Optimization and risk assessment of RAB27A-/- gene therapy alternatives using current molecular techniques and technologies
Güncel moleküler teknikler ve teknolojiler kullanılarak RAB27A-/- gen tedavi alternatiflerinin optimizasyonu ve risk değerlendirilmesi
- Tez No: 845985
- Danışmanlar: DOÇ. DR. FATİMA SUSANNA FAUSTİNA AERTS KAYA
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Moleküler Tıp, Genetik, Molecular Medicine, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Griscelli Sendromu Tip 2, CRISPR/Cas9, lentivirüs, kök hücreler (*), Griscelli Syndrome Type 2, CRISPR/Cas9, lentivirus
- Yıl: 2024
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kök Hücre Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Griscelli Sendromu Tip 2 (GS-2), ekzositoz ve membran trafiğinde rol oynayan RAB27A geninde meydana gelen mutasyonların neden olduğu bir immün yetersizliktir. Bu tez kapsamında 1) GS-2 MKH'leri ve uPKH hatlarını kullanarak RAB27A'nın CRISPR/Cas9 gen düzenlemesinin etkinliğini; 2) LV vektörlerinin SFFV, PGK ve UCOE promoterlerinin kontrolünde MSC'lere aktarım ve RAB27A ekspresyon etkinliğini ve 3) immun yetmezlikli farelerde RAB27A'nın aşırı ifadesine bağlı potansiyel riskleri araştırılmıştır. RAB27A'daki mutasyonları hedef alan CRISPR/Cas9 elemanları tasarlanmış ve GS-2 MKH ve uPKH hatlarında gen düzeltme etkinliği test edilmiştir. Yeni bir GS-2 uPKH hattı oluşturulmuştur ve hücre kültürü/dondurma yöntemi optimize edilmiştir. RAB27A'nın CRISPR/Cas9 yöntemi ile düzeltilmesi mümkün olmasına rağmen kök hücrelerin hayatta kalım oranı düşük olarak bulunmuştur. GS-2 MKH'lere LV transdüksiyonu yapıldığında en yüksek ifadeyi SFFV'nin sağladığı ardından PGK ve UCOE'nun takip ettiği gösterilmiştir. RAB27A+ MKH'ler ve HKH'ler, immun yetmezlikli farelere nakledilmiştir ancak tümör oluşumuna neden olmamıştır. Ancak RAB27A'nın aşırı ifadesinin kök hücre fonksiyonunu etkilediği gösterilmiştir. Sonuç olarak, GS-2 gen tedavisinin geliştirilmesinde CRISPR/Cas9 ile gen düzenleme ve LV vektörü ile gen ekleme karşılaştırılmıştır. Gen düzenleme yeterli düzeyde onarım yapmasına rağmen CRISPR aktarım teknolojisi hücre canlılığının düşürmektedir. LV gen aktarımı kolay ve etkindir ancak RAB27A'nın yüksek ifadesi kök hücre fonksiyonu etkilemektedir. Bu nedenle, her iki yöntem de GS-2 için gen tedavisine yönelik olarak geliştirilebilir, ancak bu tedaviler klinik kullanıma hazır olmadan önce yöntemlerin optimizasyonu, hücre canlılığının arttırılması ve ifade seviyelerinin tam olarak ayarlanması gerekli olabilir.
Özet (Çeviri)
Griscelli Syndrome Type 2 (GS-2) is caused by a mutation in RAB27A which plays a role in exocytosis and membrane trafficking, resulting in immune deficiency. Here, we investigated 1) the efficacy of CRISPR/Cas9 gene editing of RAB27A using GS-2 MSCs and iPSC lines; 2) the efficacy of LV vectors to transduce MSCs and express RAB27A under the control of the SFFV, PGK and UCOE promoters, and 3) potential risks related to overexpression of RAB27A in immune deficient mice. We designed CRISPR/Cas9 constructs that target mutations in RAB27A and tested the gene correction efficacy on GS-2 MSC and iPSC lines. We generated a new GS-2 iPSC line and optimized cell culture/cryopreservation. Although editing of RAB27A using CRISPR/Cas9 is possible, survival of the stem cells was low. Transduction of GS-2 MSCs with LV vectors showed the highest RAB27A expression with SFFV, followed by PGK and UCOE. RAB27A+ MSCs and HSCs were transplanted into immune deficient mice but did not cause tumor formation. However, RAB27A overexpression may affect stem cell function. In conclusion, we compared gene editing with CRISPR/Cas9 and gene adding with LV vectors for the development of gene therapy for GS-2. Although gene editing results in acceptable levels of repair, the technology results in low cell viability. LV gene transfer was easy and robust, but high expression of RAB27A affected stem cell function. Thus, both methods can be developed into gene therapy for GS-2, but optimization of the procedures, increasing cell viability and fine-tuning of expression levels may be necessary before these therapies are ready for clinical use.
Benzer Tezler
- Üst yapı projelerinde imalat iş planı temelli risk ile maliyet odaklı iş güvenliği planı hazırlanması yaklaşımı
Creating health and safety management plan according to project schedule of residental construction projects, focusing on risk and cost
KAĞAN ERKEK
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
İnşaat MühendisliğiÇankaya ÜniversitesiFen Bilimleri Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ BENHÜR SATIR
- Analysis methodology, distribution, and health risk assessment of size-segregated airborne micro(nano)plastics
Havadaki boyut ayrımlı mikro(nano)plastiklerin analiz metodolojisi, dağılımı ve sağlık riski değerlendirmesi
PARISA AKBARI DANA
Doktora
İngilizce
2025
Çevre MühendisliğiEskişehir Teknik ÜniversitesiÇevre Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. KADİR GEDİK
PROF. DR. EFTADE GAGA
- İki farklı iş sağlığı ve güvenliği risk değerlendirme metodolojisinin bir işletmede uygulamalı karşılaştırılması
Comparison of two different occupational health and safety risk assessment methodology in a practical management
ACUNER ÖZKAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
Mühendislik BilimleriDumlupınar ÜniversitesiMakine Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ ÜMRAN ERÇETİN
- Kardiyak cerrahi hastalarında preoperatif ve postoperatif dönemde risk analizi ile ilaç tedavisinin incelenmesi
Risk analysis and management for medication optimization in the preoperative and postoperative period of cardiac surgical patients
BURCU KELLECİ ÇAKIR
Doktora
Türkçe
2023
Göğüs Kalp ve Damar CerrahisiHacettepe ÜniversitesiKlinik Eczacılık Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AYGİN EKİNCİOĞLU
- Gemi siber güvenlik dinamiklerinin belirlenmesi ve köprüüstü seyir ekipmanlari özelinde siber güvenlik risk değerlendirme uygulamalari
Determination of ship cyber security dynamics and cyber security risk assessment applications specifically for bridge navigation equipment
BÜNYAMİN GÜNEŞ
Doktora
Türkçe
2025
Denizcilikİstanbul Teknik ÜniversitesiDeniz Ulaştırma İşletme Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. PELİN BOLAT