Gebelerde soluk havasından elde edilen biyolojik materyalde fetal DNA tayini
Analysis of fetal DNA in biological samples derived from maternal exhaled breath
- Tez No: 943874
- Danışmanlar: PROF. DR. MUHSİN ÖZGÜR ÇOĞULU
- Tez Türü: Tıpta Uzmanlık
- Konular: Genetik, Kadın Hastalıkları ve Doğum, Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları, Genetics, Obstetrics and Gynecology, Child Health and Diseases
- Anahtar Kelimeler: prenatal tanı, cffDNA, yoğunlaştırılmış soluk havası, dd-PCR, SRY, prenatal diagnosis, cffDNA, exhaled breath condensate, dd-PCR, SRY
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ege Üniversitesi
- Enstitü: Tıp Fakültesi
- Ana Bilim Dalı: Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 80
Özet
Giriş ve Amaç: Son yıllarda, teknolojik gelişmelerin etkisiyle prenatal tarama ve tanı testlerinde önemli ilerlemeler kaydedilmiş; anne ile fetüs arasındaki biyolojik geçişlerin değerlendirilmesine yönelik çalışmalar önem kazanmıştır. Maternal plazmada hücre dışı serbest fetal DNA'nın (cffDNA) gösterilmesi, non-invaziv prenatal testlerin (NIPT) gelişmesine olanak sağlamıştır. cffDNA'nın amniyotik sıvı ve idrar gibi farklı vücut sıvılarında da tespit edilebilmesi, alternatif örnekleme yöntemlerinin araştırılmasına zemin hazırlamıştır. Yoğunlaştırılmış soluk havası (EBC), başta akciğer hastalıkları olmak üzere çeşitli klinik durumlarda kullanılan non-invaziv bir biyolojik örnekleme yöntemidir. Soluk havasında DNA ve RNA gibi genetik materyallerin saptanabiliyor olması, bu yöntemin gebelikte de potansiyel bir tanı aracı olarak değerlendirilebileceğini düşündürmektedir. Bu çalışmada, gebelerin EBC örneklerinde fetal DNA varlığının araştırılması amaçlanmıştır. Gereç ve Yöntem: Bu çalışma, tek merkezli ve prospektif bir tasarımla gerçekleştirilmiş olup, Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi Kadın Hastalıkları ve Doğum Anabilim Dalı'nda takip edilen ve ultrasonografide erkek fetüs taşıdığı saptanan 30 gebe değerlendirilmiştir. Etik kurul onayının ardından, katılımcılardan bilgilendirilmiş onam alınarak, Amerikan Toraks Derneği kılavuzlarına uygun şekilde yoğunlaştırılmış soluk havası (EBC) örnekleri toplanmıştır. Elde edilen örneklerden DNA izolasyonu yapılmış; kalite ve miktar kontrolünün ardından, fetal DNA varlığının ve erkek cinsiyetin belirlenmesine yönelik olarak dijital damlacık PCR (dd-PCR) yöntemiyle SRY dizi analizi gerçekleştirilmiştir. Erkek cinsiyet, SRY geninin dd-PCR ile saptanmasıyla doğrulanmıştır. Sonuçlar, tanımlayıcı istatistiklerle ve %95 güven aralığında değerlendirilmiştir. Bulgular: Çalışmaya dahil edilen olguların ortalama yaşı 30,1±6,1 yıl olarak belirlenmiştir. Örneklemenin yapıldığı esnada gestasyonel yaşlar 33 hafta ile 40 hafta arasında değişmekteydi. Olguların gebelik haftası ortalama 37 hafta olarak saptanmıştır. Örneklem alımı ile eş zamanlı gerçekleştirilen ultrasonografilerde ortalama fetüs ağırlığı 3085 gram ölçülmüştür. Elde edilen 30 EBC örneğine DNA izolasyonu uygulanmıştır. Elde edilen örneklerin ortalama DNA konsantrasyonu 17 ng/µl olarak sonuçlanmıştır. Analiz edilen örneklerde DNA konsantrasyonu en düşük 3,3 ng/µl, en yüksek ise 34,1 ng/µl olarak belirlenmiştir. İzolasyonu sağlanan tüm DNA örneklerinde, SRY dizilerinin varlığı dijital damlacık PCR (dd-PCR) yöntemi kullanılarak değerlendirilmiştir. Çalışma sonucunda toplam örneklerin 11'inde (11/30; %36,6) SRY dizisi pozitif olarak sonuçlanmıştır. Örnek alınarak çalışmaya dahil edilen tüm gebelerin bebeklerinin (30/30), doğum sonrası muayenede fenotipik olarak erkek cinsiyette olduğu görülmüştür. Sonuç: Bu çalışma, EBC örneklerinde fetal DNA varlığını ortaya koyarak noninvaziv prenatal tanıda yeni bir yaklaşımın mümkün olabileceğini göstermiştir. SRY geninin %36,6 oranında tespit edilmesi, yöntemin uygulanabilirliğini desteklemektedir. Ancak, standardizasyon eksiklikleri ve teknik sınırlılıklar göz önüne alındığında, fetal genomun saptanmasında daha hassas yöntemlerin geliştirilmesine ve ileri düzey çalışmalara ihtiyaç duyulmaktadır.
Özet (Çeviri)
Introduction and Objective: In recent years, prenatal screening and diagnostic tests have advanced rapidly with the impact of technological advances, and the assessment of biological transitions between mother and fetus has gained importance. The demonstration of cell free fetal DNA (cffDNA) in maternal plasma has led to the development of non-invasive prenatal tests (NIPT). The detection of cffDNA in other body fluids such as amniotic fluid and urine has led to alternative sampling methods. Exhaled breath condensate (EBC) is a non-invasive biological sampling method used in various clinical situations, especially in pulmonary diseases. The ability to detect genetic materials such as DNA and RNA in breath air suggests that this method can be used as a potential diagnostic tool in pregnancy. The aim of this study was to investigate the presence of fetal DNA in EBC samples of pregnant women. Materials and Methods: This study, single-center, prospective was conducted in 30 pregnant women who were followed up in Ege University Faculty of Medicine, Department of Obstetrics and Gynecology and were found to be carrying a male fetus on ultrasonography. After ethics committee approval, informed consent was obtained and EBC samples were collected from the participants in accordance with the American Thoracic Society guidelines. DNA was isolated from the samples, and after quality and quantity control, SRY sequence analysis was performed by digital droplet PCR (dd-PCR) to determine the presence of fetal DNA and male gender. Male sex was confirmed by detection of the SRY gene by dd-PCR. The results were evaluated with descriptive statistics and 95% confidence intervals. Results: The mean age of the patients included in the study was 30.1 ± 6.1 years. Gestational ages ranged between 33 weeks and 40 weeks at the time of sampling. The mean gestational age was 37 weeks. The average fetal weight was 3085 grams in ultrasonography performed simultaneously with sampling. DNA isolation was performed on 30 EBC samples obtained. The average DNA concentration of the samples obtained was 17 ng/µl. The lowest DNA concentration obtained from the samples was 3.3 ng/µl and the highest DNA concentration was 34.1 ng/µl. The presence of SRY sequences in all isolated DNA samples was evaluated using the dd-PCR method. As a result of the study, positive results were observed in 11 of the total samples (11/30; 36.6%). The babies (30/30) of all pregnant women included in the study were phenotypically male at postnatal examination. Conclusion: This study demonstrated the feasibility of a new approach to noninvasive prenatal diagnosis by detecting fetal DNA in EBC samples. The detection of the SRY gene in 36.6% of the samples supports the applicability of the method. However, considering the lack of standardization and technical limitations, further studies and development of more sensitive methods are needed.
Benzer Tezler
- Spinal anestezi ile sezaryen yapılacak gebelerde göbek çevresi ölçümünün spinal anestezi duyusal blok seviyesi ile ilişkisi
The relationship between abdominal circumference measurement and sensory block level in pregnant women undergoing cesarean section with spinal anesthesia
EMİRHAN MERT İNCESU
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2023
Anestezi ve ReanimasyonDokuz Eylül ÜniversitesiAnesteziyoloji ve Reanimasyon Ana Bilim Dalı
PROF. DR. BAHAR KUVAKİ BALKAN
DOÇ. DR. ELVAN ÖÇMEN
- İki farklı preoksijenasyon tekniğinin değişik ASA gruplarında etkinliğinin değerlendirilmesi
Evaluation of efficiancy of two different preoxygenation techniques in ASA groups
HANDE SİMTEN DEMİREL ÇİTÇİ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2010
Anestezi ve Reanimasyonİstanbul ÜniversitesiAnesteziyoloji ve Reanimasyon Ana Bilim Dalı
PROF. DR. EMRE ÇAMCI
- Spinal anestezi alacak gebelerde preoperatif ve peroperatif preoksijenasyon çalışması
Preoperative and peroperative preoxygenation with spinal anesthsia
CEMİL KANBEROĞLU
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2012
Anestezi ve Reanimasyonİstanbul ÜniversitesiAnesteziyoloji ve Reanimasyon Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. TÜLAY ÖZKAN SEYHAN
- Doğum ağrısının yönetiminde sıcak ve soğuk akupresür uygulamasının doğum ağrısı algısına ve doğum süresine etkisi
The effect of applying hot and cold acupressure on labor pain perception and delivery time in management of labor pain
YASEMİN ÇAPAR
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
Kadın Hastalıkları ve DoğumAtatürk ÜniversitesiDoğum, Kadın Sağlığı ve Hastalıkları Hemşireliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÜLŞEN ERYILMAZ