Geri Dön

Partial purification and characterization of B-1,4-endoxylanase from rhizopus oryzae

Rhizopus oryzae küfünden ksilanaz enziminin kısmen saflaştırılması ve biyokimyasal karakterizasyonu

  1. Tez No: 93398
  2. Yazar: FERDA GÜVENÇ
  3. Danışmanlar: PROF. DR. TÜLİN GÜRAY, DOÇ. DR. UFUK BAKIR
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2000
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 86

Özet

oz Rhizopus oryzae KÜFÜNDEN p-l,4-ENDOKSİLANAZ ENZİMİNİN KISMEN SAFLAŞTIRMASI VE KARAKTERİZE EDİLMESİ Güvenç, Ferda Yüksek Lisans, Biyoteknoloji Bölümü Tez Yöneticisi: Doç.Dr. Ufak Bakır Yardımcı Tez Yöneticisi: Prof. Dr. Tülin Güray Ocak 2000, 73 sayfa Ksilan, bitki hücre duvarlarında bulunan hemiselülozun önemli bir bileşeni olup bitkilerin kuru ağırlığının %35'ini oluşturmaktadır ve birçok yararlı ürünün hazırlanmasında substrat olarak kullanılabilen, yenilenebilir biyokütlenin önemli bir kaynağını temsil etmektedir. Ksilanaz kompleksinin en önemli bileşeni olan P-l,4-Endoksilanaz (P-l,4-D-ksilan ksilanohidrolaz; EC 3.2.1.8), P-l,4-D-ksilanı ksilooligosakkaritlerine ve ksiloza parçalayan hidrolitik bir enzimdir. Ksilanaz enzimi, Bacillus, Clostridium, Streptomyces, TC YÜKSEKÖĞRETİM KÜRÜLSJAspergillus, Trichoderma ve Penicillium gibi birçok değişik mikroorganizmadan izole edilmiştir. Bu çalışmada, P-l,4-endoksilanaz enzimi ipliksi bir küf olan R. oryzae (ATCC 9363) susundan ilk kez kısmen saflaştırılmış ve biyokimyasal olarak kısmen karakterize edilmiştir. Enzim, amonyum sülfat çöktürme tekniği ve iyon değiştirici filtre kullanılarak kısmen saflaştırılmış ve daha sonra enzimin biyokimyasal karakterizasyon çalışmaları yapılmıştır. P-1,4- endoksilanaz %40-75 amonyum sülfat fraksiyonunda çöktürülmüş ve bu basamakta 2-3 kat saflaşma elde edilmiştir. Fraksiyon daha sonra (Sartorius S5F) kuvvetli katyon-değiştirici filtreye uygulanmış ve saflaştırma yaklaşık 54 kata yükselmiştir. Enzim aktivitesi için optimum pH ve sıcaklık, sırasıyla 4.5 ve 55 °C olarak bulunmuştur, ve enzim 65 °C'de 20 dakika tutulduğunda aktivitesinin % 50'sinden daha fazlasını kaybetmiştir. p-l,4-Endoksilanaz enzimi, Michaelis-Menten tipi kinetiğe uymaktadır ve Lineweaver-Burk grafiği kullanılarak Km and Vmax değerleri sırasıyla 18.5 mg ksilan/ml and 90 u,mole ksiloz/min-mg protein olarak hesaplanmıştır. Kısmen saflaştırılmış p- 1,4-endoksilanaz enziminin moleküler ağırlığının, %12 SDS-poliakrilamit jel elektroforezi kullanılarak 40,000-45,000 Da civarında olduğu tahmin edilmektir. Anahtar kelimeler : Ksilan, Ksilanaz, Rhizopus oryzae, saflaştırma, biyokimyasal karakterizasyon. vı

Özet (Çeviri)

ABSTRACT PARTIAL PURIFICATION AND CHARACTERIZATION OF P-l,4-ENDOXYLANASE FROM Rhizopus oryzae Güvenç, Ferda M.S., Department of Biotechnology Supervisor : Assoc. Prof. Dr. Ufuk Bakır Co-supervisor : Prof. Dr. Tülin Güray January 2000, 73 pages Xylan is the major component of hemicellulose of plant cell walls and constitutes up to 35% of the total dry weight of higher plants. It represents a significant resource of renewable biomass which can be utilized as a substrate for the preparation of many useful products. P-1,4- Endoxylanase (P-l,4-D-xylan xylanohydrolase; EC 3.2.1.8), the main component of a xylanase complex, is a hydrolytic enzyme that catalyzes the breakdown of P-l,4-D-xylan to xylooligosaccharides and xylose. It has been misolated from several kind of microorganisms including Bacillus, Clostridium, Streptomyces, Aspergillus, Trichoderma and Penicillium. In this study, P-l,4-endoxylanase was partially purified and characterized for the first time from the filamentous fungi R. oryzae ATCC 9363. P-l,4-Endoxylanase has been purified partially by using ammonium sulfate fractionation and an ion-exchange filter and then biochemical characterization studies of the enzyme were partially performed. (3-1,4- Endoxylanase was precipitated between 40-75% ammonium sulfate saturation and approximately 2-3 fold purification was achieved at this step. The precipitate was then applied to a (Sartorius S5F) strong cation- exchanger and the purification fold was increased to approximately 54. Optimal pH and temperature of the enzyme activity were determined as pH 4.5 and 55 °C, respectively, and more than 50% of its activity was lost when incubated at 65 °C for 20 minutes. P-l,4-Endoxylanase obeys Michaelis- Menten type kinetics and the Km and Vmax values were calculated as 18.5 mg xylan/ml and 90 umole xylose/min-mg protein respectively, by plotting Lineweaver-Burk plot. The molecular weight of partially purified 1,4~P- endoxylanase was estimated as around 40,000-45,000 Da by using 12% SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. Keywords : Xylan, Xylanase, Rhizopus oryzae, purification, biochemical characterization. IV

Benzer Tezler

  1. Tez No

    395690

    Kahramanmaraş topraklarından endo-b-1,4 glukanaz üreticisi Bacillus sp. izolasyonu, enzimin kısmi saflaştırılması ve karakterizasyonu

    Endo-b-1,4 glucanase producing from the soil Of Kahramanmaras Bacillus sp. isolation, partial pürification and characterization of the enzymes

    GÜLAY MERT

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    BiyolojiKahramanmaraş Sütçü İmam Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. ASHABİL AYGAN

  2. Tez No

    812871

    Termofilik bacillus zhangzhounesis 2ÇM4'ten elde edilen β- Galaktosidazın saflaştırılması ve karakterizasyonu

    Purification and characterization of β-Galactosidase from Thermophilic bacillus zhangzhounesis 2ÇM4

    CEMAL DİRİ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    BiyokimyaDicle Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. FATMA MATPAN BEKLER

  3. Tez No

    733205

    Selülotik atıklardan izole edilen Bacillus cereus bakterisi tarafından üretilen selülaz enziminin biyokimyasal karakterizasyonu

    Biochemical characterization of cellulase enzyme by Bacillus cereus isolated from cellulotic waste

    HATİCE ELİF IŞIK BİÇEN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    BiyokimyaDüzce Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. SERPİL UĞRAŞ

  4. Tez No

    813120

    Gıda atıklarından termofilik Bacillus licheniformiş SO7 ile üretilen alkalin proteazın manyetik alan destekli üç fazlı ayırma sistemi ile saflaştırılması ve biyokimyasal karakterizasyonu

    Purification and biochemical characterization of alkaline protease produced by thermophilic Bacillus licheniformis SO7 from food waste using magnetic field-assisted three phase partitioning

    GÖKSEN GÖREN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    BiyoteknolojiAtatürk Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MELDA ŞİŞECİOĞLU

  5. Tez No

    143026

    Bacillus subtilis ve Bacillus cereus bakterilerinden proteaz enziminin kısmi saflaştırılması ve özelliklerinin incelenmesi

    Partial purification and characterization of protease from Bacillus subtilis and Bacillus cereus bacteria

    ELİF ORTHAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2003

    Kimya Mühendisliğiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. YÜKSEL AVCIBAŞI GÜVENİLİR

Geri Dön