Diaçilgliserol kinaz enzim aktivitesi ölçümünde yüksek performans ince tabaka kromatografisinin kullanılabilirliğinin araştırılması
Investigation of the usability of high performance thin layer chromatography for measurement of diacylglycerol kinase enzyme activity
- Tez No: 834023
- Danışmanlar: PROF. DR. ÖZGÜR KAYNAR
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2023
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Atatürk Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 96
Özet
Amaç: Bu çalışmanın amacı; Diaçilgliserol kinaz enzim aktivitesinin ilk defa Yüksek Performans İnce Tabaka Kromatografisi ile ölçümünün yapılabilirliğini araştırmaktır. Materyal ve Metod: Öncelikle farklı konsantrasyonlarda (0-1000 μmol) floresan işaretli diaçil gliserol kullanarak YPİTK metodunun tespit limitleri ve geçerliliği ortaya kondu. Sonrasında 1 U standart DGK enzimleri ile 0-400 nmol NBD-DAG, 37ºC' de ayrı ayrı inkübe edilerek substrattan dakikada açığa çıkan nmol ürün miktarları tespit edildi (Aktivite, nmol/dakika). Daha sonra hem standart DGK solüsyonları hem florometrik YPİTK hem de diaçilgliserol kinaz ölçümünde en yaygın metod olan florometrik mikroplaka yöntemi ile DGK enzim aktiviteleri belirlendi. Bulgular: İlk önce 1.0 U DGK tarafından NBD-DAG' den açığa çıkan NBD-ürün konsantrasyon grafikleri çizildiğinde DAG-K, yüksek oranda tekrarlanabilir ve doğrusal seyreden“substrat-enzim aktivite”grafiği vermişlerdir. Daha sonra“reaksiyon karışımı içindeki substrat miktarına karşılık DGK tarafından NBD-DAG' dan açığa çıkarılan NBD-fosfatidik asit konsantrasyon grafiği çizildiğinde, yüksek oranda tekrarlanabilir ve doğrusal seyreden ”artan enzim/ürün" grafiği alındı. Sonuç: Diaçilgliserol kinaz standartlarında ve standart substrat konsantrasyonlarında florometrik mikroplaka yöntemi ve florometrik YPİTK ile DGK enzim aktivitesi ölçülerek, elde edilen veriler istatistiksel olarak karşılaştırılmış, iki metodun DGK enzim aktivite ölçüm sonuçlarının çoklu karşılaştırılmaları sonucu ise aralarında fark olmadığı ve böylece florometrik İTK yönteminin florometrik mikroplaka yöntemi yerine kullanılabileceği görülmüştür.
Özet (Çeviri)
Aim: The aim of this study; to investigate the feasibility of measuring diacylglycerol kinase enzyme activity for the first time with High Performance Thin Layer Chromatography. Material and method: First, the detection limits and validity of the YPITK method were demonstrated by using fluorescently labeled diacyl glycerol at different concentrations (0-1000 μmol). Afterwards, 1 mUnit of standard DGK enzymes and 0-400 nmol NBD-DAG were incubated separately at 37ºC and the amount of nmol product released from the substrate per minute was determined (Activity, nmol/min). Then, DGK enzyme activities were determined by fluorometric microplate method, which is the most common method for both standard DGK solutions, fluorometric HPTLC and diacylglycerol kinase measurement. Results: When the NBD-product concentration graphs released from NBD-DAG by 1.0 mUnit DGK were drawn first, DAG-K gave a highly reproducible and linear“substrate-enzyme activity”graph. Then, when the concentration graph of NBD-phosphatidic acid released from NBD-DAG by DGK versus the amount of substrate in the reaction mixture was plotted, a highly reproducible and linear“increasing enzyme/product”graph was obtained. Conclusion: By measuring DGK enzyme activity with the fluorometric microplate method and fluorometric HPTLC in diacylglycerol kinase standards and standard substrate concentrations, the obtained data were statistically compared and the results of multiple comparisons of the DGK enzyme activity measurement results of the two methods did not differ, and it was seen that the fluorometric TLC method could be used instead of the fluorometric microplate method.
Benzer Tezler
- Fasulye'de DGK (Diacylglycerol kinaz) genlerinin genom düzeyinde tanımlanması ve gen ifade düzeylerinin abiyotik stres faktörleri ile ilişkisi
Genome-wide identification of DGK (Diacylglycerol kinase) genes in common bean and association of gene expression levels with abiotic stress factors
MEHMET ZAHİT YEKEN
Doktora
Türkçe
2021
ZiraatBolu Abant İzzet Baysal ÜniversitesiTarla Bitkileri Ana Bilim Dalı
PROF. DR. VAHDETTİN ÇİFTÇİ
DOÇ. DR. GÖKSEL ÖZER
- Fare ovaryumunda protein kinaz c izotiplerinin dağılımı ve folikülogenezle ilişkisi
The dıstrıbutıon of proteın kınase c ısotypes and theır correlatıon wıth follıculogenesıs ın mouse ovary
FİLİZ TEPEKÖY
Yüksek Lisans
Türkçe
2011
Histoloji ve EmbriyolojiAkdeniz ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. GÖKHAN AKKOYUNLU
- Kültüre edilmiş rat aortik kas hücrelerinde anjiyotensin II uyarımlı ile p42/p44 MAPK (ERK-1/2) fosforilasyonunda fosfolipaz C ve Protein Kinaz C'nin rolü
The role of phospholipase C and protein kinase C in angiotensin II-induced p42/p44 MAPK phosphorilation cultured vascular smooth muscle cells
ARZU ÇETİN
- Ghrelin hormonunun açil ve desaçil formlarının ratlarda karaciğer yağlanması ve biyokimyasal bulgulara etkisi
Effects of acyl and desacyl form of ghrelin hormone on hepatic steatosis and biochemical findings in rats
EMİNE ELİBOL
Doktora
Türkçe
2021
Beslenme ve DiyetetikGazi ÜniversitesiBeslenme ve Diyetetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. YASEMİN AKDEVELİOĞLU
- Identification effects of protein kinase c activation in neurons under physiological and degenerative conditions
Nöronlarda fizyolojik ve dejeneratif koşullar altında pkc aktivasyonunun etkilerinin araştırılması
ŞİRİN KORULU KOÇ
Doktora
İngilizce
2012
Biyolojiİstanbul Teknik Üniversitesiİleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ARZU KARABAY KORKMAZ