Otofaji -ER stres etkileşiminin meme kanseri hücrelerinin proliferasyonu ve metastazı üzerindeki etkilerinin araştırılması
Investigation of the effects of autophagy-ER stress interaction on proliferation and metastasis of breast cancer cells
- Tez No: 890032
- Danışmanlar: PROF. DR. HATİCE GÜL DURSUN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Tıbbi Biyoloji, Medical Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2024
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Necmettin Erbakan Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 78
Özet
En sık görülen kanser tiplerinden biri olan meme kanserinin görülme sıklığı her yıl dünya çapında artış göstermektedir. Meme kanserinde kemoterapi/radyoterapi gibi geleneksel tedavi protokollerine direnç gelişmesi nedeniyle tedavi seçenekleri kısıtlı kalmektadır. İlaç dirençi otofoji gibi faktörle de ilişkilendirilen bir süreçtir. Otofaji, hasarlı moleküllerin, yanlış katlanmış proteinlerin, subsellüler bileşenlerin (proteinler, nükleik asitler, lipidler) ve hasarlı organellerin parçalanması ve ortadan kaldırılması için gerekli olan fizyolojik bir hücresel süreçtir. Otofajinin kanserdeki rolü karmaşıktır. Otofaji tümör tipine veya içeriğine bağlı olarak değişiklik gösterebilir.ER stresin indüklediği otofajinin hücre üzerindeki etkileri farklıdır. Artmış ER stres tarafından indüklenen otofaji aktivasyonu hücre ölümünü de teşvik edebilir. Bu çalışmada ER stres ve otofojinin karşılıklı etkileşimlerinin meme kanseri hücrelerinin proliferatif ve metastatik davranışları üzerindeki etkilerininin değerlendirilmesi amaçlanmıştır. Bu amaçla MCF7 hücre hattında ULK-101 ve tunikamisinin kombinasyonunun sitotoksik etkisi WST-8/CCK8 testi ile bakılmıştır. Bunun yanı sıra otofajik aktivite LC3-II Kantitasyon ELISA kiti ile analiz edilmiştir. Sitotoksisite sonuçları dikkate alınarak, sonraki analizlerde hücreler 24 saat süresince 1 µM tunikamisin ile ön işleme tabi tutulmuş, ardından tunikamisin varlığında 3 saat süresince 47 µM ULK-101 ile muamele edilmiştir. Daha sonra deney gruplarında RNA izolasyonu, cDNA sentezi yapılmış ve apoptoz, ER stresi ve otofaji ile ilişkili genlerin ekspresyon seviyeleri qRT-PZR ile analiz edilmiştir. Bunun yanı sıra otofajik aktivite LC3-II Kantitasyon ELISA kiti ile analiz edilmiştir. ULK-101'in ve tunikamisinin meme kanseri hücrelerinin koloni oluşturma yetenekleri üzerine etkisi, koloni formasyon analizi ile değerlendirilmiştir. Daha sonra GRP78/BiP ELISA kiti kullanılarak tunikamisinin ER stresi üzerine etkisi araştırılmıştır. ULK-101, meme kanseri hücrelerinin koloni oluşturma yeteneğini önemli ölçüde azaltmıştır. Bu çalışmanın sonuçlarına göre, tunikamisin ve ULK-101'in hücre canlılığının %50‟sini inhibe ettiği dozlarla kombine kullanımları MCF7 hücrelerinde additif etkiye neden olmaktadır. Tüm sonuçlar bir arada değerlendirildiğinde, ULK-10'in meme kanseri hücrelerinde otofajiyi baskılayarak, ER stresi ile apoptozu arttırarak antikanser etkiye neden olduğu düşünülmektedir
Özet (Çeviri)
Breast cancer, one of the most common types of cancer, is increasing globally each year. The resistance of breast cancer to clinically used treatments such as chemotherapy and radiotherapy indicates that treatment options are limited. Drug resistance is a process also associated with factors such as autophagy. Autophagy is a physiological cellular process required for the degradation and removal of damaged molecules, misfolded proteins, subcellular components (proteins, nucleic acids, lipids), and damaged organelles. The role of autophagy in cancer is complex and can vary depending on the type or content of the tumor. The effects of ER stress-induced autophagy on cells can differ. Increased ER stress-induced autophagy activation may also promote cell death. In this study, the cytotoxic effects of the combination of ULK-101 and tunicamycin in the MCF7 cell line were assessed using the WST-8/CCK8 assay. Additionally, autophagic activity was analyzed using the LC3-II Quantitation ELISA kit. Based on the cytotoxicity results, cells were pre-treated with 1 µM tunicamycin for 24 hours, followed by treatment with 47 µM ULK-101 for 3 hours in the presence of tunicamycin. Subsequently, RNA isolation and cDNA synthesis were performed, and the expression levels of genes associated with apoptosis, ER stress, and autophagy were analyzed using qRT-PCR. Furthermore, autophagic activity was also analyzed using the LC3-II Quantitation ELISA kit. The effect of ULK-101 and tunicamycin on the colony-forming ability of breast cancer cells was evaluated using colony formation analysis. The effect of tunicamycin on ER stress was then investigated using the GRP78/BiP ELISA kit. According to the results of this study, the combined use of tunicamycin and ULK-101 at doses that inhibit 50% of cell viability results in an additive effect in MCF7 cells. When considering all the results together, it is believed that ULK-101 exerts an anticancer effect by suppressing autophagy in breast cancer cells and increasing apoptosis through ER stress.
Benzer Tezler
- Understanding the interplay between anti-apoptotic BAG-1 and AKT in mTORC1-mediated autophagy in breast cancer cell lines
mTORC1 aracılı otofajide anti-apoptotik BAG-1-AKT etkileşiminin meme kanseri hücre hatlarında araştırılması
ILGIN IŞILTAN
Yüksek Lisans
İngilizce
2015
Biyolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY
- Investigation of the autophagy and apoptosis relation through BAG-1, BcL-2 and Beclin 1
Otofajı̇ ve apoptoz ı̇lı̇şkı̇sı̇nı̇n BAG-1, BcL-2 ve Beclin 1 üzerı̇nden ı̇ncelenmesı̇
GİZEM ALKURT
Yüksek Lisans
İngilizce
2016
Biyolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY
- Bag-1 might act as a regulator on apoptosis/autophagy switch through direct binding to beclin 1
Bag-1 ve beclin 1'in doğrudan etkileşiminin apoptoz/otofaji kararındaki olası düzenleyici etkisinin araştırılması
MİRAY TÜRK
Yüksek Lisans
İngilizce
2019
Biyolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY
- Investigation of links and crosstalk between autophagy and DNA damage responses
Otofaji ile DNA hasar yanıtları arasındaki bağlantı ve karşılıklı etkileşimin araştırılması
SİNEM DEMİRBAĞ SARIKAYA
- Akciğer kanseri hücre serilerinde cisplatin yanıtında otofajik stıng regülasyonunun araştırılması
Investigation of autophagic sting regulation in cisplatin response in lung cancer cell lines
SEVİM AYDEMİR
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
Tıbbi BiyolojiEge ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. VİLDAN BOZOK ÇETİNTAŞ
- Kemik paget hastalığı ve frontotemporal demans ile gözlenen inklüzyon cisimcik miyopati hastalığıyla (IBMPFD) ilişkili bazı vcp mutant proteinlerin rekombinant DNA teknolojisi ile saflaştırılması ve in vitro bağlanma modellerinin incelenmesi
Purification of inclusion body myopathy with paget?s disease of the bone and frontotemporal dementia (IBMPFD) associated some VCP mutant proteins by recombinant dna technology and investigation of the in vitro binding patterns
YALÇIN ERZURUMLU
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
BiyokimyaEge ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. PETEK BALLAR KIRMIZIBAYRAK