Yeni nesil hızlı doku şeffaflandırma yöntemlerinin Golgi-Cox boyaması üzerindeki etkisi
The effect of new generation rapid tissue clearing methods on Golgi-Cox staining
- Tez No: 951635
- Danışmanlar: DOÇ. DR. NAİL CAN ÖZTÜRK
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Anatomi, Anatomy
- Anahtar Kelimeler: Golgi-Cox boyaması, Doku şeffaflandırma, Beyin dilimi, Nöron işaretlemesi, Golgi-Cox staining, Tissue clearing, Brain slicing, Neuronal labeling
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Mersin Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Anatomi Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Golgi-Cox boyaması nöron morfolojisini bütün halde inceleyebilmek için en etkili histokimyasal yöntemdir. Ancak birkaç yüz mikrometreyi aşan kesitlerde oluşan opaklık, görüntülemeyi engellemektedir. Bu tez çalışmasında FOCMS ve MACS doku şeffaflandırma yöntemlerinin Golgi- Cox boyamasıyla olan uyumunun incelenmesi amaçlanmıştır. Çalışmada 12 adet erişkin dişi Wistar Albino sıçandan elde edilen beyinler kullanılarak Golgi-Cox yöntemi uygulanan ve uygulanmayan iki ana grup oluşturulmuştur. Sıçan beyin hemisferlerinden alınan 1 mm kalınlığındaki beyin dilimleri Golgi-Cox ile boyandıktan sonra FOCMS ve MACS yöntemleriyle şeffaflandırılmıştır. Beyin dilimlerinde, şeffaflanma öncesi ve sonrasında, dilim alan büyüklüğü, piksel yoğunluğu, ışık geçirgenlik oranları ve nöron morfolojisinin incelenebilirliği karşılaştırılmıştır. Gruplar arasında, FOCMS ve MACS yöntemleriyle şeffaflandırmaya bağlı anlamlı alan değişimine rastlanmamıştır (p>0,05). Golgi-Cox boyaması gerçekleştirilmeyen beyin dilimlerinde, FOCMS ve MACS yöntemlerinin 600 nm dalga boyunda ölçülen ışık geçirgenliğini dikkat çekici oranda artırdığı tespit edilmiştir. Golgi-Cox işaretli ve şeffaflandırılan grupta, ışık geçirgenliği oldukça düşük (maksimum %1,12) ölçülmüştür ve gruplar arasında anlamlı fark tespit edilmemiştir. Ancak Golgi-Cox işaretli şeffaflandırılan dilimlerin stereo-mikroskop altındaki görüntüleri incelendiğinde şeffaflaştırma öncesine kıyasla gözle görülür, homojen olmayan şeffaflanmış alanlar olduğu tespit edilmiştir. FOCMS ve MACS uygulanan dilimlerde cortex cerebri'nin şeffaflık derecesini karşılaştırmak amacıyla yapılan piksel yoğunluğu ölçümlerinde iki yöntem arasında anlamlı fark bulunmamıştır (p>0,05). Ancak Golgi-Cox işaretli MACS ve FOCMS dilimlerinde şeffaflanan alanın tüm dilim alanına oranı kıyaslandığında, MACS grubundaki oranın FOCMS grubuna kıyasla istatistiksel olarak anlamlı olmayan ancak dikkat çekici seviyede yüksek olduğu (p=0,055) tespit edilmiştir. Golgi-Cox ile işaretlenmiş ve şeffaflandırılmış beyin dilimlerinde, işitme korteksi, Z ekseni boyunca invert mikroskopla incelenmiş; bu bölgede dilim kalınlığı boyunca tespit edilen nöronlar, dendritik diken yapıları da dahil olmak üzere bütün halinde görüntülenebilmiştir. Sonuç olarak FOCMS ve MACS yöntemleri Golgi-Cox işaretli beyin dilimlerinde ışık mikroskobik olarak, 1 mm'lik dilim kalınlığı boyunca, nöron morfolojisini bütün halde incelenebilecek düzeyde optik şeffaflandırma sağlamıştır.
Özet (Çeviri)
The Golgi-Cox staining method is the most effective histochemical technique for examining the entire neuronal morphology. However, the opacity that occurs in tissue sections thicker than a few hundred micrometers hinders imaging. This thesis aims to investigate the compatibility of two tissue clearing methods, FOCMS and MACS, with Golgi-Cox staining. In the study, two main groups were formed using brains obtained from 12 adult female Wistar Albino rats: one group was subjected to the Golgi-Cox method, and the other was not. Brain slices 1 mm thick, taken from rat brain hemispheres, were stained using the Golgi-Cox method and then cleared using the FOCMS and MACS methods. In the brain slices, comparisons were made before and after clearing regarding slice area size, pixel intensity, light transmittance rates, and the ability to examine neuronal morphology. No significant area change due to FOCMS and MACS clearing was found between the groups (p > 0.05).In brain slices not subjected to Golgi-Cox staining, it was observed that both the FOCMS and MACS methods significantly increased light transmittance measured at a wavelength of 600 nm.In the Golgi-Cox-stained and cleared group, light transmittance was measured to be quite low (maximum 1.12%), and no significant difference was detected between the groups. However, when examining the images of Golgi-Cox-stained cleared slices under a stereo microscope, visually distinct and non-homogeneously cleared areas were observed compared to the pre-clearing state. Pixel intensity measurements performed to compare the degree of transparency in the cerebral cortex between slices treated with FOCMS and MACS showed no significant difference between the two methods (p > 0.05). However, when comparing the ratio of the cleared area to the total slice area in Golgi-Cox-stained MACS and FOCMS slices, the ratio in the MACS group was found to be noticeably higher than in the FOCMS group, although this difference was not statistically significant (p = 0.055). In Golgi-Cox-stained and cleared brain slices, the auditory cortex was examined along the Z-axis using an inverted microscope, and neurons within this region could be visualized in their entirety throughout the slice thickness, including dendritic spine structures. In conclusion, both FOCMS and MACS methods provided optical clearing at a level that allows comprehensive examination of neuronal morphology under a light microscope throughout 1 mm-thick brain slices stained with Golgi-Cox.
Benzer Tezler
- Formalinle fikse edilmiş parafine gömülü dokularda iki farklı hızlı doku şeffaflandırma yönteminin etkinliğinin karşılaştırılması
Comparison of the efficacy of two different rapid tissue clearing methods in formalin-fixed paraffin-embedded tissues
GÜLŞAH GÜRBÜZ ALVER
- Yeni nesil haberleşme sistemlerinin neden olduğu elektromanyetik alan maruziyetinin modellenmesi ve incelenmesi
Modeling and investigation of electromagnetic field exposure caused by next-generation communication systems
NİYAZİ İL
- Parsiyel nefrektomide kullanılan yeni nesil hemostatik ajanların etkinliklerinin ve makroskopik, mikroskopik ve elektron mikroskopik olarak histopatolojik etkilerinin rat modeli üzerinde karşılaştırılması
Comparison of the efficacy and macroscopically, microscopically, and electron microscopically histopathological effects of new generation hemostatic agents in a partial nephrectomy rat model.
MURAT BAĞCIOĞLU
- Kemik sintigrafisi için yeni 99M-Tc difosfonat radyofarmasötiklerinin geliştirilmesi
Developing new 99M-Tc diphosphonate radiopharmaceuticals for bone scintigraphy
FUNDA GAMZE DURAK
- Hipokloroz asit aktivite ölçümü için yeni florojenik problar geliştirilmesi
Development of new fluorogenic probes for hypochlorous acid activity measurement
AYTEN IBRAHIMOVA
