İnsan akciğer fibroblastlarında yeni kinaz inhibitörlerinin anti-fibrotik etkisinin araştırılması
Investigation of anti-fibrotic effect of novel kinase inhibitors on human lung fibroblast
- Tez No: 957811
- Danışmanlar: PROF. DR. FÜSÜN ÖZTAY
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Moleküler Tıp, Biyoloji, Molecular Medicine, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: İstanbul Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Idiyopatik pulmoner fibrozis (IPF), ilerleyici-irreversibl tipte ve agressif seyreden ölümcül bir interstisiyel akciğer hastalığıdır. Günümüzde bu hastalığın tedavisinde kullanılan nintedanib bir tirozin kinaz inhibitörü (TKI) olup, fibroblast/miyofibroblastlardaki çeşitli büyüme faktörlerinin reseptörlerinin aktivasyonunu inhibe ederek fibrotik süreci yavaşlatmaktadır. Ancak, nintedanib kaynaklı yan etkiler ve fibrozisin durdurulamaması yeni TKI'lere ihtiyacı arttırmaktadır. Çalışmamızda, yeni sentezlenen TKI aday moleküllerin insan akciğer fibroblastları üzerindeki anti- fibrotik etkisi ilk kez test edildi. Çalışmada, MRC-5 hücrelerinden üç çalışma grubu oluşturuldu: (I) PBS ile uyarıldıktan 24, 48 ve 72 saat toplanan hücreler; (II) transforme edici büyüme faktörü-β (TGF-β;5 ng/mL) ile uyarıldıktan 24, 48 ve 72 saat toplanan hücreler ve (III) TGF-β+TKI (IC 50 µM) ile uyarıldıktan 24, 48 ve 72 saat toplanan hücreler. MTT hücre canlılık analizi ile maddelerin IC 50 değerleri belirlendi. Hücrelerde genel tirozin kinaz aktivitesi ELISA, hücre proliferasyon kapasitesi BrdU testi, hücrelerin fibrotik yanıtı -düz kas aktin (-SMA, miyofibroblast belirteci), SRC kinaz, TGF-βRII, SMAD2/3 ve SMAD4 protein seviyelerinin Western blot ile analizi ile belirlendi. Y1, Y3, Y4, Y5, Y23 ve 22C moleküllerinden Y5 (p<0,01), Y23 (p<0,01) ve 22C (p<0,05) molekülleri deneyin 72. saatinde TGF-β ile uyarılan MRC-5 hücrelerinde genel TKI etki gösterdi. Y3 İNSAN AKCİĞER FİBROBLASTLARINDA YENİ KİNAZ İNHİBİTÖRLERİNİN ANTİ-FİBROTİK ETKİSİNİN ARAŞTIRILMASI 12 molekülü, TGF-β ile uyarılan MRC-5 hücrelerinde inaktif SRC miktarını azalttı (p<0,05). Y4 (p<0,05) ve Y8 (p<0,01) molekülleri, hücre proliferasyon kapasitesinin yüksek olduğu deneyin 24. saatinde MRC-5 hücrelerinin proliferasyonu azalttı. Y1, Y3, Y4 ve Y5 molekülleri, TGF-β ile uyarılan MRC-5 hücrelerinde SMAD bağımlı TGF-β sinyal yolunun aktivasyonunun azalttılar, ancak miyofibroblast farklılşamasını geriletmediler (p>0,05). Y3 maddesi ise TGF-β ile uyarılan MRC-5 hücrelerinde SMAD2/3 fosforilasyonunu önleyerek (p<0,05) TGF-β sinyal yolunun aktivasyonunun azaltılması yolu ile miyofibroblast farklılaşmasını geriletti (p<0,05). Çalışmanın verileri, genel TKI etkiye sahip moleküllerin (Y5, Y23 ve 22C), TGF-β ile miyofibroblastlara farklılaşmaları uyarılan insan akciğer fibroblastlarında miyofibroblast farklılaşmasının en yüksek olduğu deneyin 72. saatinde anti-fibrotik bir yanıt meydana getirmediklerini göstermektedir. Aksine, genel TKI etki göstermemelerine rağmen, Y4 ve Y8 molekülleri MRC-5 hücrelerinin hücre proliferasyon kapasitesini sınırlayarak, Y3 molekülü de TGF-β ile uyarılan MRC-5 hücrelerinde SMAD2/3 bağımlı TGF-β sinyal yolunun ve spesifik SRC kinazın inaktivasyonu üzerinden miyofibroblast farklılaşmasını önleyerek anti-fibrotik etki meydana getirmektedirler. Y3, Y4 ve Y8 molekülleri, seçici anti-fibrotik etkileri nedeni ile, preklinik çalışmalar için lider bileşikler olarak önerilmektedir.
Özet (Çeviri)
Idiopathic pulmonary fibrosis (IPF) is a fatal interstitial lung disease with a progressive-irreversible and aggressive course. Nintedanib, currently used in the treatment of this disease, is a tyrosine kinase inhibitor (TKI). It slows down the fibrotic process by inhibiting the activation of receptors for various growth factors in fibroblasts/myofibroblasts. However, nintedanib-induced side effects and inability to stop fibrosis increase the need for new TKIs. In the present study, the anti-fibrotic effect of newly synthesized TKI candidate subtances on human lung fibroblasts was tested for the first time. In the present study, three experimental groups were established from MRC-5 cells: (I) cells collected 24, 48 and 72 h after stimulation with PBS; (II) cells collected 24, 48 and 72 h after stimulation with transforming growth factor-β (TGF-β;5 ng/mL); and (III) cells collected 24, 48 and 72 h after treatment with TGF-β+TKI (IC 50 µM). IC 50 values of the substances were determined by MTT cell viability assay. General tyrosine kinase activity in cells, cell proliferation capacity and fibrotic response of cells were determined by ELISA, BrdU assay, by Western blot analysis of -smooth muscle actin (-SMA, myofibroblast marker), SRC kinase, TGF-βRII, SMAD2/3 and SMAD4 protein levels, respectively. Among the substances Y1, Y3, Y4, Y5, Y23 and 22C, Y5 (p<0.01), Y23 (p<0.01) and 22C (p<0.05) molecules showed an overall TKI effect in TGF-β-stimulated MRC-5 cells at 72 h. Substance Y3 decreased the amount of inactive SRC in TGF-β-stimulated MRC-5 cells (p<0.05). Y4 (p<0.05) and Y8 (p<0.01) molecules decreased the proliferation of MRC-5 cells at 24 h of the experiment when cell INVESTIGATION OF THE ANTI-FIBROTIC EFFECT OF NEW KINASE INHIBITORS ON HUMAN LUNG FIBROBLASTS 14 proliferation capacity was high. Substances Y1, Y3, Y4 and Y5 reduced the activation of the SMAD- dependent TGF-β signaling pathway in TGF-β-stimulated MRC-5 cells, but did not regress myofibroblast differentiation (p>0.05). Substance Y3 inhibited SMAD2/3 phosphorylation in TGF-β- stimulated MRC-5 cells (p<0.05), thereby decreasing activation of the TGF-β signaling pathway and regressing myofibroblast differentiation (p<0.05). The data show that substances with general TKI effects (Y5, Y23 and 22C) did not elicit an anti- fibrotic response in myofibroblasts at 72 h, when myofibroblast differentiation was highest. On the contrary, despite their lack of general TKI effect, Y4 and Y8 molecules produced an anti-fibrotic effect by limiting the cell proliferation capacity of MRC-5 cells, while Y3 molecule inhibited myofibroblast differentiation in TGF-β stimulated MRC-5 cells through inactivation of SMAD2/3- dependent TGF-β signaling pathway and specific SRC kinase. Substances Y3, Y4 and Y8 are proposed as lead compounds for preclinical studies due to their selective anti-fibrotic effects.
Benzer Tezler
- İzmir'de Mustafa Kemal Bulvarı'nın peyzaj mimarlığı açısından etüdü ve peyzaj projesi
Başlık çevirisi yok
ENGİN ALPARSLAN
Yüksek Lisans
Türkçe
1985
Peyzaj MimarlığıEge ÜniversitesiPeyzaj Mimarlığı Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. ÜMİT ERDEM
- Çukurova bölgesinde biyoklimatik veriler kullanılarak açık ve yeşil alan sistemlerinin belirlenmesi ilkeleri üzerinde bir araştırma
A research on the determination of the principles in open and green spaces systems by using the bioclimatic data in Çukurova region
MEHMET FARUK ALTUNKASA
Doktora
Türkçe
1987
Çevre MühendisliğiÇukurova ÜniversitesiPeyzaj Mimarlığı Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ERDOĞAN GÜLTEKİN
- Konut bölgelerinde parsel düzeni uygulamasının kent topraklarının rasyonel kullanımı çerçevesinde mimari açıdan değerlendirilmesi
An Architeet's Criticism of the Currently Practised method of plot formation in residential areas from the point of View of rational utilization of urban deatories
SUZAN ESİRGEN
Yüksek Lisans
Türkçe
1986
Şehircilik ve Bölge PlanlamaGazi ÜniversitesiŞehir ve Bölge Planlama Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. UMUR ERKMAN
- Ankara-Kızılcahamam karayolunda meydana gelen trafik kazalarında insan faktörü
Başlık çevirisi yok
CELAL AKBULUT
Yüksek Lisans
Türkçe
1987
UlaşımGazi ÜniversitesiKazaların Çevresel ve Teknik Araştırması Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)
PROF. DR. RIDVAN EGE