Desellülarize sinir grefti ile periferik sinir defektlerinin onarımında wharton jeli kaynaklı mezenkimal kök hücre, condıtıoned medıum ve cerrahi anjiyogenezin sinir rejenerasyonu üzerindeki etkinliğinin araştırılması: Deneysel çalışma
Investigation of the effects of wharton's jelly-derived mesenchymal stem cells, conditioned medium, and surgical angiogenesis on nerve regeneration in peripheral nerve defects using decellularized nerve grafts: An experimental study
- Tez No: 878011
- Danışmanlar: PROF. DR. ZEKERİYA TOSUN
- Tez Türü: Tıpta Uzmanlık
- Konular: Plastik ve Rekonstrüktif Cerrahi, Plastic and Reconstructive Surgery
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2024
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Selçuk Üniversitesi
- Enstitü: Tıp Fakültesi
- Ana Bilim Dalı: Plastik Rekonstrüktif ve Estetik Cerrahi Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 161
Özet
Giriş Periferik sinir defektleri duyusal ve motor fonksiyon kaybına yol açan, klinik pratikte sık karşılaşılan önemli bir sorundur. Otogreftler kritik boyuttaki defektlerin onarımında altın standart olarak görülmekle birlikte duyu kaybı, nöroma, ağrı ve skar gibi donör alan problemlerine ve uzamış operasyon süresine neden olabilmektedir (4). Literatürde otogreftlere alternatif olabilecek asellüler sinir allogreftleri (ASG) tanımlanmış olsa da ASG ile fonksiyonel kazanımlarda henüz istenilen düzeye ulaşılamamış olması araştırmacıları ek arayışlara yönlendirmiştir. Bu çalışmanın amacı, periferik sinir defektlerinin ASG ile onarımlarında daha iyi fonksiyonel rejenerasyon sağlayabilmek için Wharton Jeli kaynaklı mezenkimal kök hücre (WJ-MKH), Conditioned medium (CM) ve cerrahi anjiyogenezin (CA) etkinliğinin değerlendirilmesidir. Gereç ve Yöntem A. Çalışma Planı Etik kurul onayını takiben 56 adet, 7-12 haftalık, 250-350 gr Wistar Albino cinsi erkek rat çalışmaya dahil edildi. Her grupta 8 rat olacak şekilde rastgele 7 gruba ayrıldı. Tüm ratların sol arka ekstremitesinde, literatürde tanımlanan kritik boyutta 10 mm'lik siyatik sinir defekt modeli oluşturuldu. Grup 1: Kontrol grubu, Otogreftle onarım Grup 2: ASG Grup 3: ASG + WJ-MKH Grup 4: ASG + CM Grup 5: ASG + CA Grup 6: ASG + WJ-MKH + CA Grup 7: ASG + CM + CA B. Allogreftlerin Eldesi ve Desellülarizasyonu 24 adet, 7-12 haftalık, 250-350 gr Sprague Dawley rattan bilateral 10 mm'lik siyatik sinir grefti alındı. Greftlerin desellülarizasyonunda 'Noniyonik deterjan + Anyonik deterjan' prosedürü uygulandı. C. WJ-MKH ve CM Hazırlanması ve Ön Koşullama WJ-MKH'lere, serum aracılı kök hücre aktivasyonu tekniğine uygun olarak ön koşullandırma yapıldı ve kültüre edildi. Hücrelerin karakterizasyonu, farklılaşma potansiyeli ve hücre sayımı flow sitometrik olarak incelenerek validasyon yapıldı. Kültür sıvılarından CM elde edildi. WJ-MKH ve CM'nin ASG'ye ekimi, fibrin damla yöntemiyle gerçekleştirildi. WJ-MKH ve CM içeren gruplarda, her bir ASG için 1x106 WJ-MKH ve bunlardan üretilmiş CM uygulandı. D. Cerrahi Teknik Tüm gruplarda, mikroskop altında gluteal kas ve biceps femoris kası arasındaki intermusküler oluktan insizyon yapıldı. Künt diseksiyonla siyatik sinir açığa çıkarıldı. 10 mm'lik sinir defekti oluşturuldu. Çıkarılan sinir grefti, Grup 1'de otogreft olarak uygulandı. Diğer tüm gruplarda ASG ile defekt onarımı yapıldı. Grup 5, Grup 6 ve Grup 7'de (CA eklenen gruplar) Süperfisyal İnferior Epigastrik Arter Adipofasyal Flebi, literatürde tarif edildiği şekilde ventral abdomen bölgesinden kaldırılıp cilt altı tünelden geçirilerek siyatik sinir onarım bölgesine pediküllü olarak taşındı ve ASG etrafına sarıldı. Flebin viabilitesinin gösterilmesi amacıyla, lazer yardımlı ICG anjiyografisi (SPY Elite, Novadaq Technologies, USA) yapıldı ve flep dolaşımı teyit edildi. E. Değerlendirme 3, 6 ve 9. haftalarda Video Yardımlı Yürüme Analizi (VYYA), Siyatik Fonksiyonel İndeks (SFİ) ve Pin-prick Testi yapıldı. Bunlara ek olarak 9. haftada Elektrofizyolojik Değerlendirme (EMG), Histopatolojik ve İmmünhistokimyasal Analiz, Tibialis Anterior Kası Ağırlık ve Hacim Ölçümü yapıldı. F. İstatistik Veriler SPSS 26.0 ile normal dağılım testine tabi tutuldu, parametrik veriler One-way ANOVA ve nonparametrik veriler Kruskal-Wallis testi kullanılarak değerlendirildi. p0.05). 2. Histopatolojik ve İmmünhistokimyasal Bulgular Organize akson rejenerasyonu, beklendiği şekilde otogreft grubunda diğer tüm gruplardan anlamlı olarak yüksekti (p0.05). Yalnızca ASG uygulanan grup, otogreft grubundan vaskülarizasyon açısından belirgin olarak düşük bulundu (p
Özet (Çeviri)
Introduction Peripheral nerve defects are a significant issue encountered frequently in clinical practice, leading to sensory and motor function loss. While autografts are considered the gold standard for repairing critical-sized defects, they can cause donor site complications such as sensory loss, neuroma, pain, and scarring, as well as prolonged operation times. Although acellular nerve allografts (ANA) have been described as potential alternatives to autografts in the literature, their functional outcomes have not yet reached the desired level, prompting further research. This study aims to evaluate the effectiveness of Wharton's Jelly-derived mesenchymal stem cells (WJ-MSC), conditioned medium (CM), and surgical angiogenesis (SA) in achieving better functional regeneration in the repair of peripheral nerve defects using ANA. Materials and Methods A. Study Design Following ethical committee approval, 56 male Wistar Albino rats, aged 7-12 weeks and weighing 250-350 grams, were included in the study. They were randomly divided into 7 groups, each containing 8 rats. A 10 mm critical-sized sciatic nerve defect model, as described in the literature, was created on the left hind limb of all rats. Group 1: Control group, repaired with autograft Group 2: ANA Group 3: ANA + WJ-MSC Group 4: ANA + CM Group 5: ANA + SA Group 6: ANA + WJ-MSC + SA Group 7: ANA + CM + SA B. Decellularization of Allografts Bilateral 10 mm sciatic nerve grafts were obtained from 24 male Sprague Dawley rats, aged 7-12 weeks and weighing 250-350 grams. The 'Nonionic detergent + Anionic detergent' procedure was applied for graft decellularization. C. Preparation and Preconditioning of WJ-MSCs and CM WJ-MSCs were preconditioned and cultured according to the serum-mediated stem cell activation technique. Characterization, differentiation potential, and cell counting were validated via flow cytometry. CM was obtained from the culture media. WJ-MSCs and CM were implanted into the ANA using the fibrin drop method. In groups containing WJ-MSCs and CM, each ANA received 1x106 WJ-MSCs and their derived CM. D. Surgical Technique In all groups, a skin incision was made at the intermuscular groove between the gluteal muscle and biceps femoris muscle under a microscope. The sciatic nerve was exposed by blunt dissection, and a 10 mm nerve defect was created. The removed nerve graft was applied as an autograft in Group 1. In all other groups, the defect was repaired with ANA. In Groups 5, 6, and 7 (CA-added groups), the Superficial Inferior Epigastric Artery Adipofascial Flap was raised from the ventral abdomen region and pedicled to the sciatic nerve repair site through a subcutaneous tunnel. The viability of the flap was confirmed using laser-assisted ICG angiography. E. Assessment Tests Video-Assisted Walking Analysis (VAWA), Sciatic Functional Index (SFI), and Pin-prick Test were performed at weeks 3, 6, and 9. Additionally, at week 9, Electrophysiological Evaluation, Histopathological and Immunohistochemical Analysis, Tibialis Anterior Muscle Weight and Volume Measurement were conducted. F. Statistics Data were tested for normal distribution with SPSS 26.0, and parametric data were evaluated using One-way ANOVA, while nonparametric data were assessed using the Kruskal-Wallis test. A p-value of 0.05). Histopathological and Immunohistochemical Findings Organized axon regeneration was significantly higher in the autograft group compared to all other groups (p0.05). The ANA group had significantly lower vascularization compared to the autograft group (p
Benzer Tezler
- Biyomalzeme kullanımına yönelik sığır sıs deselülerizasyonu ve sıçanlarda kritik boyutlu tam kalınlık yara iyileşme modelinde etkinliğinin değerlendirilmesi
Decellularization of bovine sis for biomaterial use and assessment of efficacy in a rat critical-size full-thickness wound repair model
MAHMUT PARMAKSIZ
- Hücresizleştirilmiş sığır gözü kası ve PCL-kas matriksi doku iskeleleriyle göz kası rejenerasyonu
Extracellular muscle regeneration by decellularized bovine muscle and PCL-muscle matrix composite tissue scaffolds
FATMA YÜLEK
Doktora
Türkçe
2021
BiyomühendislikHacettepe ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MENEMŞE GÜMÜŞDERELİOĞLU
- Development of a natural tubular scaffold from decellularized parsley stems to be used in vascular tissue engineering applications
Vasküler doku mühendisliği uygulamalarında kullanılmak üzere hücresizleştirilmiş maydanoz saplarından tübüler doku mühendisliği iskelesi geliştirilmesi
MERVE ÇEVİK
Yüksek Lisans
İngilizce
2024
Biyoteknolojiİzmir Yüksek Teknoloji EnstitüsüBiyoteknoloji ve Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ SERKAN DİKİCİ
PROF. DR. ENGİN ÖZÇİVİCİ
- Sıçan siyatik sinir defekt modelinde cerrahi anjiogenez ve yağ doku kökenli mezenkimal kök hücrelerin erken fonksiyonel düzelmeye etkisi
The effect of surgical angiogenesis and adipose derived mesenchymal stem cells on early functional recovery in rat sciatic nerve defect model
DUYGU ŞİBAR
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2023
Plastik ve Rekonstrüktif CerrahiGazi ÜniversitesiPlastik ve Rekonstrüktif Cerrahi Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ SERHAT ŞİBAR
- Sinir doku mühendisliği için hücrelerinden arındırılmış sığır omuriliğinin insan adipoz mezenkimal kök hücrelerle etkileşimlerinin incelenmesi
Investigating the interactions of human adipose mesenchymal stem cells with decellularized bovine spinal cord for neural tissue engineering
BURCU EFE
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
BiyokimyaÇanakkale Onsekiz Mart ÜniversitesiBiyomühendislik ve Malzeme Mühendisliği Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. YAVUZ EMRE ARSLAN