Dirençli akciğer kanser kök hücrelerine moleküler mühendislik ile hedeflendirilmiş eksozom-enkapsüle sirna'larla hücrelerdeki ilaç direncinin önlenmesi
Prevention of resistance by targeting exosome-encapsulated sirnas to resistant LUNG cancer stem cells by molecular engineering
- Tez No: 787024
- Danışmanlar: DOÇ. DR. AYLA EKER SARIBOYACI
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyomühendislik, Biyoteknoloji, Bioengineering, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2023
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Eskişehir Osmangazi Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Disiplinlerarası Kök Hücre Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 242
Özet
Amaç: Bu tez çalışmasında Gemsitabin ile dirençli hale getirilen A549'lardan izole edilen kanser kök hücreleri (dKKH; CD326+CD133+CD44+) ile ko-kültüre edilen siRNA (KKH'de yüksek düzeyde eksprese olan çoklu ilaç direnç genlerinden ABCB1 genine özgü) transfekte ve Hyaluronik asitle(HA) enkapsüle edilmiş insan sinoviyal sıvı kökenli mezenkimal kök hücre eksozomlarının dKKH'lerdeki MDR1 susturulması-aracılı etkisinin araştırılması amaçlanmıştır. Yöntem: Gemsitabin dirençli A549 hücrelerinden CD326+CD133+CD44+ Hücre izolasyonları gerçekleştirildikten sonra CFU analizi, 3 Boyutlu sfer oluşturabilme yetenekleri, MTT yöntemiyle sitotoksisite analizi, büyüme eğrisi, immunofloresan işaretleme ve flow sitometri yöntemleriyle pozitiflikleri karakterize edildi. MKH'lerden eksozom izolasyonlarından sonra flow sitometri ve TEM analizleriyle karakterizasyon analizleri gerçekleştirildi. MDR1- siRNA'lar eksozomlara transfekte edilerek yüklenme kapasiteleri araştırıldı. HAkaplanmış- siRNA-transfekte-eksozomların KKH'lerdeki başarısı flow sitometri ve PCR analizleriyle gösterildikten sonra IF işaretlemeyle Aktif Kaspaz-3 boyaması, flow sitometri ile Annexin V/PI ve bazı apoptoz genleri için qPCR ile apoptotik analizler gerçekleştirildi. Ayrıca flow sitometriyle hücre döngüsü analizi ile tedavi stratejilerinin etkileri araştırılmıştır. Bulgular: A549 hücrelerine Gemsitabin direnci kazandırılarak sitotoksisite analizi ile IC50 değerlerinin yükseldiği ve hücrelerin belirgin, canlılık oranı yüksek ve iki boyutlu koloni oluşturma yetenekleri gösterildi. d-A549'lardan CD326+CD133+CD44+ izolasyonları gerçekleştirildi ve izolasyonların verimliliğinin yüksek saflık ve canlılıkta olduğu belirlendi. siRNA transfekte eksozomların A549, KKH ve dKKH gruplarındaki MDR1 seviyelerindeki azalmalar belirlendi. Apoptotik ve hücre döngüsü analizlerinde KKH'lerdeki Gemsitabin direncinin kırıldığı ve hücrelerin apoptoza yönlendirilebildiği belirlendi. Sonuç: Bu tez çalışmasından elde edilen verilere göre d-KKH'lerde eksozom aracılı siRNA'ların hedef genleri başarıyla sessizleştirebileceği ve ABCB1 gen ekspresyonunun azalması ile KKH'lerde kemodirencin azalarak kemoterapötiklerin yeniden kullanılabileceği sonucuna ulaşılmıştır.
Özet (Çeviri)
Objective: In this thesis study, it was aimed to investigate the MDR1 silencing-mediated effect on lung resistant CSC (rt-CSC;D326+CD133+CD44+), which is isolated from Gemsitabine-resistant A549 cells. For this purpose, MDR1 spesific siRNA (specific to ABCB1 gene, one of the multidrug resistance genes highly expressed in CSC) were transfected to exosomes and were coated with Hyaluronic acid(HA) and this combinations were co-cultured with rt-CSC. Methods: After isolation of CD326+CD133+CD44+cells from Gemsitabine-resistant-A549 their positivity was characterized by CFU analysis, ability to form 3D (3D) spheres, cytotoxicity analysis, growth curve, immunofluorescence labeling and flow cytometry methods. After MSC-derivedexosome isolations, characterization analyzes were performed with flow cytometry and TEM analyzes. MDR1 siRNAs were transfected into exosomes and their loading capacity was investigated. After the success of HA-coatedsiRNA- transfected-exosomes in CSCs was demonstrated by flow cytometry and PCR analysis, Active Caspase-3 staining with IF labeling, Annexin V/PI with flow cytometry, and apoptotic analyzes with qPCR were performed. In addition, the effects of cell cycle analysis and treatment strategies were investigated. Results: Gemcitabine resistance was proven in A549 cells, with cytotoxicity analysis were increased and the cells were prominent, viable, and had the ability to form two-dimensional colonies. CD326+CD133+CD44+ isolations from resistant-A549 were performed and it was determined that the efficiency of the isolations was of high purity and viability. Decreases in MDR1 levels in A549, CSC and rt-CSC groups of siRNA-transfected exosomes were determined. In apoptotic and cell cycle analyzes, it was determined that Gemcitabine tolerance was re-established in rt-CSCs and cells could be directed to apoptosis. Conclusions: According to the data obtained from this thesis study, it was concluded that exosome-mediated siRNAs can successfully silence target genes in rt-CSCs and that chemotherapeutics can be reused by decreasing chemoresistance in rt-CSCs with decreased ABCB1 gene expression.
Benzer Tezler
- Synthesis of novel triazole molecules and investigation of their apoptotic effects on glioblastoma multiforme cells
Yeni triazol moleküllerinin sentezi ve glioblastoma multiforme hücreleri üzerindeki apoptotik etkilerinin araştırılması
ELİF BEYZA KOÇ
Yüksek Lisans
İngilizce
2021
Moleküler Tıpİstanbul Medipol ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ BİLGESU ONUR SUCU
- Akciğer kanser kök hücrelerinin transkriptom analizi
Transcriptome analysis of lung cancer stem cells
BURCU ŞEN BAĞCI
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
GenetikErciyes ÜniversitesiKök Hücre Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ SEÇİL YILMAZ
- Interaction mechanisms between small cell lung cancer cells and T lymphocytes
Küçük hücreli akciğer kanseri hücrelerinin T lenfositler ile etkileşim mekanizmaları
MUAMMER ALPER KURŞUNEL
Doktora
İngilizce
2019
Moleküler TıpHacettepe ÜniversitesiTemel Onkoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÜNEŞ ESENDAĞLI
- Gemsitabin dirençli ve dirençsiz küçük hücreli dışı akciğer kanseri kökenli kanser kök hücrelerinden türetilen eksozomlarda mirna 221/222 kümesi profilinin incelenmesi
Investigation of mirna 221/222 cluster profile in exosomes derived from gemcitabine-resistant and gemcitabine-sensitive non-small cell lung cancer stem cells
AYNAZ GHORBANI
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
BiyolojiEskişehir Osmangazi ÜniversitesiKök Hücre Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ ONUR UYSAL
- H460 küçük hücreli dışı akciğer kanseri hücrelerinden kanser kök hücre izolasyonu ve karakterizasyonu
Cancer stem cell isolation and characterisation of H460 NON-SMALL cell lung cancer cell line
MERVE GÜNEŞ
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
Tıbbi Biyolojiİstinye ÜniversitesiTıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ MURADİYE ACAR