Umblikal kord mezenkimal kök hücrelerden elde edilen eksozomların busulfan kaynaklı erkek infertilitesinde ferroptoza etkisi: In Vitro çalışma
Effect of exosomes derived from umbilical cord mesenchymal stem cells on ferroptosis i̇n busulfan-induced male infertility: In Vitro study
- Tez No: 929977
- Danışmanlar: PROF. DR. GÜLNUR TAKE KAPLANOĞLU
- Tez Türü: Tıpta Uzmanlık
- Konular: Histoloji ve Embriyoloji, Histology and Embryology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Gazi Üniversitesi
- Enstitü: Tıp Fakültesi
- Ana Bilim Dalı: Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
İnfertilite tüm dünyada giderek artan bir sorun haline gelmektedir. Ferroptoz demir bağımlı lipit peroksitlerinin birikimi ile karakterize yeni keşfedilmiş apoptotik olmayan bir ölüm yolağıdır. Eksozomlar ise köken aldıkları hücrelere ait protein, lipit, nükleik asit gibi materyalleri taşıyıp iletebilen çift lipit katmanlı mikroveziküllerdir. Son yıllarda eksozomların birçok hastalık için terapötik etkilerini araştıran çalışmaların sayısı hızla artmaktadır. Çalışmamızda GC-1 spg hücre hattında, spermatogenik hücrelerde ferropitozise neden olduğu bildirilen busulfan ile muamele sonrası umblikal kord mezenkimal kök hücrelerden elde edilen eksozomların ferroptoza olası etkisinin araştırılması amaçlanmıştır. Çalışmada: Kontrol, solvent kontrol, busulfan, eksozom ve busulfan+eksozom grubu olmak üzere 5 deney grubu oluşturuldu. Kontrol grubun deney süresince sadece komplet besiyerine etkin bırakılırken, solvent kontrol grubu busulfanın çözündüğü %0,31 DMSO konsantrasyonuna sahip besiyerine konuldu. Busulfan grubu 48 saat 1,25 mM konsantrasyonunda busulfan içeren besiyeri ile muamele edildi. Busulfan + eksozom grubuna 48 saat 1,25 mM busulfan uygulandıktan sonra 48 saat 100 μg/ml eksozom içeren besiyerine etkin bırakıldı. Eksozom grubu ise 48 saat 100 μg/ml eksozom içeren besiyerinde bekletildi. Ferroptozdan koruyucu enzim olarak bilinen GPX4 ekspresyonunu değerlendirmek için immünfloresan boyaması yapıldı. Lipit peroksidayon göstergesi olarak ELISA yöntemiyle MDA seviyeleri ölçüldü. Ferroptotik regülatuar genlerden Nrf-2 gen ekspresyonu real-time PCR yöntemiyle belirlendi. İmmünfloresan boyama sonuçlarına göre busulfan verilen grupta GPX4 ekspresyonunun kontrol grubuna göre anlamlı olarak azaldığı görüldü (p<0.0001). Busulfan tedavisi sonrası eksozom verilen grupta busulfan verilen gruba göre GPX4 seviyelerinde artış tespit edildi (p<0.01). En yüksek GPX4 ekspresyonuna sahip grubun eksozom verilen grup olduğu görüldü (p<0.0001). Kontrol gurubu ve solvent kontrol grubu arasında GPX4 ekspresyonu açısından istatistiksel anlamlı fark tespit edilmedi (p>0,05). En yüksek MDA seviyesi busulfan verilen hücre grubunda bulundu (p<0.0001). Busulfan sonrası eksozom verilen grupta MDA seviyeleri busulfan grubuna kıyasla anlamlı şekilde azaldı (p<0.0001). Eksozom verilen grupta MDA seviyesi kontrol grubuna göre azaldı (p<0.01) ve en düşük MDA seviyesine sahip grup olarak tespit edildi. Kontrol ve solvent kontrol arasında MDA seviyeleri açısından anlamlı bir değişiklik tespit edilmedi (p>0.05). En düşük Nrf-2 gen ekspresyonu solvent kontrol grubunda tespit edildi. Busulfan verilen grupta Nrf-2 gen ekspresyonu kontrol grubuna göre azalmıştı. Busulfan sonrası eksozom verilen grupta busulfan grubuna kıyasla Nrf-2 gen ekspresyonu artmış olarak tespit edildi. En yüksek Nrf- 2 gen ekspresyonuna sahip grubun eksozom verilen grup olduğu görüldü. Gruplar arasında Nrf-2 gen ekspresyon değişiklikleri istatistiksel olarak anlamlı olmasa da (p>0.05) klinik olarak anlamlı olabileceği düşünüldü.
Özet (Çeviri)
Infertility is becoming an increasing problem worldwide. Ferroptosis is a newly discovered non-apoptotic death pathway characterised by the accumulation of iron-dependent lipid peroxides. Exosomes are double lipid-layered microvesicles that can transport and deliver materials such as proteins, lipids and nucleic acids belonging to the cells from which they originate. In recent years, the number of studies investigating the therapeutic effects of exosomes for many diseases has been increasing rapidly. In our study, we aimed to investigate the possible effect of exosomes obtained from umbilical cord mesenchymal stem cells on ferroptosis after treatment with busulfan, which has been reported to cause ferroptosis in spermatogenic cells in GC-1 spg cell line. In the study: Five experimental groups were formed as control, solvent control, busulfan, exosome and busulfan+exosome groups. While the control group was only exposed to complete medium during the experiment, the solvent control group was placed in medium with 0.31% DMSO concentration in which busulfan was dissolved. Busulfan group was treated with medium containing busulfan at a concentration of 1.25 mM for 48 hours. Busulfan + exosome group was treated with 1.25 mM busulfan for 48 hours and then exposed to medium containing 100 μg/ml exosome for 48 hours. Exosome group was kept in medium containing 100 μg/ml exosome for 48 hours. Immunofluorescence staining was performed to evaluate GPX4 expression, which is known as ferroptosis protective enzyme. MDA levels were measured by ELISA method as an indicator of lipid peroxidation. Nrf-2 gene expression, one of the ferroptotic regulatory genes, was determined by real-time PCR method. According to immunofluorescent staining results, GPX4 expression was significantly decreased in the busulfan-treated group compared to the control group (p<0.0001). After busulfan treatment, an increase in GPX4 levels was detected in the exosome-treated group compared to the busulfan-treated group (p<0.01). It was observed that the group with the highest GPX4 expression was the group given exosome (p<0.0001). There was no statistically significant difference between the control group and solvent control group in terms of GPX4 expression (p>0.05). The highest MDA level was found in the busulfan treated cell group (p<0.0001). After busulfan, MDA levels decreased significantly in the exosome-treated group compared to the busulfan group (p<0.0001). In the exosome-treated group, MDA level decreased compared to the control group (p<0.01) and it was determined as the group with the lowest MDA level. No significant difference was detected between control and solvent control in terms of MDA levels (p>0.05). The lowest Nrf-2 gene expression was detected in the solvent control group. Nrf-2 gene expression was decreased in the busulfan-treated group compared to the control group. Nrf-2 gene expression was found to be increased in the group given exosome after busulfan compared to the busulfan group. It was observed that the group with the highest Nrf-2 gene expression was the group given exosome. Although Nrf-2 gene expression changes between the groups were not statistically significant (p>0.05), it was thought to be clinically significant.
Benzer Tezler
- Sezaryen girişimlerinde, indüksiyon ajanı olarak etomidatın maternal ve neonatal yönden pentotal ile karşılaştırılması
Başlık çevirisi yok
BİNNUR SARIHASAN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1989
Anestezi ve ReanimasyonOndokuz Mayıs ÜniversitesiAnesteziyoloji ve Reanimasyon Ana Bilim Dalı
- Adsorptif sıyırma voltametrisi yöntemi ile Seftriakson'un biyolojik materyalden tayini
Başlık çevirisi yok
SACİDE ALTINÖZ
Doktora
Türkçe
1988
BiyokimyaHacettepe ÜniversitesiAnalitik Kimya Ana Bilim Dalı
DOÇ.DR. AYTEKİN TEMİZER
- Chorda umbilicalis morfolojisi ve bazı maternal özelliklerin fötal gelişime etkisi
Başlık çevirisi yok
AYDIN ÖZBEK
- Orta derecede yüksek bir rakımda (1869 m Erzurum) yeni doğanlarda polisitemi insidansı ve bunu etkileyen faktörler
The Incidence of polycythemia in a moderate altitude of 1869 m, Erzurum-Turkey, and the factors effecting on this condition
EMEL EVREN