Geri Dön

SARS-CoV-2 nötralizasyon antikor testlerinde kullanılmak üzere pseudovirüslerin üretimi

Production of pseudovirus for use in SARS-CoV-2 neutralization antibody tests

  1. Tez No: 808600
  2. Yazar: ZEHRA KÖSEOĞLU
  3. Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ SEVAL CİNG YILDIRIM
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: COVID-19, SARS-CoV-2, pseudovirüs, başak proteini, nötralize edici antikorlar, COVID-19, SARS-CoV-2, pseudovirus, spike protein, neutralizing antibodies
  7. Yıl: 2023
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: İnönü Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 94

Özet

SARS-CoV-2, nötralize edici antikorların ana hedefi olan Spike proteinini kullanarak hücrelere girmektedir. Bu nedenle, antikorların ve serumların Spike aracılı viral enfeksiyonu nasıl etkilediğini ölçen analizler, bağışıklığı incelemek için önemlidir. SARS-CoV-2, biyogüvenlik düzeyi 3 olan bir virüs olduğundan, bu tür testleri güvenli bir şekilde yapmanın yolu, biyogüvenlik düzeyi 2 olan viral partikülleri Spike ile pseudotiplendirmektir. Bu tür pseudotiplemeler artık tek döngülü lentiviral, retroviral ve VSV partikülleri için tanımlanmıştır. Ancak bu işlemlerde kullanılan reaktifler ve protokoller geliştirilmelidir. Bu çalışmada nötralizan antikor testlerinde kullanılmak üzere, BSL-2 laboratuvarlarında gerçekleştirilen, HEK293T hücre hattının transfeksiyon prosedürü kullanılarak, insan bağışıklık yetmezliği virüsü çekirdeği (HIV-1), GFP proteini raportörlü ve SARS-CoV-2'nin spike (S) proteinini içeren pseudovirüsler üretilmiştir. Stab plazmid kültürlerinden plazmidlerinden izolasyonu, kompetent bakteri hücrelere transformasyonu ve izole edilen pDNA'ların transfeksiyon için özelleştirilmiş hücre hattı olan HEK293T'ye transfeksiyonu ile pseudovirüsler oluşturulmuştur. Üçlü plazmid transfeksiyonunda, Plazmid #39196 (pHIV-Luc-ZsGreen), plazmid #12263 (pCMV-delta R8.2) ve plazmid #149543 (pGBW-m4137384) kullanılmıştır. Pseudotiplemenin başarısı, pHIV-Luc-ZsGreen plazmidinin GFP için gen kodlamasını entegre ettiğinden, GFP ışıması ile değerlendirilmiştir. Transfeksiyonun 48. Saatinde GFP ışımaları hücre hattında tespit edilmiştir. Aşı uygulamalarından sonra yapılan nötralizan antikor testlerinde kullanılmak üzere güvenli ve kolay elde edilebilir bir yöntemle pseudovirüsler üretilebilmiştir.

Özet (Çeviri)

SARS-CoV-2 enters cells using the Spike protein, which is the target of neutralizing antibodies. Therefore, the assays that measure how antibodies affects Spike-mediated viral infection are important for studying immunity. Since SARS-CoV-2 is a biosafety level 3 virus, the safe way to perform such tests is to Spike pseudotyping biosafety level 2 viral particles. Such pseudo-typing has now been defined for single-cycle lentiviral, retroviral, and VSV particles. However, the reagents and protocols used in these procedures must be developed. In this study, pseudoviruses containing human immunodeficiency virus core (HIV-1), GFP protein reporter and spike (S) protein of SARS-CoV-2; using the transfection procedure of the HEK293T cell line, were produced in BSL-2 laboratories for use in neutralizing antibody tests. Pseudoviruses were generated by isolation of plasmids from stable plasmid cultures, transformation into competent bacterial cells, and transfection of isolated pDNAs into HEK293T, a specialized cell line for transfection. Plasmid #39196 (pHIV-Luc-ZsGreen), plasmid #12263 (pCMV-delta R8.2) and plasmid #149543 (pGBW-m4137384) were used in triple plasmid transfection. The success of pseudotyping was assessed by GFP irradiation, as the pHIV-Luc-ZsGreen plasmid integrates the gene coding for GFP. GFP irradiation was detected in the cell line at 48 hours of transfection. Pseudoviruses could be produced with a safe and easily obtainable method to be used in neutralizing antibody tests performed after vaccine administration.

Benzer Tezler

  1. Development of a pseudovirus-based assay for analysis of neutralizing activity against SARS-CoV-2

    SARS-CoV-2'ye karşı nötralizan aktivitenin analizi için psödovirus tabanlı test geliştirilmesi

    CEVRİYE PAMUKCU

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2021

    Allerji ve İmmünolojiSabancı Üniversitesi

    Mühendislik ve Doğa Bilimleri Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MEHMET SELİM ÇETİNER

    DR. ÖĞR. ÜYESİ TOLGA SÜTLÜ

  2. COVİD-19 geçiren hastalarda anti-SARS-Cov-2 antikor düzeylerinin elısa ve virüs nötralizasyon testi ile değerlendirilmesi

    Evaluation of anti-SARS-CoV-2 antibody levels in patients with COVİD-19 by elisa and virus neutralization test

    MEHMET İLKER TOSUN

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    MikrobiyolojiKahramanmaraş Sütçü İmam Üniversitesi

    Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ÖZLEM KİRİŞCİ

  3. Effect of BNT162b2 and CoronaVac boosters on humoral immunity of individuals previously fully vaccinated with CoronaVac against SARS-CoV-2: A longitudinal study

    CoronaVac ile SARS-CoV-2'ye karşı tam olarak aşılanmış bireylerde BNT162b2 ve CoronaVac hatırlatıcı dozlarının hümoral bağışıklık üzerindeki etkisi: Boylamsal bir çalışma

    ZEYNEP ECE KULOĞLU

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2022

    Allerji ve İmmünolojiKoç Üniversitesi

    İmmünoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. FÜSUN CAN

  4. COVİD-19 aşısı sonrası antikor yanıt izlemi, elecsys anti-SARS-COV-2 S testi ile nötralizasyon testinin karşılaştırılması

    Antibody response monitoring after COVID-19 vaccine, comparison of elecsys anti-SARS-COV-2 s test and neutralization test

    ZEYNEP ATALAY ALTINKAYNAK

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik MikrobiyolojiAnkara Yıldırım Beyazıt Üniversitesi

    Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. İMRAN HASANOĞLU

  5. COVID-19 hastalarında sars COV-2 virüs saçılımı ve nötralizan antikor düzeyleri

    Shedding of SARS COV-2 virus in COVID-19 patients and neutralizing antibody levels

    TUĞBA AYHANCİ

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    MikrobiyolojiSakarya Üniversitesi

    Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MUSTAFA ALTINDİŞ