Geri Dön

Gen amplifikasyonu içeren tümör hücrelerinde CRISPR-Cas ile amplikon hedeflenmesi

Amplicon targeting with CRISPR-Cas in tumor cells with gene amplification

PDF İndir

  1. Tez No: 880562
  2. Yazar: SEDA NUR HOMURLU
  3. Danışmanlar: PROF. DR. OĞUZ ALTUNGÖZ
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Genetik, Genetics
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2024
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Dokuz Eylül Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji ve Genetik Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 121

Özet

HER2 gen amplifikasyonu meme kanserinde malign transformasyona yol açar ve agresif fenotiple ilişkilendirilir. Bu çalışmanın amacı HER2 amplifikasyonu içeren SK-BR-3 ve BT-474 hücreleri ile amplifikasyon içermeyen MCF-7 hücrelerine yönelik CRISPR Cas9 teknolojisi kullanılarak oluşturulmuş DNA kırıklarının hücre apoptozu ve nekrozu üzerindeki etkilerini incelemektir. Çalışmada Cas9 içeren PX458 plazmitine özel olarak kılavuz RNA'lar tasarlanmış, tasarlanan kılavuz RNA'lar plazmite klonlanmıştır. Daha sonra plazmit BT-474, SK-BR-3 ve MCF-7 hücrelerine transfekte edilmiştir. MCF-7 hücreleri, gRNA'ların özgüllüğünü test etmek amacıyla aynı prosedüre tabi tutulmuştur. Hücrelerde apoptoz ve nekroz düzeyleri Annexin V boyaması ile akım sitometri cihazında ölçülmüştür. Çalışma sonuçları, MCF-7 hücrelerinin gRNA transfeksiyonuna anlamlı bir apoptoz tepkisi göstermediğini ancak HER2 amplifikasyonu taşıyan SK-BR-3 ve BT- 474 hücrelerinin anlamlı düzeyde apoptoza girdiğini ortaya koymuştur. Ayrıca, BT- 474 hücrelerinin daha fazla kopya sayısına sahip olmasının, SK-BR-3 hücrelerine kıyasla daha yüksek apoptoz oranlarına yol açtığı gözlemlenmiştir. Bu bulgular, hipotezimizi desteklemekte ve HER2 amplifikasyonu taşıyan tümör hücrelerinin CRISPR Cas9 ile hedeflenmesi durumunda, çoklu DNA iplik kırıklarına bağlı olarak apoptozun indüklendiğini göstermektedir. Elde edilen bu sonuç CRISPR Cas9 sisteminin HER2 pozitif meme kanseri hücreleri için potansiyel bir tedavi stratejisi olarak kullanılabileceğini ortaya koymaktadır.

Özet (Çeviri)

HER2 gene amplification in breast cancer leads to malignant transformation and is associated with an aggressive phenotype. The aim of this study is to investigate the effects of targeted DNA cleavage using CRISPR Cas9 technology on apoptosis and necrosis in HER2-amplified SK-BR-3 and BT-474 cells compared to non-amplified MCF-7 cells. In this study, guide RNAs were specifically designed for PX458 plasmid that have Cas9 protein and the guide RNAs were cloned into the plasmid. Then the plasmid was transfected into the BT-474, SK-BR-3 and MCF-7 cells. MCF-7 cells were subjected to the same procedure to test the specificity of the gRNAs. Apoptotic and necrotic levels of these cells were measured with flow cytometry using Annexin V staining. The results demonstrated that MCF-7 cells did not exhibit a significant apoptotic response to gRNA transfection, whereas HER2-amplified SK-BR-3 and BT-474 cells showed significant levels of apoptosis. Moreover, it was observed that BT-474 cells, having a higher copy number of HER2, exhibited higher rates of apoptosis compared to SK-BR-3 cells. These findings support our hypothesis and show that targeting HER2-amplified tumor cells with CRISPR Cas9 induces apoptosis through multiple DNA strand breaks. This indicates that CRISPR Cas9 system could be a potential therapeutic strategy for HER2-positive breast cancer cells.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    342761

    Determination of genomic instability in breast and endometrium cancer sample tissues by RAPD-PCR and high resolution melting (HRM) analysis

    Meme ve endometrium kanser örnek dokularında RAPD-PZR ve HRM analizi ile genomik karasızlığın tespiti

    DİLEK KAPTAN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2013

    BiyolojiFatih Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. İFFET İREM UZONUR

  2. Tez No

    201818

    Transcription pattern comparison of two ubiquitin specific proteases (USP6 and USP32)

    İki ubikuitin?e özgü proteazın (USP6 ve USP32) gen ifade şekillerinin karşılaştırılması

    SHİVA AKHAVAN TABASİ

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2007

    BiyolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. AYŞE ELİF ERSON

  3. Tez No

    655032

    Molecular mechanisms of PI3K isoform dependence in carcinogenesis

    Karsinojenezde PI3K izoform bağımlılığı değişikliğinin moleküler mekanizması

    SENA ATICI

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2020

    Biyokimyaİhsan Doğramacı Bilkent Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ ONUR ÇİZMECİOĞLU

  4. Tez No

    815755

    The productıon and pegylatıon of recombinant human granulocyte colony-stımulatıng factor produced ın e. coli

    Rekombinant insan granulosit koloni stimülan faktörünün e. coli'de üretimi ve pegilasyonu

    NAZLI DİLARA ERDOĞDU

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2023

    Biyokimyaİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY

  5. Tez No

    352723

    Her2 pozitif meme karsinomu dokularında immunhistokimyasal yöntemlerle her3, CD1A ve ki-67 ekspresyonunun araştırılması, sonuçların prognostik parametreler ile ilişkisinin saptanması

    Başlık çevirisi yok

    BURCU GÜZELBEY

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    Patolojiİstanbul Üniversitesi

    Patoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. HÜSEYİN RIDVAN İLHAN

Geri Dön