Geri Dön

Vajinal kültürden izole edilen flukonazole dirençli (r)/doza bağlı duyarlı (SDD) c.albicans izolatlarında 14 alfa lanosterol demetilaz geni (erg11) ve atım pompalarını kodlayan genlerin (CDR1, CDR2 ve MDR1) ekspresyon düzeylerinin araştırılması ve dirençteki rollerinin belirlenmesi

Investigation of expression levels of 14-alpha lanosterol demethylase gene (ERG11) and efflux pump-encoding genes (CDR1, CDR2, and mdr1) in fluconazole-resistant (R)/dose-dependent susceptible (SDD) C. albicans isolates from vaginal cultures and determination of their role in resistance

PDF İndir

  1. Tez No: 910752
  2. Yazar: MERVE ALCALI
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. AYŞE BARIŞ
  4. Tez Türü: Tıpta Uzmanlık
  5. Konular: Mikrobiyoloji, Microbiology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2025
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Sağlık Bilimleri Üniversitesi
  10. Enstitü: İstanbul Şişli Hamidiye Etfal Eğitim ve Araştırma Hastanesi
  11. Ana Bilim Dalı: Temel Tıp Bilimleri Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Tıbbi Mikrobiyoloji Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 76

Özet

Amaç: Candida albicans, fırsatçı bir patojen olarak vulvovajinal kandidiyazis (VVK) gibi yaygın enfeksiyonlara neden olabilmektedir. Flukonazolün yaygın ampirik kullanımı ve topikal azol ajanlara reçetesiz erişim, flukonazole dirençli izolatlarda artışa neden olmaktadır. Direnç mekanizmaları arasında ERG11 genindeki mutasyonlar, CDR1, CDR2, MDR1 genlerinin aşırı ekspresyonu öne çıkmaktadır. Çalışmamızda flukonazole dirençli veya doza bağlı duyarlı vajinal C. albicans izolatlarında, bu genlerin ekspresyon düzeyleri ve dirençteki rollerininin belirlenmesi amaçlanmıştır. Çalışmada ayrıca, ticari antifungal duyarlılık testlerinin flukonazole duyarlılığı azalmış izolatlardaki performansları da değerlendirilecektir. Gereç ve yöntemler: Ocak 2021-Kasım 2023 tarihleri arasında toplam 763 vajinal örnek incelenmiş ve bu örneklerin 403'ünde (%52,8) Candida türleri izole edilmiştir. İzole edilen Candida türlerinin 307'si (%76) C. albicans olarak tanımlanmıştır. Antifungal duyarlılık testleri Vitek2 otomatize sistemi ve agar gradient difüzyon (E-test) testleri kullanılarak gerçekleştirildi. Çalışmada flukonazol/vorikonazole karşı dirençli/doza bağlı duyarlı saptanan 68 izolat CLSI sıvı mikrodilüsyon (SMD) yöntemiyle karşılaştırıldı. Bunlar arasından flukonazol ve/veya vorikonazole dirençli ve/veya doza bağlı duyarlı 42 izolat seçilerek direncin moleküler mekanizması için ERG11, CDR1, CDR2 ve MDR1 genlerinin ekspresyon düzeyleri kantitatif revers transkriptaz polimeraz zincir tepkimesi (RT-PZT) yöntemi ile araştırıldı. Gen ekspresyon düzeylerinin belirlenmesinde ∆∆Ct yöntemi kullanıldı. Bulgular: Vitek2 ve agar gradient difüzyon yöntemlerinin SMD yöntemiyle esansiyel uyumları %90'ın üzerinde bulunmuştur. SMD 48. saat sonuçları ile karşılaştırıldıklarında; Vitek2 sistemiyle flukonazol için %52,94, vorikonazol için %73,52 kategorik uyum belirlenirken; agar gradient difüzyon yöntemi ile flukonazol için %76,47, vorikonazol için %83,82 oranında kategorik uyum saptanmıştır. Gen ekspresyon analizlerinde, flukonazole R/SDD olan izolatların %47'sinde CDR1, %34'ünde MDR1, %21'inde ERG11 ve %13'ünde CDR2 genlerinde artmış ekspresyon tespit edilmiş olup, 12 izolatta herhangi bir gende ekspresyon artışı saptanmamıştır. Flukonazol MİK değeri >8 μg/ml olan izolatlarda CDR1 gen ekspresyon oranı %70,5 olarak bulunmuş, MİK değeri ≤8 μg/ml olan izolatlarda bu oran %28,5 olarak saptanmıştır. Sonuç: Çalışmamızda, özellikle klinik sınır değerlerinde MİK saptanan C. albicans izolatlarında ticari antifungal duyarlılık yöntemleri ile CLSI SMD arasında; yüksek temel uyum saptanmış, ancak kategorik uyumun düşük olduğu görülmüştür. Gen ekspresyon analizlerinde en sık CDR1 geninde ekspresyon artışı belirlenmiş olup; dirençli izolatların %75'inde ERG11, CDR1, CDR2 ve MDR1 genlerinin en az birinde ekspresyon artışı gözlenmiştir. Gen ekspresyonu saptanmayan izolatlarda alternatif direnç mekanizmalarının rolü araştırılmalıdır.

Özet (Çeviri)

Aim: Candida albicans, as an opportunistic pathogen, can cause common infections such as vulvovaginal candidiasis (VVC). Widespread empirical use of fluconazole and over-the-counter access to topical azole agents have led to an increase in fluconazole-resistant isolates. Among the resistance mechanisms, mutations in the ERG11 gene and overexpression of CDR1, CDR2, and MDR1 genes are prominent. In our study, we aimed to determine the expression levels of these genes and their roles in resistance in fluconazole-resistant or dose-dependent susceptible vaginal C. albicans isolates. The study also evaluated the performance of commercial antifungal susceptibility tests in isolates with reduced susceptibility to fluconazole. Material and Methods: Between January 2021 and November 2023, a total of 763 vaginal samples were examined, and Candida species were isolated in 403 (52.8%) of these samples. Of the isolated Candida species, 307 (76%) were identified as C. albicans. Antifungal susceptibility tests were performed using the Vitek2 automated system and agar gradient diffusion (E-test) tests. In the study, 68 isolates found to be resistant/dose-dependent susceptible to fluconazole/voriconazole were compared using the CLSI broth microdilution (BMD) method. Among these, 42 isolates that were resistant and/or dose-dependent susceptible to fluconazole and/or voriconazole were selected, and the expression levels of ERG11, CDR1, CDR2, and MDR1 genes were investigated using quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) method to determine the molecular mechanism of resistance. The ∆∆Ct method was used to determine gene expression levels. Results: The essential agreement of Vitek2 and agar gradient diffusion methods with the BMD method was found to be over 90%. When compared with BMD 48-hour results, categorical agreement with the Vitek2 system was 52.94% for fluconazole and 73.52% for voriconazole, while with the agar gradient diffusion method, categorical agreement was 76.47% for fluconazole and 83.82% for voriconazole. In gene expression analyses, increased expression was detected in CDR1 (47%), MDR1 (34%), ERG11 (21%), and CDR2 (13%) genes in fluconazole R/SDD isolates, while no increase in gene expression was detected in 12 isolates. Increased CDR1 gene expression was observed in 70.5% of isolates with fluconazole MIC values >8 μg/ml, while this rate was 28.5% in isolates with MIC values ≤8 μg/ml. Conclusion: In our study, high essential agreement but low categorical agreement was observed between commercial antifungal susceptibility methods and CLSI BMD, particularly in C. albicans isolates with MIC values at clinical breakpoints. In gene expression analyses, increased expression was most frequently detected in the CDR1 gene, and 75% of resistant isolates showed increased expression in at least one of the ERG11, CDR1, CDR2, and MDR1 genes. Alternative resistance mechanisms should be investigated in isolates without detected gene expression.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    768901

    Gebelerde vajinal örneklerden izole edilen candida türlerinin ve proteinaz aktivitelerinin preterm doğum ile ilişkisinin araştırılması

    Başlık çevirisi yok

    MERVE YILDIZ

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    MikrobiyolojiKocaeli Üniversitesi

    Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SEMA AŞKIN KEÇELİ

  2. Tez No

    359382

    Kadın doğum kliniğine herhangi bir nedenle başvuran kadınlardan istenen vajinal kültür örneklerinde B grubu streptokokların PCR ve kültür yöntemleri ile araştırılması ve genotiplendirilmesi

    Genotyping and investigation of group B streptococci by PCR and culture methods in vaginal culture samples requested from women admitted to clinic of gynecology and obstetrics by any reason

    FEYZA ALP

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    MikrobiyolojiSelçuk Üniversitesi

    Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. DUYGU FINDIK

  3. Tez No

    751489

    Erken doğum tehdidi olan gebe kadınlarda vajinal ureaplasma ve mycoplasma türleri kolonizasyonunun preterm doğum öngörüsü üzerine etkisi

    The effect of vaginal ureaplasma and mycoplasma species colonization on the prediction of preterm birth in pregnant women with threatened preterm birth

    İBRAHİM ETHEM CANBULUT

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    Kadın Hastalıkları ve DoğumSağlık Bilimleri Üniversitesi

    Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. PINAR KUMRU

  4. Tez No

    460941

    Vajen ve idrar kültürlerinden izole edilen maya ve bakterilerin lipaz, siderofor ve biyofilm özellikleri

    Lipase, siderophor and biofilm properties of yeast and bacteria isolated from vaginal and urine cultures

    SHAHROUZALSADAT MORTAZAVI

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    BiyolojiGazi Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GÜVEN URAZ

  5. Tez No

    10474

    Kadınlarda vaginal beta hemolitik streptokok taşıyıcılığı

    Başlık çevirisi yok

    M.HAKEM LÜTFİ

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    1990

    Kadın Hastalıkları ve Doğumİstanbul Üniversitesi

    Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. RAHMİYE BERKİTEN

Geri Dön