Recombinant production of bacterial endoglycosidase enzyme
Bakteriyel endoglikozidaz enziminin rekombinant üretimi
- Tez No: 936564
- Danışmanlar: PROF. DR. HÜLYA AYAR KAYALI
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Antikorlar-monoklonal, DNA-rekombinant, Enzim üretimi, Antibodies-monoclonal, DNA-recombinant, Enzyme production
- Yıl: 2025
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Dokuz Eylül Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Biyoteknoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Glikanların biyolojik sistemlerdeki rolünün anlaşılması, insan sağlığı için spesifik ve yararlı terapötik ajanların üretilmesini sağlayabilir. Endo S yaklaşık 108 kDa büyüklüğünde bir enzimdir. Bu enzim Streptococcus pyogenes tarafından üretilir ve Immunoglobulin G (IgG) üzerinde endo-β-N-asetilglukozaminidaz aktivitesi gösterir. Terapötik çalışmalara göre Endo S enziminin potansiyeli son yıllarda artmaktadır. Biyoteknoloji, rekombinant DNA teknolojosini kullanarak enzimin üretimini ve verimini artırmaya yardımcı olur. Bu çalışmada rekombinant Endo S enzimi üretilmiş ve enzim üretim verimini artırmak için optimizasyon parametreleri incelenmiştir. Öncelikle EndoS plazmitinin LB (Luria-Bertani)/ampisilin agara ekimi sağlanarak, tek koloni LB/ampisilin sıvı kültüre aktarılmıştır. Daha sonra ticari olarak temin edilen miniprep kiti kullanılarak plazmid izole edilmiştir. Enzim üretimi için plazmitin Escherichia coli BL21(DE3) plysS' ye dönüştürülmesinde IPTG (Isopropyl β-d-1- thiogalactopyranoside) indüksiyonlu ısı şoku yöntemi kullanılmıştır. Hücre peletleri, bir sonikatör veya homojenleştirici ile parçalanmıştır. Parçalama ve enzim saflaştırmasından sonra, proteinleri görselleştirmek için sodyum dodesil sülfatpoliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) yapılmıştır. Saflaştırılmış Endo S, IgG'lerin Fc bölgesindeki glikanları hidrolize etmek için kullanılmıştır. mAb'nin delokalizasyonu, SDS PAGE'de ve Dört Kutuplu Uçuş Süresi Kütle Spektrometresi ile gösterilmiştir. Enzim üretim etkinliğini artırmak için lizis tamponları, IPTG konsantrasyonu, karbon, azot ve mineral kaynakları incelenmiştir. IgG deglikosilazyonda Endo S aktivitesi için en uygun koşulu bulmak üzere lizat görüntü sonuçları ANOVA testi kullanılarak karşılaştırılmıştır.
Özet (Çeviri)
Understanding the role of glycans in biological systems, can provide to generate specific and useful therapeutic agents for human health. Endo S is an enzyme which is approximately 108 kDa size. This enzyme is produced by Streptococcus pyogenes and shows endo-β-N-acetylglucosaminidase activity on Immunoglobulin G (IgG). The potential of Endo S enzyme in therapeutic studies has increased in the last decades. Biotechnology helps to increase the production and yield of the enzyme by using recombinant technology. In this study, recombinant Endo S enzyme has been produced and optimization parameters have been tried to increase the yield of enzyme production. First of all, the plasmid of EndoS transformation into LB (Luria-Bertani )/ ampicillin agar was achieved and a single colony was transferred to LB/ ampicillin broth. Then, the plasmid was isolated by using commercially available miniprep kit. Heat shock method with IPTG (Isopropyl β-d-1-thiogalactopyranoside) induction was used for the transformation into Escherichia coli BL21(DE3) plysS for enzyme production. Cells pellets were lysed by a sonicator or homogenizer. After lysis and enzyme purification, SDS-PAGE was performed to visualize the proteins. Purified Endo S was used to hydrolyze glycans in the Fc region of IgGs. The delocalization of mAb was shown on SDS PAGE and by Quadrupole Time-of-Flight Mass Spectrometry. Lysis buffers, IPTG concentration, carbon, nitrogen, and mineral sources were studied to increase enzyme production efficiency. Lysate image results were compared using the ANOVA test to find the optimal condition for Endo S activity in IgG deglycosylation
Benzer Tezler
- Nicotiana benthamiana bitkisinde ın vivo endo H ile deglikozile edilmiş PA83'ün diğer PA83 formları ile karşılıklı stabilite çalışmaları
Comparative stability studies of endo H in vivo deglycosylated PA83 with other PA83 forms in Nicotiana benthamiana plants
DENİZ SAY
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
BiyoteknolojiAkdeniz ÜniversitesiTarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. TARLAN MAMMEDOV
- Gen transferinden hayvancılıkta yararlanma yolları
The Ways of using the gene transfer in animal breeding
SAİM BOZTEPE
- HIV infeksiyonlu kişilerin risk gruplarına göre dağılımları ve HIV infeksiyonu tanısında çeşitli serolojik yöntemlerin karşılaştırılması
Başlık çevirisi yok
GÜLDEN YILMAZ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1989
Mikrobiyolojiİstanbul ÜniversitesiMikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ENVER TALİ ÇETİN
- Detection of deletion mutations in duchenne muscular dystrophy patients by DNA analysis
Başlık çevirisi yok
ESRA İŞÇEN
