Geri Dön

Gabapentinoidlerin meme kanser hücre ve kök hücreleri üzerine etkisi

Effect of gabapentinoids on breast cancer cells and stem cells

PDF İndir

  1. Tez No: 936395
  2. Yazar: SALİHA AKSUN
  3. Danışmanlar: PROF. DR. GÜLİNNAZ ERCAN
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyoloji, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Meme Kanseri, Kanser Kök Hücresi (KKH), Meme kanseri kök hücresi (meme KKH), Pregabalin, MTT, MCF-7, MDA-MB-231, Neoplazm kök hücreleri, breast cancer, cancer stem cells, (CSCs), breast cancer stem cell, (BCCS), Pregabalin, MTT, MCF-7, MDA-MB-231, Neoplastic stem cells
  7. Yıl: 2025
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Ege Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kök Hücre Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

Dünyada kanser görülme sıklığı giderek artmaktadır ve kanser hastalarına nöropatik ağrıları nedeniyle, ağrılarını hafifletmek için sıklıkla gabapentin ilaç grubundan pregabalin verilmektedir. Kanser kök hücreleri (KKH)'nin tümör oluşumu, invazyon, metastaz, ilaç direnci ve tümörün nüksetmesinden sorumlu olduğu bilinmektedir. Bu nedenle, kanser hastasının ağrısını azaltmak amacı ile kullanılacak ilaçlara KKH'nin hücresel yanıtlarının bilinmesi kritik önem taşımaktadır. Tez projemizin amacı, pregabalinin kanser hücreleri (KH) ve KKH üzerine sitotoksik/proliferatif etkisinin olup olmadığı konusunu araştırmaktır. Bu amaçla, meme KH'nin iki farklı hücre hattından (MCF-7 ve MDA-MB-231) FACS ile CD44+/CD24- meme KKH izole edilmiştir. 1.35x107 MDA-MB-231 KH'den, 4.73x105 (%3.5); 1.8x107 MCF-7 KH'den, 1.3x104 (%0.07) CD44+/CD24- meme KKH elde edilmiştir. CD133+ KKH %0.0-0.2 olduğundan, elde edilen meme KKH, CD44+/CD24-/CD133- MDA-MB-231 KKH ve CD44+/CD24-/CD133- MCF-7 KKH olarak tanımlanmıştır. Meme KH ve KKH'lerine farklı konsantrasyonlarda (0.3, 1, 3, 10 ve 30 µM) pregabalin uygulanırken, ilaç verilmeyen kontrol grupları yanısıra, sitotoksik etkili siklofosfamid ilacı uygulanan pozitif kontrol grupları da oluşturulmuştur. EC50 değeri ve sitotoksik/proliferatif etkilerin belirlenmesi için MTT, migrasyon/motilite özelliğinin değerlendirmesi için WH (Wound Healing) testleri, canlılık/apoptoz durumunu gözlemlemek için ANNEXİN-V/PI testi yapılarak pregabalinin MCF-7 ve MDA-MB 231 KH ve KKH üzerindeki etkileri belirlenmiştir. MTT deneylerinde, MDA-MB-231 KH'de 3 µM, 10 µM ve 30 µM Pregabalin verilen hücrelerde 48.saatte maksimum olmak üzere Optik Dansite (OD) ölçümlerinde artış saptanmıştır. Kontrol hücrelerinin OD=0.397 olarak bulunurken, 48.saatte 3 µM, 10 µM ve 30 µM pregabalin uygulanan MDA-MB-231 KH'nin OD değerleri sırasıyla 0.921, 1.068, 1.016 (p<0.0001) olarak bulunmuştur. 72. saatte de kontrol grubuna göre (OD=0.461); 3 µM ve 10 µM konsantrasyonlarda istatistiksel olarak anlamlı derecede OD artışı olmuştur (sırasıyla; OD=0.869; p<0,0001 ve OD=0.706; p<0,05). MDA-MB-231 meme KKH'lerinde, 3 µM Pregabalin uygulanan hücrelerde, OD değerlerinin 48. ve 72. saatlerde kontrol grubuna kıyasla önemli ölçüde yüksek olması (kontrol ve 3 µM pregabalin uygulanan hücrelerin OD değerleri sırasıyla 48. saatte 1.425'e karşı 2.035; p<0.05; 72. saatte 1.555'e karşı 2.382; p<0.005) Pregabalinin bu meme KKH'ni prolifere ettiğini göstermektedir. MCF-7 meme KKK'lerinde, 30 µM pregabalin uygulamasıyla 48. saatte kontrol grubuna kıyasla OD'de artış gözlenirken (OD=0.401'e karşı OD=0.638; p<0.05), 30 µM siklofosfamid uygulamasıyla ise 72. saatte kontrol grubuna kıyasla OD değerlerinde anlamlı bir azalma gözlenmesi (OD=0.564'e karşı OD=0.232; p<0.0001); Pregabalinin meme KKK'lerinin proliferasyonunu artırırken, siklofosfamidin meme KKK'lerinin proliferasyonunu sitotoksik etkisiyle inhibe ettiğini göstermektedir. MDA-MB-231 KH'nin pregabalin uygulamasına verdiği proliferasyon yanıtı MCF-7 KH'ne göre ~2 kat daha fazladır (48. saatte, MDA-MB-231 KH'de kontrol OD=0.397'e karşı 3 µM'da OD=0.920, 30 µM'da OD=1.016) iken; MCF-7 KH'de (kontrol OD=0.378'e karşı, 3 µM'da OD=0.417; 30 µM'da OD=0.520). WH testinde, pregabalinin ≥ 3 µM konsantrasyonlarda meme KH ve KKH'nin motilitesini/migrasyonunu arttırdığı gözlemlenmiştir. Annexin-V/PI testinde, 30 µM pregabalinin özellikle MDA-MB-231 KKH'nde en yüksek olmak üzere (% 82 canlılık) tüm gruplarda hücre canlılığını kontrol/siklofosfamid gruplarına göre arttırdığı belirlenmiştir. MTT 48 saat test sonuçları ile WH ve Annexin V/PI test sonuçları birbiri ile uyumlu bulunmuştur. Sonuç olarak, pregabalinin meme KH'leri ve KKH'leri üzerindeki etkisinin ilk kez incelendiği bu çalışmada, hücre proliferasyonunun artan ilaç konsantrasyonuyla arttığının gözlenmesi; KH yanı sıra KKH üzerinde de in vitro koşullarda ilaç etkisinin test edilmesi gerektiğini ve bu alanda daha fazla çalışmaya gereksinim duyulduğunu göstermektedir.

Özet (Çeviri)

The incidence of cancer is increasing worldwide and since cancer patients experience neuropathic pain, pregabalin from the gabapentin drug group is frequently given to relieve their pain. Cancer stem cells (CSCs) are known to be responsible for tumor formation, invasion, metastasis, drug resistance and tumor recurrence. Therefore, it is of critical importance to know the cellular responses of CSCs to the drugs that will be used to reduce the pain of cancer patients. The aim of our thesis project is to investigate whether pregabalin has a cytotoxic/proliferative effect on cancer cells (CCs) and cancer stem cells (CSCs). For this purpose, CD44+/CD24-breast CSCs were isolated from two different cell lines of breast CCs (MCF-7 and MDA-MB-231) by FACS. From 1.35x107 MDA-MB-231 CCs, 4.73 x105 (%3.5); from 1.8x107 MCF-7 CCs, 1.3x104 (%0.07) CD44+/CD24-breast CSCs were obtained. Since CD133+CSCs were 0.0-0.2%, our breast CSCs were defined as CD44+/CD24-/CD133-MDA-MB-231 CSCs and CD44+/CD24-/CD133-MCF-7 CSCs. While pregabalin was applied to breast CCs and CSCs at different concentrations (0.3, 1, 3, 10 and 30 µM), drug-free control groups, and cytotoxic cyclophosphamide applied positive control groups were also created. In order to determine the effects of pregabalin on MCF-7 and MDA-MB-231 CCs and CSCs, we used MTT to find EC50 and observe cytotoxic/proliferative effects, WH (Wound Healing) test for migration/motility properties, and ANNEXIN-V/PI test for the viability/apoptosis status. In MTT experiments, cell proliferation was detected due to increase in Optical Density (OD) measurements, being maximum at 48th hour, when 3 µM, 10 µM and 30 µM Pregabalin applied to MDA-MB-231 CCs.While the OD of control cells was 0.397, the OD values of MDA-MB-231 CCs treated with 3 µM, 10 µM and 30 µM pregabalin at 48th hour were 0.921, 1.068, 1.016 (p<0.0001), respectively. Also, at the 72nd hour, a statistically significant increase in OD were determined with pregabalin doses of 3 µM (OD=0.869; p<0.0001) and 10 µM (OD=0.706; p<0.05) in comparison to the control group (OD=0.461) of MDA-MB-231 CCs. In MDA-MB-231 breast CSCs, it was determined that 3 µM dose of Pregabalin significantly increased the OD values compared to the drug-free control group at 48th and 72nd hours indicating proliferation of the breast CSC (OD values of control and 3 µM pregabalin-applied cells were 1.425 vs. 2.035; p<0.05 at 48th hour; 1.555 vs. 2.382; p<0.005 at 72nd hour, respectively). On MCF-7 breast CSCs, an increase in OD was observed at the 48th hour with the application of 30 µM pregabalin compared to the control group (0.401 vs. 0.638, p<0.05), while a significant decrease in OD values was observed at the 72nd hour with the application of 30 µM cyclophosphamide compared to the control group (0.564 vs. 0.232 p<0.0001); showing that while pregabalin increased the proliferation of breast CSCs, cyclophosphamide inhibited proliferation of breast CSCs via cytotoxicity. The proliferation response of MDA-MB-231-CCs to Pregabalin application is ~2-fold higher than MCF-7-CCs at 48th hour (control OD=0.397 vs. OD=0.920 at 3 µM, OD=1.016 at 30 µM in MDA-MB-231-CCs; in comparison to control OD=0.378 vs. OD=0.417 at 3 µM; OD=0.520 at 30 µM in MCF-7-CCs). In the WH test, it was observed that pregabalin increased the motility/migration of breast CCs and CSCs at concentrations of ≥ 3 µM. In the Annexin-V/PI test, it was determined that 30 µM Pregabalin increased cell viability in all groups, especially the highest viability rate (82%) in MDA-MB-231 CSCs compared to the control/cyclophosphamide groups. The MTT 48th hour test , the WH test and Annexin-V/PI test results were found to be consistent with each other. In conclusion, in this study, in which the effect of pregabalin on breast CCs and CSCs was examined for the first time, it was observed that cell proliferation increased with increasing drug concentration. Therefore, this situation indicates that the reliability of drugs such as pregabalin used in the treatment of cancer-related neuropathıc pain should be tested in vitro on CCs as well as CSCs, and further studies are needed in this area.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    803466

    Madde kullanım bozukluğu olan bireylerde gabapentinoidlerin suistimali ve eşlik eden yasadışı madde kullanımının toksikolojik değerlendirilmesi

    Toxicological evaluation of gabapentinoids abuse and concomitant illegal substance use in individuals with substance use disorder

    İNCİ SAĞLAM

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    Adli TıpEge Üniversitesi

    Bağımlılık Toksikolojisi Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. YUSUF KURTULMUŞ

  2. Tez No

    820323

    Atık suda gabapentin analizi için sıvı kromotografisi-ardışık kütle spektrometresi ile yöntem geliştirilmesi

    Başlık çevirisi yok

    AYGÜL YUSİFZADA

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    Adli Tıpİstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa

    Fen Bilimleri Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. SELDA MERCAN

  3. Tez No

    892861

    2003-2023 yılları arasında ağrı polikliniğimize başvuranakut herpes zoster nevraljisi ve post herpetik nevralji hastalarının medikal analjezik tedavilerinin retrospektif değerlendirilmesi

    Retrospective evaluation of medical analgesictreatments applied to patients with acute herpes zosterneuralgia and postherpetic neuralgia referred to ourpain clinic between 2003-2023

    OKAN TALAY

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    Anestezi ve ReanimasyonKaradeniz Teknik Üniversitesi

    Anesteziyoloji ve Reanimasyon Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ERDEM NAİL DUMAN

    DOÇ. DR. ERSAGUN TUĞCUGİL

  4. Tez No

    693661

    Suistimali artan pregabalinin idrarda analizine yönelik bir yöntem geliştirilmesi

    Development of analytical method for analysis of pregabalin increasing abuse in urine

    EZGİ BENGİ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    Eczacılık ve FarmakolojiEge Üniversitesi

    Bağımlılık Toksikolojisi Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SERAP ANNETTE AKGÜR

Geri Dön