Rekombinant immunoglobulin G1 monoklonal antikorununKluyveromyces lactis maya ekspresyon sistemi kullanılarak üretimi
Production of recombinant immunoglobulin g1 monoclonal antibodyusing Kluyveromyces lactis yeast expression system
- Tez No: 812722
- Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ EVREN DORUK ENGİN
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyomühendislik, Biyoteknoloji, Bioengineering, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2023
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ankara Üniversitesi
- Enstitü: Biyoteknoloji Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Temel Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 167
Özet
Hedeflerine yüksek afinite ile bağlanan monoklonal antikorlar, pek çok hastalığın tedavisinde önemli rol oynamaktadır. Son yıllarda, rekombinant DNA teknolojisindeki gelişmeler, hayvan aşılamasına gerek kalmadan monoklonal antikor üretimini mümkün hale getirmiştir. Memeli hücreleri gibi yaygın kullanılan platformların yanı sıra K.lactis gibi maya türleri de rekombinant protein üretimi için ön plana çıkmaktadır. Bu tez çalışmasında, K.lactis maya ekspresyon sistemi kullanılarak yaklaşık 150 kDa büyüklüğünde tam boyutlu trastuzumab üretilmiş ve hücre dışına salgılanması sağlanmıştır. Hafif ve ağır zincir dizileri başarılı bir şekilde pKLAC2 vektörüne klonlanmış ve K.lactis hücrelerine elektroporasyon yoluyla aktarılmıştır. Laktoz içeren BMLY besiyerinde indüklenen kültürde, hafif ve ağır zincir transkriptlerinin başarıyla üretildiği doğrulanmıştır. Trastuzumabın saflaştırılması için amonyum sülfat presipitasyonu ve hidrofobik etkileşim kromatografisi yöntemleri kullanılmıştır. SDS-PAGE ve western blot analizleri ile tam boyutlu trastuzumabın başarıyla üretilip hücre dışına salgılandığı doğrulanmıştır. Ayrıca, MCF7 hücre lizatı kullanılarak, saflaştırılmış trastuzumabın HER2 reseptörüne bağlanabildiği gösterilmiştir.
Özet (Çeviri)
Monoclonal antibodies that exhibit high affinity towards their targets play a crucial role in the treatment of numerous diseases. Advances in recombinant DNA technology have enabled the production of monoclonal antibodies without the requirement of animal vaccination in recent years. Apart from widely used platforms like mammalian cells, yeast species such as K. lactis have gained prominence in recombinant protein production. In this thesis, full-length trastuzumab which is approximately 150 kDa was produced using safthe K.lactis yeast expression system and secreted out of the cell. The light and heavy chain sequences were effectively cloned into the pKLAC2 vector and then introduced into K. lactis cells through electroporation. Expression of both light and heavy chain transcripts was confirmed through the induction of cultures in BMLY medium containing lactose. Ammonium sulfate precipitation and hydrophobic interaction chromatography methods were used for the purification of trastuzumab. Successful production and extracellular secretion of full-size trastuzumab was confirmed by SDS-PAGE and western blot analysis. Furthermore, using MCF7 cell lysate it has been demonstrated that purified trastuzumab can effectively bind to the HER2 receptor
Benzer Tezler
- İnsan immunoglobulin G1 bağlayan mikroorganizmaların saptanması için yöntem geliştirilmesi
Establishment of A method to detect human immunoglobulin G1 binding microorganisms
OLKAR HIGRAN ABDULMAJED ABDULMAJED
Doktora
Türkçe
2018
Klinik Bakteriyoloji ve Enfeksiyon HastalıklarıGazi ÜniversitesiTıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. KAYHAN ÇAĞLAR
- Herstellung und charakterisierung des fusionsproteins cd95-ig zur untersuchung der rolle der cd95/cd95l vermittelten apoptose bei 'transplantat-gegen-wirt' erkrankungen
Graft versus host' hastalığında cd95/cd95l iletilen apoptoz araştırmasında cd95-ıg füzyon proteinin üretimi ve karakterizasyonu
GERHARD WINGENDER
Yüksek Lisans
Almanca
1999
Allerji ve İmmünolojiJohannes Gutenberg-Universität MainzBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÜNTER DERİGS
- İnsan rekombinant nano-antikor yapılarından kanser tanısı ve tedavisine yönelik etken madde geliştirilmesi
Development of an active substance from human recombinant nano-antibody constructs for the diagnosis and treatment of cancers
NURŞAH ERSEZEN
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
BiyolojiGebze Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. TAMER YAĞCI
PROF. DR. BERRİN ERDAĞ
- Kanser tedavisi için rekombinant protein temelli aday ilaçların geliştirilmesi
Development of recombinant protein based drug candidates for cancer therapy
AYBİKE ERDOĞAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2017
BiyolojiDokuz Eylül ÜniversitesiTıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET ÖZTÜRK
- Development of anti-cancer single-domain antibody toolbox
Anti-kanser tek domainli antikor takımlarının geliştirilmesi
NAZLI EDA ESKİER
Doktora
İngilizce
2024
BiyomühendislikDokuz Eylül ÜniversitesiGenom Bilimleri ve Moleküler Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÖKHAN KARAKÜLAH