Recombinant production of bacterial endoglycosidase enzyme
Bakteriyel endoglikozidaz enziminin rekombinant üretimi
- Tez No: 936564
- Danışmanlar: PROF. DR. HÜLYA AYAR KAYALI
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2025
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Dokuz Eylül Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Biyoteknoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 78
Özet
Glikanların biyolojik sistemlerdeki rolünün anlaşılması, insan sağlığı için spesifik ve yararlı terapötik ajanların üretilmesini sağlayabilir. Endo S yaklaşık 108 kDa büyüklüğünde bir enzimdir. Bu enzim Streptococcus pyogenes tarafından üretilir ve Immunoglobulin G (IgG) üzerinde endo-β-N-asetilglukozaminidaz aktivitesi gösterir. Terapötik çalışmalara göre Endo S enziminin potansiyeli son yıllarda artmaktadır. Biyoteknoloji, rekombinant DNA teknolojosini kullanarak enzimin üretimini ve verimini artırmaya yardımcı olur. Bu çalışmada rekombinant Endo S enzimi üretilmiş ve enzim üretim verimini artırmak için optimizasyon parametreleri incelenmiştir. Öncelikle EndoS plazmitinin LB (Luria-Bertani)/ampisilin agara ekimi sağlanarak, tek koloni LB/ampisilin sıvı kültüre aktarılmıştır. Daha sonra ticari olarak temin edilen miniprep kiti kullanılarak plazmid izole edilmiştir. Enzim üretimi için plazmitin Escherichia coli BL21(DE3) plysS' ye dönüştürülmesinde IPTG (Isopropyl β-d-1- thiogalactopyranoside) indüksiyonlu ısı şoku yöntemi kullanılmıştır. Hücre peletleri, bir sonikatör veya homojenleştirici ile parçalanmıştır. Parçalama ve enzim saflaştırmasından sonra, proteinleri görselleştirmek için sodyum dodesil sülfatpoliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) yapılmıştır. Saflaştırılmış Endo S, IgG'lerin Fc bölgesindeki glikanları hidrolize etmek için kullanılmıştır. mAb'nin delokalizasyonu, SDS PAGE'de ve Dört Kutuplu Uçuş Süresi Kütle Spektrometresi ile gösterilmiştir. Enzim üretim etkinliğini artırmak için lizis tamponları, IPTG konsantrasyonu, karbon, azot ve mineral kaynakları incelenmiştir. IgG deglikosilazyonda Endo S aktivitesi için en uygun koşulu bulmak üzere lizat görüntü sonuçları ANOVA testi kullanılarak karşılaştırılmıştır.
Özet (Çeviri)
Understanding the role of glycans in biological systems, can provide to generate specific and useful therapeutic agents for human health. Endo S is an enzyme which is approximately 108 kDa size. This enzyme is produced by Streptococcus pyogenes and shows endo-β-N-acetylglucosaminidase activity on Immunoglobulin G (IgG). The potential of Endo S enzyme in therapeutic studies has increased in the last decades. Biotechnology helps to increase the production and yield of the enzyme by using recombinant technology. In this study, recombinant Endo S enzyme has been produced and optimization parameters have been tried to increase the yield of enzyme production. First of all, the plasmid of EndoS transformation into LB (Luria-Bertani )/ ampicillin agar was achieved and a single colony was transferred to LB/ ampicillin broth. Then, the plasmid was isolated by using commercially available miniprep kit. Heat shock method with IPTG (Isopropyl β-d-1-thiogalactopyranoside) induction was used for the transformation into Escherichia coli BL21(DE3) plysS for enzyme production. Cells pellets were lysed by a sonicator or homogenizer. After lysis and enzyme purification, SDS-PAGE was performed to visualize the proteins. Purified Endo S was used to hydrolyze glycans in the Fc region of IgGs. The delocalization of mAb was shown on SDS PAGE and by Quadrupole Time-of-Flight Mass Spectrometry. Lysis buffers, IPTG concentration, carbon, nitrogen, and mineral sources were studied to increase enzyme production efficiency. Lysate image results were compared using the ANOVA test to find the optimal condition for Endo S activity in IgG deglycosylation
Benzer Tezler
- Rekombinant antikor fragmentlerinin üretimi ve genetik modifikasyonuyla sitokin ölçümüne yönelik immünoassay geliştirilmesi
Production and genetic modification of antibody fragments for development of a cytokine detection immunoassay
DİLEK ŞAHİNBAŞ
Doktora
Türkçe
2024
BiyomühendislikHacettepe ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. EDA ÇELİK AKDUR
- Rekombinant E.coli soylarından penisilin asilaz üretiminin biyoreaktör koşullarında optimizasyonu
The optimization of penicillin acylase production recombinant E.coli strains by using bioreactor
IRMAK ŞAH
Yüksek Lisans
Türkçe
2007
BiyolojiGebze Yüksek Teknoloji EnstitüsüBiyoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. SALİHA İŞSEVER ÖZTÜRK
- Bakteri hemoglobin geninin (Enterobacteraerogenes)'in fizyolojik ve metabolik aktiviteleri üzerine etkisi
Başlık çevirisi yok
ŞEBNEM ÖZALP ERENLER
- Pichia pastoris'te rekombinant bakteriyel alfa amilaz üretimi
Production of recombinant bacterial alpha amylase in Pichia pastoris
ŞEYDA GÜLLÜ
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
Gıda MühendisliğiAkdeniz ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET İNAN
- Novel cellulase enzyme production towards biofuels sector by recombinant bacterium Escherichia coli
Biyoyakıt sektörüne yönelik yeni nesil selülaz enzimlerinin rekombinant Escherichia coli bakterisinde üretimi
ZEHRA YILDIRIM
Yüksek Lisans
İngilizce
2015
BiyomühendislikHacettepe ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. EDA ÇELİK AKDUR