Alfa glukosidaz aktivitesinin artırılması ile biyolojik indıkatörün iyileştirilmesi
Biological indicator improvement by increasing alpha glucosidase activity
- Tez No: 934714
- Danışmanlar: PROF. DR. SABRİYE ÇANAKÇI
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Karadeniz Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 167
Özet
Sterilizasyon işlemi sağlık sektöründe, cerrahi aletler, tıbbi cihazlar, laboratuvar ekipmanları ve ilaç üretim süreçlerinde hayati önem taşımaktadır. Sterilizasyonun doğruluğunu ölçmek için biyolojik indikatörler kullanılmaktadır. Biyolojik indikatörlerin çalışma mekanizması, bakteri hücrelerinin ortama salgıladığı enzimlerin aktivitesine dayanmaktadır. Tezin amacı, daha aktif glukosidaz ile sterilizasyonun başarısız olması halinde çok daha erken cevap veren bir indikatör bakterisi geliştirmektir. Bu amaçla, Geobacillus stearothermophilus bakterisinin alfa glukosidaz genlerinin klonlanması, E. coli'de ifadesi, saflaştırılması, nokta mutasyonları ile enzim aktivitesinin artırılması yapılmıştır. Son olarak en aktif mutant seçilerek, bu aktif glukosidaz geninin Geobacillus stearothermophilus'a tekrar aktarılma deneyleri gerçekleştirilmiştir. Sonuç olarak, α-glukosidaz ve oligo-α-glukosidaz genleri E. coli'de başarılı bir şekilde ekspres edilmiştir. Bu iki gen üzerinde on adet nokta mutasyonu yapılmış ve bu enzimlerin biyokimyasal karakterizasyonu gerçekleştirilmiş ve Km, Vmax ve kcat değerleri hesaplanarak, enzim aktiviteleri karşılaştırılmıştır. Ardından, katalitik aktivitesi yüksek mutant seçilerek, mekik vektör pNW33N'ye klonlanmıştır ve mutant vejetatif Geobacillus stearothermophilus hücrelerinin yaban hücrelere kıyasla daha yüksek aktivite gösterdiği tespit edilmiştir. Son olarak, Mutant Geobacillus stearothermophilus sporlarıyla gerçekleştirilen germinasyon çalışmaları, ticari biyolojik indikatörlerle karşılaştırılmış ve benzer sonuçlar elde edilmiştir.
Özet (Çeviri)
The sterilization process is of vital importance in the health sector, surgical instruments, medical devices, laboratory equipment and drug production processes. Biological indicators are used to measure the accuracy of sterilization. The working mechanism of biological indicators is based on the activity of enzymes secreted by bacterial cells into the environment. The aim of the thesis is to develop an indicator bacterium that responds much earlier in case of sterilization failure with more active glucosidase. For this purpose, the alpha glucosidase genes of Geobacillus stearothermophilus were cloned, expressed in E. coli, purified, and activity of wild type (WT) and mutants were analysed. Finally, the most active mutant enzyme was selected and experiments were carried out to transfer this active glucosidase gene back to Geobacillus stearothermophilus. As a result, α-glucosidase and oligo-α-glucosidase genes were successfully expressed in E. coli. Ten point mutations were made on these two genes and biochemical characterization of these enzymes was performed and enzyme activities were compared by calculating Km, Vmax and kcat values. Finally, the mutant with high catalytic activity was selected and cloned into the shuttle vector pNW33N and it was determined that the mutant vegetative Geobacillus stearothermophilus cells showed higher activity compared to wild cells. Finally, germination studies conducted with mutant Geobacillus stearothermophilus spores were compared with commercial biological indicators, yielding similar results.
Benzer Tezler
- Dilate kardiyomiyopatili hasta gruplarında idrar izoprostan F2-alfa düzeyinin fonksiyonel kapasite ve sol ventrikül sistolik ve diyastolik fonksiyonları ile ilişkisinin karşılaştırılması
Başlık çevirisi yok
UMUTTAN DOĞAN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2004
KardiyolojiAkdeniz ÜniversitesiKardiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SELİM YALÇINKAYA
- İnme ve afazi yaşam kalitesi-39 ölçeği: Türkçe'ye uyarlama, geçerlik ve güvenirlik çalışması
Stroke and aphasia quality of life scale- 39: reliability and validity of the Turkish version
AYŞIN NOYAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
NörolojiAnadolu ÜniversitesiDil ve Konuşma Terapistliği Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. BÜLENT TOĞRAM
- İntratimpanik alfa lipoik asid uygulamasının cisplatin ototoksisitesine karşı koruyucu etkisinin otoakustik emisyon ölçüm yöntemiyle fonksiyonel olarak araştırılması (deneysel çalışma)
Assessment of protective effects of alpha-lipoic acid on cisplatin induced ototoxicity by using dpoae in guinea pigs.
YILMAZ ÖZKUL
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2008
Kulak Burun ve BoğazSağlık BakanlığıKulak Burun Boğaz ve Baş-Boyun Cerrahisi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HÜSEYİN KATILMIŞ
- Kalp yetersizliği özbakımına bakım veren katkısı ölçeği geçerlilik ve güvenilirlik çalışması
Valıdıty and relıabılıty of the turkısh versıon of the caregıver contrubıtıon to self care of heart faılure ındex
GÜLÇİN AKBIYIK
Yüksek Lisans
Türkçe
2015
Hemşirelikİstanbul Üniversitesiİç Hastalıkları Hemşireliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NURAY ENÇ
- Hemşirelerde karşılıklı bağımlılık ve ilişkili faktörler
Co-dependency among nurses and related factors
NURGÜL ÖZDEMİR