Geri Dön

İshalli hastalarda Entamoeba histolytica sıklığının mikroskobik bakı, ELISA ve PCR yöntemleri ile araştırılması

Investigation of Entamoeba histolytica frequency in patients with diarrhea using microscopy, ELISA and PCR methods

PDF İndir

  1. Tez No: 941819
  2. Yazar: ALPEREN CEYLAN
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. FATMA ESENKAYA TAŞBENT
  4. Tez Türü: Tıpta Uzmanlık
  5. Konular: Mikrobiyoloji, Microbiology
  6. Anahtar Kelimeler: Entamoeba histolytica, amebiyazis, ishal, ELISA, PCR, Entamoeba histolytica, amebiasis, diarrhea, ELISA, PCR
  7. Yıl: 2025
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Necmettin Erbakan Üniversitesi
  10. Enstitü: Tıp Fakültesi
  11. Ana Bilim Dalı: Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 84

Özet

Amaç: Entamoeba histolytica derin konak doku hasarı yapma yeteneğine sahip bir ishal patojenidir. Benzer ancak patojen olmayan türlerin varlığından dolayı rutin tanıda önemli zorluklar bulunmaktadır. Çalışmamızda, ishalli hastalardan seçilen dışkı örnekleri E. histolytica varlığı açısından direkt mikroskobi, trikrom boyama, ELISA ve multipleks real-time PCR ile analiz edilmiştir. Araştırma ile E. histolytica sıklığının tespit edilmesi ve kullanılan yöntemleri karşılaştırarak tanısal değerlerinin belirlenmesi amaçlanmıştır. Yöntem: Çalışmamıza Necmettin Erbakan Üniversitesi Tıp Fakültesi Hastanesi'ne ishal şikayetiyle başvuran hastalardan seçilen 96 dışkı örneği dahil edilmiştir. Çeşitli servis ve polikliniklerden laboratuvarımıza gelen bu örneklerden intestinal amebiyazis şüphesiyle gönderilen, şekilsiz, sulu, kanlı ve/veya mukuslu olanlar dahil edilirken, sert ve şekilli olanlar çalışmaya alınmamıştır. Tüm örneklere; doymuş NaCl çözeltisiyle yoğunlaştırma sonrası direkt mikroskobi, Wheatley trikrom boyama, dışkıda E. histolytica'ya özgü adezin antijeni tespit eden ELISA ve multipleks real-time PCR yöntemleri uygulanmıştır. Bulgular: Çalışmada araştırılan 96 örnekten 48'i erkek, 48'i kadın hastalara aittir. Yaş aralığı 0-86 olan hastaların yaş ortalaması 37,32 (standart sapma: ±24,10) olarak hesaplanmıştır. Çocuk yaş grubunda bulunan toplam 25 hastanın yaş ortalaması ise 6,8 (standart sapma: ±5,65) olarak bulunmuştur. E. histolytica pozitiflik oranı PCR ile %22,9 (n=22), ELISA ile %20,8 (n=20) bulunmuştur. Trikrom boyama ile örneklerin %27,1'inde (n=26) E. histolytica/dispar tespit edilmiştir. Direkt mikroskobik bakıda %35,4 (n=34)'ünde şüpheli amip kist ve/veya trofozoitleri görülmüştür. Multipleks PCR'da 6 paraziter etken araştırılmış ve en sık (%34,3) B. hominis, daha sonra sırasıyla E. histolytica (%22,9), D. fragilis (%5,2) ve Cryptosporidium spp. (%1,04) pozitifliği tespit edilmiştir. Giardia intestinalis ve Cyclospora cayetanensis ise tüm örnekler için negatif bulunmuştur. 5 örnekte (%5,2) E. histolytica ve B. hominis ve 3 örnekte (%3,1) D. fragilis ve B. hominis birlikte tespit edilmiştir. PCR yöntemi referans alınarak yapılan istatistiksel analizde, direkt mikroskobinin duyarlılığı %31,8, özgüllüğü %63,5; Wheatley trikrom boyamanın duyarlılığı %40,9, özgüllüğü %77; ELISA yönteminin duyarlılığı %72,7 ve özgüllüğü %94,5 olarak hesaplanmıştır. Sonuç: E. histolytica'nın etken olduğu amebiyazisin tanısında doğru, hızlı ve maliyet-etkin bir laboratuvar yaklaşımı kritik öneme sahiptir. Ancak patojen E. histolytica'nın, E. dispar/moshkovskii gibi apatojen türler ile morfolojik olarak identik olması gibi temel bazı sorunlarla karşılaşılmaktadır. Bu durum mikroskobinin tanısal duyarlılığını ve özgüllüğünü büyük oranda azaltmaktadır. Bu nedenle oluşturulacak tanı algoritmalarında, ELISA ve/veya PCR gibi ikinci bir yöntemin mikroskobiye eşlik etmesi, sonuçların güvenilirliğini artıracaktır.

Özet (Çeviri)

Objective: Entamoeba histolytica is a diarrheal pathogen capable of causing deep tissue damage. The presence of morphologically similar but non-pathogenic species poses significant challenges in routine diagnosis. In our study, stool samples selected from patients with diarrhea were analyzed for E. histolytica using direct microscopy, trichrome staining, ELISA and multiplex real-time PCR. The aim of this study was to determine the prevalence of E. histolytica and to assess the diagnostic value of the methods used by comparing them. Materials and Methods: Our study included 96 stool samples selected from patients who presented to Necmettin Erbakan University Faculty of Medicine Hospital with complaints of diarrhea. Among these samples, those that were formless, watery, bloody and/or mucous were included in the study. Wheatley trichrome staining, direct microscopy after concentration with saturated NaCl solution, ELISA method to detect E. histolytica-specific adhesin antigen and multiplex real-time PCR were applied to all selected samples. Results: Of the 96 samples analyzed in the study, 48 belonged to male and 48 to female patients. The ages of the patients ranged from 0 to 86 years, with a mean age of 37,32 (SD: ±24,10). The mean age of the 25 patients in the pediatric age group was found to be 6,8 (SD: ±5,65). The positivity rate of E. histolytica was found to be 22,9% (n=22) by PCR and 20,8% (n=20) by ELISA. Using trichrome staining, E. histolytica/dispar was detected in 27,1% (n=26) of the samples. Amoebic cysts and/or trophozoites were observed in 35,4% (n=34) of the samples by direct microscopic examination. In the multiplex PCR, six parasitic agents were investigated, and the most common was B. hominis (34,3%), followed by E. histolytica (22,9%), D. fragilis (5,2%), and Cryptosporidium spp. (1,04%). G. intestinalis and C. cayetanensis were found to be negative in all samples. E. histolytica and B. hominis were detected together in 5 samples (5,2%), D. fragilis and B. hominis were detected together in 3 samples (3,1%). In the statistical analysis performed by accepting PCR as the reference method, the sensitivity of direct microscopy was 31,8% and specificity was 63,5%; the sensitivity of Wheatley trichrome staining was 40,9% and specificity was 77%; the sensitivity of the ELISA method was 72,7% and specificity was 94,5%. Conclusion: An accurate, fast and cost-effective laboratory approach is critical in the diagnosis of amebiasis. However, a major challenge is that the pathogenic E. histolytica is morphologically identical to non-pathogenic species such as E. dispar and E. moshkovskii. This significantly limits the diagnostic sensitivity and specificity of microscopy. Therefore, in diagnostic algorithms to be established, the use of a second method such as ELISA and/or PCR alongside microscopy will increase the reliability of the results.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    943028

    Çocukluk yaş grubunda paraziter akut gastroenterit etkenlerinin konvansiyonel yöntemler ve multipleks PZR ile araştırılması

    Investigation of parasitic agents causing acute gastroenteritis in the pediatric age group using conventional methods and multiplex PCR

    AYA ISA ABEDULKADIR ZUHOUR

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2025

    MikrobiyolojiNecmettin Erbakan Üniversitesi

    Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. FATMA ESENKAYA TAŞBENT

  2. Tez No

    809502

    2017-2021 yılları arası kırıkkale üniversitesi tıp fakültesi hastanesi çocuk sağlığı ve hastalıkları kliniğine başvuran akut gastroenterit tanısı alan 1 ay-18 yaş arası çocukların klinik, laboratuvar ve demografik özellikleri

    Clinical, laboratory and demographic features of children between 1 month-18 years, diagnosed with acute gastroenteritis, applying to kirikkale university medical faculty hospital pediatric health and diseases clinic between 2017-2021

    GÜLNARA KİBAR

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıKırıkkale Üniversitesi

    Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. AYŞEGÜL ALPCAN

  3. Tez No

    454055

    İshalli hastalarda entamoeba histolytica 'nın saptanmasında kullanılan yöntemlerin karşılaştırılması

    Comparison of the methods for the detection of entamoeba histolytica in diarrheal patients

    SEMA TORTOP

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    MikrobiyolojiAkdeniz Üniversitesi

    Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. GÖZDE ÖNGÜT

  4. Tez No

    88368

    İshalli hastalarda cryptosporidium ookistlerinin ve diğer ishal etkenlerinin araştırılması

    Investigation of cryptosporidum oocist and other diarrheae agents in patients with diarrheae

    NİLGÜN ARIKAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    1999

    MikrobiyolojiPamukkale Üniversitesi

    Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. MUSTAFA ŞENGÜL

  5. Tez No

    260479

    İshalli hastalarda Enterotoksijenik Bacteroides fragilis prevalansı ve bft geni subtiplerinin belirlenmesi

    Evaluation of the prevalence of enterotoxigenic Bacteroides fragilis and bft gene subtypes in patients with diarrhea

    MEHTAP AKPINAR

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2010

    MikrobiyolojiZonguldak Karaelmas Üniversitesi

    Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. ELİF AKTAŞ

Geri Dön