Geri Dön

Akciğer kanserine karşı DNA aşısının geliştirilmesi ve fareler üzerinde tümöre karşı tedavi edici etkisinin belirlenmesi

Development of DNA vaccine against lung cancer and determination of therapeutic effects against tumor in mice

  1. Tez No: 955432
  2. Yazar: EZGİ DAĞ TAŞKESENLİGİL
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. YAĞMUR ÜNVER
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2025
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Atatürk Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Biyoteknoloji Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 156

Özet

Amaç: Bu tez çalışmasında, akciğer kanserine karşı kullanılabilecek DNA aşı adaylarının elde edilmesi ve bu aşı adaylarının sinjenik tümör modeli oluşturulan C57BL/6 farelerinde tedavi edici etkilerinin değerlendirilmesi amaçlanmıştır. Yöntem: pVAX1'e sırasıyla GM-CSF, CTLA-4 ve Muc1VNTR nükleotid dizilerinin ardışık olarak E. coli JM109 hücrelerinde klonlanmasıyla üç farklı rekombinant DNA (pVAX1-GMCSF, pVAX1-CTLA4-GMCSF ve pVAX1-Muc1VNTR-CTLA4-GMCSF) elde edilmiş ve doğrulama için koloni PCR ve dizi analizi kullanılmıştır. Elde edilen rekombinant DNA'lar CHO hücrelerine elektroporasyon yöntemiyle aktarılmış, GM-CSF proteini Western blotlama, CTLA-4 proteini ise gümüş boyama yöntemi ile tespit edilmiştir. LLC1 (Lewis lung carcinoma) hücre hattıyla tümör modeli oluşturulan C57BL/6 fareleri üzerinde dört grup (kontrol, pVAX1(sham), pVAX1-CTLA4-GMCSF ve pVAX1-Muc1VNTR-CTLA4-GMCSF) aşı ile aşılama protokolü oluşturulmuş ve her gruba üç doz aşı uygulanmıştır. 30 gün boyunca tümör progresyonu izlenmiştir. Çalışma sonunda farelerden alınan doku örnekleri histopatolojik ve immunohistokimyasal olarak değerlendirilmiştir. Diğer yandan, DNA aşılarının immünojenik etkilerini değerlendirmek amacıyla aynı aşı grupları ile in vivo bağışıklama deneyi gerçekleştirilmiş, aşılama sonrası özgül antikor yanıtı ELISA ile analiz edilmiştir. Çalışma sonunda farelerden alınan doku örnekleri histopatolojik ve immunohistokimyasal olarak değerlendirilmiştir. Bulgular: Klonlama çalışmaları sonucunda elde edilen rekombinant DNA'lar (pVAX1-GMCSF, pVAX1-CTLA4-GMCSF ve pVAX1-Muc1VNTR-CTLA4-GMCSF) elde edilmiştir. Diğer yandan, GM-CSF ve CTLA-4 proteinlerinin CHO hücreleri tarafından ifade edildiği belirlenmiştir. Tümör modeli oluşturulan farelerde pVAX1-CTLA4-GMCSF aşısının pVAX1-Muc1VNTR-CTLA4-GMCSF aşısına kıyasla tümör büyümesini yavaşlattığı gözlenmiştir. Gruplarda yer alan farelerden alınan doku örnekleri ile gerçekleştirilen histopatolojik ve immünohistokimyasal analizlerin bu bulguları desteklediği görülmüştür. Diğer yandan, yapılan in vivo bağışıklama deneyinde farelerde pVAX1-CTLA4-GMCSF aşısına karşı spesifik CTLA-4 antikorunun geliştiği doğrulanmış, alınan doku örneklerinin histopatolojik ve immunohistokimyasal analizleri neticesinde normal histolojik görünüm gözlenmiştir. Sonuç: pVAX1-Muc1VNTR-CTLA4-GMCSF aşısının farelerde tümör büyümesini önlemede etkili olmadığı, buna karşılık pVAX1-CTLA4-GMCSF aşısının tümör büyümesini anlamlı şekilde azalttığı belirlenmiştir. Ayrıca, pVAX1-Muc1VNTR-CTLA4-GMCSF aşısının Muc1VNTR'ye özgü antikor üretimini indüklemediği, pVAX1-CTLA4-GMCSF aşısının ise CTLA-4'e özgü antikor üretimini sağladığı görülmüştür. Aynı zamanda DNA aşılarının sağlıklı fareler üzerinde herhangi bir yan etki oluşturmadığı belirlenmiştir.

Özet (Çeviri)

Purpose: This thesis aims to identify DNA vaccine candidates for use against lung cancer, and to evaluate their therapeutic effects in C57BL/6 mice with a syngeneic tumour model. Method: Three different recombinant DNAs (pVAX1-GMCSF, pVAX1-CTLA4-GMCSF and pVAX1-Muc1VNTR-CTLA4-GMCSF) were obtained by cloning the GM-CSF, CTLA-4 and Muc1VNTR nucleotide sequences, respectively, into pVAX1 in E. coli JM109 cells. Colony PCR and sequence analysis were then used to confirm the results. These recombinant DNAs were then transferred to CHO cells via electroporation. GM-CSF protein was detected using Western blotting and CTLA-4 protein using silver staining. A vaccination protocol was established involving four groups of C57BL/6 mice (control, pVAX1 (sham), pVAX1-CTLA4-GMCSF and pVAX1-Muc1VNTR-CTLA4-GMCSF), in which a tumour model was created using the LLC1 (Lewis lung carcinoma) cell line. Three doses of the vaccine were administered to each group. Tumour progression was monitored for 30 days. At the end of the study, tissue samples taken from the mice were evaluated histopathologically and immunohistochemically. To evaluate the immunogenic effects of the DNA vaccines, an in vivo immunisation experiment was performed with the same groups of vaccines, and the specific antibody response after vaccination was analysed using ELISA. At the end of the study, tissue samples taken from the mice were evaluated histopathologically and immunohistochemically. Findings: Cloning studies resulted in the production of recombinant DNAs (pVAX1-GMCSF, pVAX1-CTLA4-GMCSF and pVAX1-Muc1VNTR-CTLA4-GMCSF). It was also determined that GM-CSF and CTLA-4 proteins were expressed by CHO cells. In mice with tumour models, it was observed that the pVAX1-CTLA4-GMCSF vaccine slowed tumour growth more effectively than the pVAX1-Muc1VNTR-CTLA4-GMCSF vaccine. Histopathological and immunohistochemical analyses of tissue samples taken from the mice supported these findings. In the in vivo immunisation experiment, it was confirmed that specific CTLA-4 antibodies developed in response to the pVAX1-CTLA4-GMCSF vaccine, and normal histological appearance was observed in the tissue samples analysed. Results: It was determined that the pVAX1-Muc1VNTR-CTLA4-GMCSF vaccine was ineffective in preventing tumour growth in mice, whereas the pVAX1-CTLA4-GMCSF vaccine significantly reduced tumour growth. Additionally, the pVAX1-Muc1VNTR-CTLA4-GMCSF vaccine was found to not induce Muc1VNTR-specific antibody production, whereas the pVAX1-CTLA4-GMCSF vaccine was found to induce CTLA-4-specific antibody production. Furthermore, it was determined that the DNA vaccines did not cause any adverse reactions in healthy mice.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    405325

    Radyoişaretli antikanser ilacın tümör hücre tutulumu ve DNA ile etkileşimi

    Uptake of radiolabeled anticancer drug on tumor cells and DNA interaction

    MUSTAFA TOP

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    Mühendislik BilimleriEge Üniversitesi

    Malzeme Bilimi ve Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. FATMA YURT LAMBRECHT

    PROF. DR. KADRİYE ARZUM ERDEM GÜRSAN

  2. Tez No

    862725

    Gemsitabinin kolorektal hücrelerde toksikolojik etki mekanizmasının In Vitro araştırılması

    In Vitro investigation of the toxicological mechanisms of gemcitabine in colorectal cells

    MÜCTEBA EŞREF TATLIPINAR

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    Eczacılık ve Farmakolojiİstanbul Üniversitesi

    Farmasötik Toksikoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GÜL ÖZHAN

    DOÇ. DR. ZELİHA PALA KARA

  3. Tez No

    88581

    Küçük hücreli akciğer kanserinin tedavisinde CAV/EP alterne kemoterapi protokolünün etkinliği, prognostik faktör olarak hipofosfatemi ile p53'ün önemi ve yeni tanımladığımız informatif bir mikrosatellit aleli (D5S67-6)

    Efficiency of CAV/EP alternate chemotherapy protochol in small cell lung cancer, importance of hypophosphatemia and p53 as prognostic factor and recent described informative microsatellite allele (D5S679-6)

    MUSTAFA PEHLİVAN

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    1999

    OnkolojiDokuz Eylül Üniversitesi

    Dahili Tıp Bilimleri Bölümü

    Y.DOÇ.DR. UĞUR YILMAZ

  4. Tez No

    834260

    Exploring allosteric mechanisms of chemokine receptor CXCR4 and implications in drug design

    Kemokin reseptörü CXCR4'ün allosterik mekanizmalarının ve ilaç tasarımındaki uygulamalarının keşfedilmesi

    TUĞÇE İNAN

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2023

    Kimya Mühendisliğiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. AYŞE ÖZGE KÜRKÇÜOĞLU LEVİTAS

  5. Tez No

    614359

    Yemek borusu kanseri tedavisinde radyoterapi uygulamasına ilişkin doz değerlendirmesi

    Dose assesment of radiotherapy treatment of esophageal cancer

    GİZEM DOĞANAY

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2019

    Nükleer Mühendislikİstanbul Teknik Üniversitesi

    Nükleer Araştırmalar Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ASİYE BERİL TUĞRUL

Geri Dön