A549 insan akciğer adenokarsinom hücre hattında rna temelli p53 tümör supresör gen aktivasyonu ve kras proto-onkogen inhibisyonunun kombine olarak terapötik kullanımının araştırılması
Investigation of the combined therapeutic use of rna-based P53 tumor suppressor gene activation and kras proto-oncogene inhibition in the A549 human lung adenocarcinoma cell line
- Tez No: 843149
- Danışmanlar: PROF. DR. AHMET KOÇ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Tıbbi Biyoloji, Medical Biology
- Anahtar Kelimeler: A549, HCT116, siRNA, saRNA, KRAS, p53, A549, HCT116, siRNA, saRNA, KRAS, p53
- Yıl: 2023
- Dil: Türkçe
- Üniversite: İnönü Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 110
Özet
Amaç: Çalışmada, mutant KRAS ve yabani tip p53 taşıyan kanser hücrelerinde KRAS ekspresyonunu inhibe eden siRNA ile p53 ekpresyonunu aktive eden saRNA'nın birlikte kullanımının ayrı ayrı transfeksiyonlarına kıyasla antikanser etkisinin ortaya konması ve yeni bir RNA temelli terapötik yaklaşım geliştirilmesi amaçlanmıştır. Materyal ve Metot: Çalışmada temel olarak A549 hücre hattı ve kontrol olarak HCT116 hücre hattı kullanıldı. AuNP sentezi gerçekleştirildi, sentezlenen AuNP'lerin küçük RNA'lar ile konjugasyonları yapıldı ve hücreler konjugatlar ile transfekte edildi. Transfeksiyon sonrası mRNA ve protein ekspresyonu analizleri sırasıyla RT-qPCR ve Western Blot yöntemleri ile gerçekleştirildi. mRNA ve protein analizleri ile etkili küçük RNA konsantrasyonları belirlendi. Belirlenen konsantrasyonlar kullanılarak kombine ve ayrı ayrı olarak transfeksiyon işlemleri gerçekleştirildi ve hücre canlılığı testi, hücre döngüsü analizi, apoptoz ve nekroz testi, koloni oluşturma deneyi, yara iyileşmesi deneyi, invazyon ve migrasyon deneyleri yapılarak tranfeksiyonun neden olduğu hücresel düzeyde olaylar incelendi. Student's t-test uygulanarak sonuçlar istatistiksel olarak değerlendirildi. Bulgular: Her iki küçük RNA'nın birlikte 50 nM konsantrasyonla transfekte edilmesi, ayrı ayrı transfeksiyonlarına kıyasla sırasıyla A549 ve HCT116 hücre hatlarında p53 mRNA seviyelerinde (p0.05). Her iki hücre hattında, kombine tedavi yaklaşımının ayrı ayrı transfeksiyonlara kıyasla hücre döngüsünü G0/G1 fazında daha fazla durdurduğu, apoptozu daha çok tetiklediği ve hücre proliferasyonunu, koloni oluşturma yeteneğini, invazyonu ve migrasyonu daha fazla azalttığı belirlendi. Sonuç: Çalışmamıza konu olan kombine yaklaşımın her iki hücre hattı için kontrol grubuna kıyasla antikanser etki sağladığı ve bu yaklaşımın her iki küçük RNA'nın ayrı ayrı sağlamış olduğu antikanser etkiye oranla çok daha fazla antikanser etkiye sahip olduğu ortaya konmuştur.
Özet (Çeviri)
Aim: The study aimed to reveal the anticancer effect of the combined use of siRNA, which inhibits KRAS expression, and saRNA, which activates p53 expression, in cancer cells carrying mutant KRAS and wild-type p53, compared to their separate transfections, and to develop a new RNA-based therapeutic approach. Materials and Methods: In the study, A549 cell line was used as the basis and HCT116 cell line was used as a control. AuNP synthesis was performed, the synthesized AuNPs were conjugated with small RNAs and the cells were transfected with the conjugates. Post-transfection mRNA and protein expression analyzes were performed by RT-qPCR and Western Blot methods, respectively. Effective small RNA concentrations were determined by mRNA and protein analyses. Combined and separate transfection processes were carried out using the determined concentrations, and the events at the cellular level caused by transfection were examined by performing cell viability test, cell cycle analysis, apoptosis and necrosis test, colony formation experiment, wound healing experiment, invasion and migration experiments. The results were evaluated statistically by applying Student's t-test. Results: Co-transfection of small RNAs at a concentration of 50 nM was found to result in a significant increase in p53 mRNA levels (p0.05) in the A549 and HCT116 cell lines, respectively, compared to their individual transfections. In both cell lines, it was determined that the combined treatment approach more effectively arrested the cell cycle at the G0/G1 phase, triggered apoptosis to a greater extent, and significantly reduced cell proliferation, colony formation ability, invasion, and migration compared to individual transfections. Conclusion: It has been demonstrated that the combined approach subject to our study provides an anticancer effect for both cell lines compared to the control group, and that this approach has a much greater anticancer effect than the anticancer effect provided by both small RNAs separately.
Benzer Tezler
- Akciğer kanserinde karboplatin ve kurkumin kombinasyonlarının oksidatif stres üzerindeki etkisi
The effect of carbolatin ve curcumin combinations onoxidative stress in lung cancer
MİNE EZER
- PTFE (Polytetrafluoroethylene) nanopartiküllerin ın vıtro toksisite ve etkinlik potansiyelinin belirlenmesi
Determination of in vitro toxicity and activity potential of PTFE (Polytetrafluoroethylene) nanoparticles
MERVE TOKMAK
Yüksek Lisans
Türkçe
2024
BiyoteknolojiAtatürk ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ BUKET BAKAN
- Terpenoidlerin kanser hücreleri üzerindeki antitümör etkileri
Antitumor effects on cancer cells of terpenoids
MERVE ÇETİN
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
BiyolojiEskişehir Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HATİCE MEHTAP KUTLU
- Bir grup açilaminoalkanamit bileşiğinin sentezi ve biyoaktivitelerinin araştırılması
Synthesis and bioactivity ınvestigation on a group of acylaminoalkanamide derivatives
GÜNEŞ ÇOBAN
Doktora
Türkçe
2011
Eczacılık ve FarmakolojiEge ÜniversitesiFarmasötik Kimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. VAROL PABUÇCUOĞLU
- Oryza sativa Linn. atık kabuklarının ekstrasksiyonunun biyoaktivite rehberli optimizasyonu ve çeşitli tümör hücreleri üzerindeki antitümörojenik aktivitelerinin araştırılması
Oryza sativa Linn. investigation of antitumorigenic activities on the bioactive guidance optimization and various tumor cells in extraction of waste husk
VELİ BARULAY
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
BiyoteknolojiKocaeli ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. CANAN SEVİMLİ GÜR