Geri Dön

Diaçilgliserol kinaz enzim aktivitesi ölçümünde yüksek performans ince tabaka kromatografisinin kullanılabilirliğinin araştırılması

Investigation of the usability of high performance thin layer chromatography for measurement of diacylglycerol kinase enzyme activity

  1. Tez No: 834023
  2. Yazar: ENDER ERDOĞAN
  3. Danışmanlar: PROF. DR. ÖZGÜR KAYNAR
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2023
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Atatürk Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyokimya (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 96

Özet

Amaç: Bu çalışmanın amacı; Diaçilgliserol kinaz enzim aktivitesinin ilk defa Yüksek Performans İnce Tabaka Kromatografisi ile ölçümünün yapılabilirliğini araştırmaktır. Materyal ve Metod: Öncelikle farklı konsantrasyonlarda (0-1000 μmol) floresan işaretli diaçil gliserol kullanarak YPİTK metodunun tespit limitleri ve geçerliliği ortaya kondu. Sonrasında 1 U standart DGK enzimleri ile 0-400 nmol NBD-DAG, 37ºC' de ayrı ayrı inkübe edilerek substrattan dakikada açığa çıkan nmol ürün miktarları tespit edildi (Aktivite, nmol/dakika). Daha sonra hem standart DGK solüsyonları hem florometrik YPİTK hem de diaçilgliserol kinaz ölçümünde en yaygın metod olan florometrik mikroplaka yöntemi ile DGK enzim aktiviteleri belirlendi. Bulgular: İlk önce 1.0 U DGK tarafından NBD-DAG' den açığa çıkan NBD-ürün konsantrasyon grafikleri çizildiğinde DAG-K, yüksek oranda tekrarlanabilir ve doğrusal seyreden“substrat-enzim aktivite”grafiği vermişlerdir. Daha sonra“reaksiyon karışımı içindeki substrat miktarına karşılık DGK tarafından NBD-DAG' dan açığa çıkarılan NBD-fosfatidik asit konsantrasyon grafiği çizildiğinde, yüksek oranda tekrarlanabilir ve doğrusal seyreden ”artan enzim/ürün" grafiği alındı. Sonuç: Diaçilgliserol kinaz standartlarında ve standart substrat konsantrasyonlarında florometrik mikroplaka yöntemi ve florometrik YPİTK ile DGK enzim aktivitesi ölçülerek, elde edilen veriler istatistiksel olarak karşılaştırılmış, iki metodun DGK enzim aktivite ölçüm sonuçlarının çoklu karşılaştırılmaları sonucu ise aralarında fark olmadığı ve böylece florometrik İTK yönteminin florometrik mikroplaka yöntemi yerine kullanılabileceği görülmüştür.

Özet (Çeviri)

Aim: The aim of this study; to investigate the feasibility of measuring diacylglycerol kinase enzyme activity for the first time with High Performance Thin Layer Chromatography. Material and method: First, the detection limits and validity of the YPITK method were demonstrated by using fluorescently labeled diacyl glycerol at different concentrations (0-1000 μmol). Afterwards, 1 mUnit of standard DGK enzymes and 0-400 nmol NBD-DAG were incubated separately at 37ºC and the amount of nmol product released from the substrate per minute was determined (Activity, nmol/min). Then, DGK enzyme activities were determined by fluorometric microplate method, which is the most common method for both standard DGK solutions, fluorometric HPTLC and diacylglycerol kinase measurement. Results: When the NBD-product concentration graphs released from NBD-DAG by 1.0 mUnit DGK were drawn first, DAG-K gave a highly reproducible and linear“substrate-enzyme activity”graph. Then, when the concentration graph of NBD-phosphatidic acid released from NBD-DAG by DGK versus the amount of substrate in the reaction mixture was plotted, a highly reproducible and linear“increasing enzyme/product”graph was obtained. Conclusion: By measuring DGK enzyme activity with the fluorometric microplate method and fluorometric HPTLC in diacylglycerol kinase standards and standard substrate concentrations, the obtained data were statistically compared and the results of multiple comparisons of the DGK enzyme activity measurement results of the two methods did not differ, and it was seen that the fluorometric TLC method could be used instead of the fluorometric microplate method.

Benzer Tezler

  1. Fasulye'de DGK (Diacylglycerol kinaz) genlerinin genom düzeyinde tanımlanması ve gen ifade düzeylerinin abiyotik stres faktörleri ile ilişkisi

    Genome-wide identification of DGK (Diacylglycerol kinase) genes in common bean and association of gene expression levels with abiotic stress factors

    MEHMET ZAHİT YEKEN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    ZiraatBolu Abant İzzet Baysal Üniversitesi

    Tarla Bitkileri Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. VAHDETTİN ÇİFTÇİ

    DOÇ. DR. GÖKSEL ÖZER

  2. Fare ovaryumunda protein kinaz c izotiplerinin dağılımı ve folikülogenezle ilişkisi

    The dıstrıbutıon of proteın kınase c ısotypes and theır correlatıon wıth follıculogenesıs ın mouse ovary

    FİLİZ TEPEKÖY

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    Histoloji ve EmbriyolojiAkdeniz Üniversitesi

    Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. GÖKHAN AKKOYUNLU

  3. Kültüre edilmiş rat aortik kas hücrelerinde anjiyotensin II uyarımlı ile p42/p44 MAPK (ERK-1/2) fosforilasyonunda fosfolipaz C ve Protein Kinaz C'nin rolü

    The role of phospholipase C and protein kinase C in angiotensin II-induced p42/p44 MAPK phosphorilation cultured vascular smooth muscle cells

    ARZU ÇETİN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2005

    BiyokimyaAkdeniz Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. AKIN YEŞİLKAYA

  4. Ghrelin hormonunun açil ve desaçil formlarının ratlarda karaciğer yağlanması ve biyokimyasal bulgulara etkisi

    Effects of acyl and desacyl form of ghrelin hormone on hepatic steatosis and biochemical findings in rats

    EMİNE ELİBOL

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    Beslenme ve DiyetetikGazi Üniversitesi

    Beslenme ve Diyetetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. YASEMİN AKDEVELİOĞLU

  5. Identification effects of protein kinase c activation in neurons under physiological and degenerative conditions

    Nöronlarda fizyolojik ve dejeneratif koşullar altında pkc aktivasyonunun etkilerinin araştırılması

    ŞİRİN KORULU KOÇ

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2012

    Biyolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    İleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ARZU KARABAY KORKMAZ