
  2. Yazar: FATMA TURHAN
  3. Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ YAĞMUR ÜNVER, PROF. DR. AHMET MAVİ
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoteknoloji, Genetik, Biotechnology, Genetics
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2022
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Atatürk Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Gen Mühendisliği Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 116

Özet

Amaç: Bu çalışmada meme kanseri için kullanılmaya aday hedeflenebilir, etkili ve özgün bir yaklaşım olan manyetik hipertermi indüksiyonlu gen terapisi (dual terapi) yönteminin geliştirilmesi amaçlandı. Yöntem: Öncelikle ısı ile indüklenebilir promotöre (HSP promotörü; PHSP) sahip rekombinant pHSP-GFP elde edildi. Daha sonra durdurma kodonu içeren kodon optimize azurin geninin, pHSP-GFP'ye klonlanmasıyla pHSP-Azu elde edildi. Elde edilen rekombinant DNA'lar Sanger veya yeni nesil dizileme (Next Generation Sequencing) ile doğrulandı. Çalışmada gen aktarım ve hipertermi aracı olarak kullanılacak olan manyetik ve biyo-uyumlu nanopartiküllerin (MSNP-NH2) TEM, DLS ve VSM analizleriyle karakterizasyonları yapılıp, AC manyetik alan altında ısıtma kapasitesi belirlendi. MSNP-NH2'lerin plazmit DNA'ları bağlama ve salma yetenekleri DLS ölçümü ve jel elektroforezi ile tespit edildi. Manyetofektinler (MSNP-NH2+DNA+PEI) mıknatıs yardımı ile hücrelere gönderildi (manyetofeksiyon). Transfeksiyon etkinliği konfokal mikroskop, akış sitometrisi ve spektrofotometrik ölçüm ile belirlendi. Ayrıca manyetik hiperterminin tümörijenik (MCF-7) ve tümörijenik olmayan (MCF-10A) hücre hatları üzerindeki etkisi hücre canlılığı testi (MTS) ile ortaya konuldu. Son olarak, hipertermi ve gen terapisinin uygulandığı hücrelerde ikili terapinin etkinliği, apoptoz testi ve Real-Time PCR (qRT-PCR) ile gösterildi. Bulgular: Çalışma sonucunda elde edilen verilere göre MSNP-NH2'lerin plazmit DNA'ları tutabildiği ve hücre içinde bırakabildiği görüldü. PHSP'nin inkübatör veya AC manyetik alan aracılığıyla indüklenebildiği ve hedef proteinlerin hücre içerisinde üretilebildiği belirlendi. Dual terapi uygulanan hücrelerde hem apoptoz testi hem de qRT-PCR ile belirlenen BAX/BCL2 oranlarına göre MCF-7 hücrelerinin apoptotik olmayan yolla öldüğü tespit edildi. Sonuç: Bu çalışmada, dual terapinin MCF-10A üzerindeki etkisinin sınırlı olduğu, MCF-7 üzerindeki etkisinin ise daha fazla olduğu gösterildi. Ayrıca hücrelerin apoptotik yola kıyasla nekrotik yolu daha çok tercih ettiği gözlendi.

Özet (Çeviri)

Purpose: In this study, it was aimed to develop magnetic hyperthermia induction gene therapy (dual therapy), which is a targetable, effective and unique approach for breast cancer. Method: First, recombinant pHSP-GFP with a heat-inducible promoter (HSP promoter; PHSP) was obtained. Then, pHSP-Azu was obtained by cloning the codon-optimized azurin gene containing the stop codon into pHSP-GFP. The resulting recombinant DNAs were confirmed by Sanger or Next Generation Sequencing. In the study, magnetic and biocompatible nanoparticles (MSNP-NH2), which will be used as a gene transfer and hyperthermia tool, were characterized by TEM, DLS and VSM analyses and their heating capacity under AC magnetic field was determined. The ability of MSNP-NH2s to bind and release plasmid DNA was determined by DLS measurement and gel electrophoresis. Magnetofectins (MSNP-NH2+DNA+PEI) was sent to the cells with the help of magnet (magnetofection). Transfection efficiency was determined by confocal microscopy, flow cytometry and spectrophotometric measurement. In addition, the effect of magnetic hyperthermia on tumorigenic (MCF-7) and non-tumorigenic (MCF-10A) cell lines was revealed by cell viability test (MTS). Finally, the efficacy of dual therapy in cells with hyperthermia and gene therapy was demonstrated by apoptosis test and Real-Time PCR (qRT-PCR). Findings: According to the data obtained from the study, it was seen that MSNP-NH2s could hold plasmid DNAs and leave them in the cell. It was determined that PHSP could be induced by incubator or AC magnetic field and target proteins could be produced inside the cell. According to the BAX/BCL2 ratios determined by both apoptosis test and qRT-PCR in the dual therapy cells, it was determined that MCF-7 cells died in a non-apoptotic way. Results: This study showed that the effect of dual therapy on MCF-10A was limited, while the effect on MCF-7 was greater. In addition, it was observed that the cells preferred the necrotic pathway more than the apoptotic pathway.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    411976

    Santral puberte prekozlu çocuklarda gnrh analog tedavisinin ön hipofiz hormonlarına etkisinin değerlendirilmesi

    Effects of gnrh analogue treatment on anterior pituitary hormones in children with central precocious puberty

    HAVVA NUR PELTEK KENDİRCİ

    Tıpta Yan Dal Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2012

    Endokrinoloji ve Metabolizma HastalıklarıSağlık Bakanlığı

    Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ZEHRA AYCAN

  2. Tez No

    412016

    4T1 VE 4THMpc fare meme kanser hücre hatlarında antianjiogenik antitümoral ilaç olan talidomit'in tek başına ve radyoterapi ile kombine olarak anjiogenik faktörlerden p maddesi ile p maddesini parçalayan neprilizin ve adam-10 enzimleri üzerine etkilerinin araştırılması

    The investigation of the effects of thalidomide an antiangiogenic and antitumoral drug, alone and in combination with radiotherapy on substance p level as well as substance p degrading enzymes; adam-10 and neprilysin in 4T1 VE 4THMpc mouse breast cancer cell lines

    ECE ŞİMŞEK

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2010

    BiyolojiAkdeniz Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. KAYAHAN FIŞKIN

  3. Tez No

    412019

    Hormon replasman tedavisi alan postmenapozal kadınların mammografik dansitelerindeki artışın, reprodüktif dönemdeki kadınların mammografik dansiteleri ile karşılaştırılması

    Hormon replasman tedavi̇si̇ alan postmenapozal kadinlarin mammografi̇k dansi̇teleri̇ndeki̇ artişin, reprodükti̇f dönemdeki̇ kadinlarin mammografi̇k dansi̇teleri̇ i̇le karşilaştirilmasi

    ALİ GALİP ZEBİTAY

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2002

    Kadın Hastalıkları ve DoğumSağlık Bakanlığı

    Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ALİ SÜHA SÖNMEZ

  4. Tez No

    412045

    İnvaziv meme karsinom olgularında her2 ekpresyonunun sısh (gümüş insitu hibridizasyon)yöntemiyle tespit edilerek sonuçların immünohistokimyasal ve fısh (floresan insitu hibridizasyon) yöntemleriyle karşılaştırılması

    Determination of her2 status in invasive ductal breast carcinoma using sish and correlation between fish and ihc

    BETÜL ÜNAL

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    PatolojiAkdeniz Üniversitesi

    Tıbbi Patoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. FATMA ŞEYDA KARAVELİ

  5. Tez No

    412325

    Beyond demographics: Personality, norms, and mechanisms of women's cancer screening

    Demografinin ötesinde: Kadınların kanser taramasında kişilik, normlar ve mekanizmaların etkisi

    CELİA KATRİNE NAİVAR ŞEN

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2015

    PsikolojiKoç Üniversitesi

    Psikoloji Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. GÖKÇE TARCAN KUMKALE

Geri Dön