Safran (Crocus sativus) eksozomların izolasyonu, karakterizasyonu ve fare GC-1SPG spermatogoniyal hücrelerinde sisplatin ile oluşturulan hasar üzerine koruyucu etkisinin incelenmesi
Isolation and characterization of saffron (Crocus sativus) exosomes and investigation of thei̇r protecti̇ve effect on cisplatin-induced damage in mouse GC-1SPG spermatogoni̇al cells
- Tez No: 931567
- Danışmanlar: PROF. DR. CENGİZ KARAKAYA
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2024
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Gazi Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Tıbbi Biyokimya Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 82
Özet
Bitki kaynaklı eksozomlar, biyoteknoloji ve tıp alanlarında önemli bir araştırma konusu haline gelmiştir. Eksozomlar, hücreler arası iletişimi sağlayan, biyoaktif molekülleri taşıyan mikroskobik biyoveziküllerdir. İlk kez hayvan hücrelerinde keşfedilen eksozomlar, 2007 yılında bitki hücrelerinden de üretilebildiği gösterilerek bitkilerdeki potansiyel biyolojik işlevleri keşfedilmiştir. Bu tez çalışmasında, safran bitkisinden (Crocus sativus) izole edilen eksozomların, Fare GC-1spg spermatogoniyal hücreleri üzerinde biyolojik etkileri ve sisplatin kaynaklı hücre hasarı üzerine tedavi edici rolü araştırılmıştır. Safran ekstratından ultrasantrifüj yöntemiyle izole edilen eksozomlar taramalı elektrom mikroskopta görüntülendi ve BCA testi ile protein miktar tayini yapıldı. Hücreler 4 saat 5 µg/mL sisplatine maruz bırakıldı ve inkübasyon sonrası farklı konsantrasyonlarda eksozom (5, 10, 20, 30, 40 ve 50 ng/mL) ile tedavi edildi. Hücre proliferasyonu üzerine etkisi (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolyum bromür, (MTT) ile değerlendirildi. Hücre döngüsü ve apoptoz üzerine etkisi flow sitometri ile araştırıldı. Hücre membran hasarı üzerine etkileri PI boyama yapılarak floresans mikroskopta görüntülendi. Nrf2 ve NF-κB düzeyleri ise Elisa ile ölçüldü. Bu çalışmanın sonuçları, safran kaynaklı eksozomların GC-1spg spermatogoniyal hücrelerinde sisplatin kaynaklı hücresel hasara karşı önemli koruyucu etkiler gösterdiğini ortaya koymaktadır. Eksozom tedavisi, hücre canlılığını artırmış, nekroz ve apoptoz oranlarını azaltmış ve hücresel antioksidan savunma mekanizmalarını iyileştirmiştir. Akış sitometrisi ve hücre döngüsü analizleri, safran eksozomlarının genotoksik stresi hafiflettiğini ve sisplatin tarafından bozulan hücre döngüsünü yeniden düzenlediğini göstermiştir. Ayrıca, safran eksozomlarının NF-κB ve Nrf2 gibi temel oksidatif stres ve enflamasyon belirteçlerinin ekspresyonunu düzenlediği, böylece oksidatif hasarı hafiflettiği ve hücresel stres tepkilerini modüle ettiği tespit edilmiştir. Bu bulgular, safran kaynaklı eksozomların genotoksik ve oksidatif hasarın azaltılmasında üreme sağlığı uygulamaları için umut vadeden bir terapötik ajan olarak potansiyelini vurgulamaktadır.
Özet (Çeviri)
Plant-derived exosomes have become an important research topic in the fields of biotechnology and medicine. Exosomes are microscopic biovesicles that provide intercellular communication and carry bioactive molecules. Exosomes, which were first discovered in animal cells, were shown to be produced from plant cells in 2007 and their potential biological functions in plants were discovered. In this thesis, the biological effects of exosomes isolated from saffron plant (Crocus sativus) on mouse GC-1spg spermatogonial cells and their therapeutic role on cisplatin-induced cell damage were investigated. Exosomes isolated from saffron extract by ultracentrifugation were visualised under scanning electromicroscope and protein quantification was performed by BCA assay. Cells were exposed to 5 µg/mL cisplatin for 4 hours and treated with different concentrations of exosomes (5, 10, 20, 30, 40 and 50 ng/mL) after incubation. The effect on cell proliferation was evaluated by (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, (MTT). The effect on cell cycle and apoptosis was investigated by flow cytometry. The effects on cell membrane damage were visualised by PI staining under fluorescence microscope. Nrf2 and NF-κB levels were measured by Elisa. The results of this study revealed that saffron-derived exosomes showed significant protective effects against cisplatin-induced cellular damage in GC-1spg spermatogonial cells. Exosome treatment increased cell viability, decreased necrosis and apoptosis rates and improved cellular antioxidant defence mechanisms. Flow cytometry and cell cycle analyses showed that saffron exosomes alleviated genotoxic stress and re-regulated the cell cycle disrupted by cisplatin. Furthermore, saffron exosomes were found to regulate the expression of key oxidative stress and inflammation markers such as NF-κB and Nrf2, thereby alleviating oxidative damage and modulating cellular stress responses. These findings highlight the potential of saffron-derived exosomes as a promising therapeutic agent for reproductive health applications in reducing genotoxic and oxidative damage.
Benzer Tezler
- Safran (Crocus sativus L.)'da farklı soğan (Korm) büyüklükleri ile kimyasal ve organik kaynaklı azot dozlarının verim ve kalite özellikleri üzerine etkileri
The effects of different bulb (Corm) size and nitrogen doses of chemical and organic fertilizers on yield and quality properties of saffron (Crocus sativus L.)
NEJLA ALICI
- Safran (Crocus sativus L.) yetiştiriciliğinde vermikompost uygulamasının bitki gelişim özelliklerine etkisi
Effect of vermicompost application on plant growth characteristics in saffron (Crocus sativus L.) cultivation
FEYZA AZDEMİR
Yüksek Lisans
Türkçe
2021
ZiraatKocaeli ÜniversitesiBahçe Bitkileri Yetiştirme ve Islahı Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AYSUN ÇAVUŞOĞLU
- Safranbolu gastronomisinde safranın yeri ve önemi
The place of saffron in Safranbolu gastronomy
HÜSEYİN FATİH ZARARSIZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
Gastronomi ve Mutfak SanatlarıKarabük ÜniversitesiGastronomi ve Mutfak Sanatları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HÜSEYİN AVNİ KIRMACI
- Production of saffron (Crocus sativus L.) and its secondary metabolites under in vitro conditions
Safran (Crocus sativus L.) ve sekonder metabolitlerinin in vitro koşullar altında üretimi
HİLAL ECEM ADALI
Yüksek Lisans
İngilizce
2025
BiyomühendislikYeditepe ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. BAHAR SOĞUTMAZ ÖZDEMİR
- Farklı soğan (korm) boylarının ve bitki sıklığının safran (Crocus sativus L.)'nın verim ve diğer bazı özelikleri üzerine etkisi
Effect of different saffron (Crocus sativus L.) bulb (corm) sizes and plant density on the yield and factors affecting yield
AMİRREZA SADEGHİ BAKHTAVARİ