Production of recombinant human B-catenin protein in E. coli and screen ing for ants-B-catenin auto-antibodies in cancer sera
E. COLİ'de rekombinant insan beta-katenin proteininin üretimi ve kanser serumlarında beta-katenin otoantikorlarının taranması
- Tez No: 96193
- Danışmanlar: PROF. DR. MEHMET ÖZTÜRK
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2000
- Dil: İngilizce
- Üniversite: İhsan Doğramacı Bilkent Üniversitesi
- Enstitü: Mühendislik ve Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 110
Özet
ÖZET E.COLİ'DE REKOMBİNANT İNSAN BETA-KATENİN PROTEİNİNİN ÜRETİMİ VE KANSER SERUMLARINDA BETA-KATENİN OTOANTİKORLARININ TARANMASI Nuri Öztürk Moleküler Biyoloji ve Genetik Yüksek Lisansı Tez Yöneticisi: Prof Dr. Mehmet Öztürk Temmuz 2000. P-katenin geni, gelişimsel doku biçimlenmesinde rol oynayan wnt yolağının bir parçasını oluşturmaktadır, p-katenin proteini hem E-kaderin aracılığı ile hücreler arası etkileşimde, hem de Tef transkripsiyon faktörleri aracılığı ile gen ekspresyonunun düzenlenmesinde yer alan bir proteindir. Wnt uyarısı olmadığı zaman, hücrelerdeki P-katenin proteini N- terminal bölgesinde yer alan serin/treonin amino asitlerinin fosforlanması sonucu, aktif olarak yıkılır. Bir çok kanserde (kolorektal kanser, hepatoselüler kanser, hepatoblastoma, melanoma, tiroid kanseri vb.), aktif yıkılım sistemindeki anormallikler nedeni ile, P- katenin proteini hücrelerde aşın düzeyde birikim gösterir. Kolorektal kanserlerde bu birikimin nedeni APC geni mutasyonlandır. Diğer kanserlerde ise, p-katenin proteinin yıkılım bölgesini kodlayan 3. ekzon ve çevresinde oluşan mutasyonlar bu birikime neden olmaktadır. Kanserli hücrelerde biriken P-katenin proteininin, c-myc ve eyelin D gibi genlerin transkripsiyonel aktivasyonuna neden olarak, aşın hücre çoğalmasına yol açtığına inanılmaktadır. Benzer bir anormallik, mutant p53 proteininin hücre çoğalmasına yolaçtığı p53 geni mutasyonlannda da gözlemlenmiştir. Buna ek olarak, tümörlerinde mutant p53 proteini eksprese eden kanserli hastalann p53 proteinine karşı otoantikor ve sitotoksik T hücresi (CTL) yanıtı geliştirdikleri gösterilmiştir. Bazı melanomalı hastalarda P-katenine karşı CTL yanıtı gösterilmiştir, ancak kanserli hastalann anti P- katenin oto antikoru geliştirip-geliştirmedikleri bilinmemektedir. Kanserli hastalann P-katenine karşı otoantikor geliştirip-geliştirmediklerini test etmek amacıyla, önce N-terminal tarafından kısaltılmış (ilk 88 amin asidi eksik) insan P- katenin proteini rekombinant olarak üretildi. İlgili p-katenin cDNA sı E. Coli ekspresyon vektörü olan pQE-32 plazmidine N-terminalinden 6xHistidin işaretli olarak klonlandı. Affinite kromatografisi ile saflaştınlan rekombinant P-katenin protenin kanserli hasta ve kontrol serumlannın, farklı immünolojik testlerle taranmasında antijen olarak kullanıldı. İlk aşamada, 1500 den fazla serum ELİSA yöntemi ile tarandı ve 53 kanserli hasta serumu seçildi. Bu serumlardan 5 adedinde anti P-katenin otoantikoru varlığı western immunoblot yöntemi ile gösterildi. Bu 5 serum in vitro olarak üretilmiş normal boyda P- katenin proteini ile yapılan immunoçöktürme yöntemi ile de pozitif sonuç verdi. Buna karşılık, 5 kontrol serumu bu duyarlı yöntemle negatif sonuç verdi. Bu çalışma bazı kanserli hastalann p-katenine karşı otoantikor geliştirdiklerini göstermiştir. Değişik tümörlerde anti P-katenin otoantikor yanıtının oranı ve özgünlüğünü belirlemek için ek çalışmaların yapılması gerekmektedir.
Özet (Çeviri)
ABSTRACT PRODUCTION OF RECOMBINANT HUMAN P-CATENIN PROTEIN IN Kcoli AND SCREENING FOR ANTI-p-CATENIN AUTO-ANTIBODIES IN CANCER SERA Nuri Öztûrk M. S in Molecular Biology and Genetics Supervisor Prof. Dr. Mehmet Öztürk July 2000 The p-catenin gene is a component of wnt pathway involved in developmental pattern formation. The protein product is involved in both cell-cell interaction through E- cadherin and gene regulation through Tcf transcription factors. In the absence of wnt signaling, p-catenin protein is degraded actively following phosphorylation of serine/threonine residues at its N-terminal region. In many cancer types (colorectal cancer, hepatocellular carcinoma, hepatoblastoma, melanoma, thyroid cancers...), P- catenin protein accumulates aberrantly due to a loss of active degradation process. In colorectal cancers, this is due to APC mutations, in others p-catenin mutations occur at or around exon 3 leading to a loss of degradation box of the protein product It is believed that accumulated p-catenin protein result in increased cell growth by transcriptional activation of genes such as c-myc and cyclin D. A similar aberration was also observed with p53 gene whose mutations lead to the accumulation of mutant p53 proteins and loss of growth control. In addition, cancer patients expressing mutant p53 protein in their tumor cells develop anti-p53 autoantibodies, as well as cytotoxic T cell (CTL) response. Anti p-catenin CTL response in melanoma patients has been reported, but it is unknown whether cancer patients also develop anti-p-catenin autoantibodies. Our aim was to test whether cancer patients develop anti-P-catenin autoantibodies. For this aim, we first produced an N-terminally truncated recombinant P-catenin protein lacking the first 88 amino acid residues. The corresponding p-catenin cDNA was subcloned into an E. coli expression vector (pQE-32) with a 6xHistidine tag at N-terminus. Affinity purified recombinant p-catenin protein was used as antigen to screen cancer patient and control sera by different immunoassays. Initially, more than 1500 sera were screened by an ELISA method and 53 sera were selected for further studies. The presence of anti-P-catenin autoantibodies was confirmed in 5 patients by western blot assay. All of these sera also reacted with in vitro produced full length catenin protein using immunoprecipitation assay. Five control sera were negative in this sensitive assay. This work demonstrated that some cancer patients develop auto antibodies to P-catenin. Such auto-antibodies may serve as tumor markers for patients displaying P-catenin mutations. Further studies are needed to determine the frequency and the specificity of anti P-catenin autoantibody response in different tumor types. IV
Benzer Tezler
- Rekombinant insan insulin peptidinin bakteriyal ekspresyon sistemi kullanarak üretimi
Expression of recombinant human insulin in bacterial expression systems expression systems
CEREN CAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2015
BiyoteknolojiAnkara ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. EVREN DORUK ENGİN
- Molecular studies on the cloning and expression of human beta interferon gene in E. coli
İnsan beta interferon geninin klonlanması ve E.coli'de ekspresyonu üzerine moleküler çalışmalar
ZALİHE OMAY
Yüksek Lisans
İngilizce
2020
BiyoteknolojiBolu Abant İzzet Baysal ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MEHMET ÖZTÜRK
- Rekombinant insan büyüme hormonunu üretim sistemi ile biyoreaktör işletim koşulları etkileşimi
Interactions of recombinant human growth hormone production system and bioreactor operation conditions
ZÜLBİYE ULUŞAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
BiyomühendislikAnkara ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. TUNÇER H. ÖZDAMAR
- Kontrollü biyoreaktör ortamında üretilecek eksozomlar ile rekombinant Hepatit B aşısının geliştirilmesi ve hepatoselüler karsinoma modelinde denenmesi
Improvement of recombinant Hepatitis B vaccine by exosomes that will be produced in a controlled bioreactor environment and testing in hepatocellular carcinoma model
ILGIN KIMIZ GEBOLOĞLU
Doktora
Türkçe
2023
BiyomühendislikEge ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. SUPHİ ŞURİŞVAN ÖNCEL
- Rekombinant insan interferon gama peptidinin bakteri ekspresyon sistemleri kullanarak üretimi
Expression of recombinant human interferon gamma in bacterial expression systems
PELİN KOLÇAK
Yüksek Lisans
Türkçe
2015
BiyoteknolojiAnkara ÜniversitesiTemel Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. EVREN DORUK ENGİN