Alfa glukosidaz aktivitesinin artırılması ile biyolojik indıkatörün iyileştirilmesi
Biological indicator improvement by increasing alpha glucosidase activity
- Tez No: 934714
- Danışmanlar: PROF. DR. SABRİYE ÇANAKÇI
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Karadeniz Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 167
Özet
Sterilizasyon işlemi sağlık sektöründe, cerrahi aletler, tıbbi cihazlar, laboratuvar ekipmanları ve ilaç üretim süreçlerinde hayati önem taşımaktadır. Sterilizasyonun doğruluğunu ölçmek için biyolojik indikatörler kullanılmaktadır. Biyolojik indikatörlerin çalışma mekanizması, bakteri hücrelerinin ortama salgıladığı enzimlerin aktivitesine dayanmaktadır. Tezin amacı, daha aktif glukosidaz ile sterilizasyonun başarısız olması halinde çok daha erken cevap veren bir indikatör bakterisi geliştirmektir. Bu amaçla, Geobacillus stearothermophilus bakterisinin alfa glukosidaz genlerinin klonlanması, E. coli'de ifadesi, saflaştırılması, nokta mutasyonları ile enzim aktivitesinin artırılması yapılmıştır. Son olarak en aktif mutant seçilerek, bu aktif glukosidaz geninin Geobacillus stearothermophilus'a tekrar aktarılma deneyleri gerçekleştirilmiştir. Sonuç olarak, α-glukosidaz ve oligo-α-glukosidaz genleri E. coli'de başarılı bir şekilde ekspres edilmiştir. Bu iki gen üzerinde on adet nokta mutasyonu yapılmış ve bu enzimlerin biyokimyasal karakterizasyonu gerçekleştirilmiş ve Km, Vmax ve kcat değerleri hesaplanarak, enzim aktiviteleri karşılaştırılmıştır. Ardından, katalitik aktivitesi yüksek mutant seçilerek, mekik vektör pNW33N'ye klonlanmıştır ve mutant vejetatif Geobacillus stearothermophilus hücrelerinin yaban hücrelere kıyasla daha yüksek aktivite gösterdiği tespit edilmiştir. Son olarak, Mutant Geobacillus stearothermophilus sporlarıyla gerçekleştirilen germinasyon çalışmaları, ticari biyolojik indikatörlerle karşılaştırılmış ve benzer sonuçlar elde edilmiştir.
Özet (Çeviri)
The sterilization process is of vital importance in the health sector, surgical instruments, medical devices, laboratory equipment and drug production processes. Biological indicators are used to measure the accuracy of sterilization. The working mechanism of biological indicators is based on the activity of enzymes secreted by bacterial cells into the environment. The aim of the thesis is to develop an indicator bacterium that responds much earlier in case of sterilization failure with more active glucosidase. For this purpose, the alpha glucosidase genes of Geobacillus stearothermophilus were cloned, expressed in E. coli, purified, and activity of wild type (WT) and mutants were analysed. Finally, the most active mutant enzyme was selected and experiments were carried out to transfer this active glucosidase gene back to Geobacillus stearothermophilus. As a result, α-glucosidase and oligo-α-glucosidase genes were successfully expressed in E. coli. Ten point mutations were made on these two genes and biochemical characterization of these enzymes was performed and enzyme activities were compared by calculating Km, Vmax and kcat values. Finally, the mutant with high catalytic activity was selected and cloned into the shuttle vector pNW33N and it was determined that the mutant vegetative Geobacillus stearothermophilus cells showed higher activity compared to wild cells. Finally, germination studies conducted with mutant Geobacillus stearothermophilus spores were compared with commercial biological indicators, yielding similar results.
Benzer Tezler
- Hiperglisemi tedavisinde potansiyel yeni pirazol halkası içeren bisiklik yapıda moleküllerin sentezi
Synthesis of potential new pyrazole ring-containing bicyclic molecules in the treatment of hyperglycemia
BEHİYE ATEŞ
Yüksek Lisans
Türkçe
2025
Eczacılık ve FarmakolojiVan Yüzüncü Yıl ÜniversitesiEczacılık Meslek Bilimleri Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MELTEM TAN UYGUN
- Muğla Bölgesi' nden elde edilen yenilebilir yabani mantarların biyolojik aktiviteleri
Edible wild mushrooms obtained from Muğla region biological activities
HATİCE BEKCİ
Doktora
Türkçe
2020
Gıda MühendisliğiErciyes ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MUSTAFA ÇAM
DOÇ. DR. AHMET CUMAOĞLU
- Deneysel diyabet oluşturulan sıçanlarda bazı bitki ekstraktlarının iyileştirici etkilerinin araştırılması
The healing effects of some plant extracts on experimentally induced diabetic rats
ABDULAHAD DOĞAN
- Anoxybacillus gonensis oligo-1,4-1,6-alfa-glukosidaz (sukraz-maltaz-izomaltaz) genin klonlanması, gen ürününün saflaştırılması ve biyokimyasal karakterizasyonu
Cloning, purification and biochemical characterization of oligo-1,4-1,6-alpha-glucosidase (sucrase-maltase-isomaltase) from Anoxybacillus gonensis
ZEYNEP DENGİZ BALTA
Doktora
Türkçe
2023
BiyoteknolojiRecep Tayyip Erdoğan ÜniversitesiSu Ürünleri Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ HAKAN KARAOĞLU
- Investigation of effects of extracts from some honey on alpha-glucosidase enzyme activity
Bazı bal ekstraklarının alfa-glukosidaz enzim aktivitesi üzerindeki etkisinin araştırılması
OMAR MAL ALLAH DHANNOON DHANNOON
Yüksek Lisans
İngilizce
2023
KimyaÇankırı Karatekin ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. VOLKAN EYÜPOĞLU
DR. ÖĞR. ÜYESİ ALİ RIZA TÜFEKÇİ