Geri Dön

Enhancing radiotherapy efficacy in glioblastoma by inhibiting BRD9

Glioblastoma'da radyoterapi etkinliğini BRD9 inhibisyonu ile artırmak

  1. Tez No: 966547
  2. Yazar: SERDAR AKSEL ÇELİKKOL
  3. Danışmanlar: PROF. DR. TUĞBA BAĞCI ÖNDER
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Moleküler Tıp, Molecular Medicine
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2025
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Koç Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Hücresel ve Moleküler Tıp Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Hücresel ve Moleküler Tıp Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 98

Özet

Glioblastoma (GBM), yüksek heterojenite, invaziv büyüme ve sınırlı tedavi seçenekleri ile karakterize edilen, en agresif ve tedaviye dirençli beyin tümörlerinden biri olmaya devam etmektedir. Cerrahi rezeksiyon, radyoterapi ve temozolomid kemoterapisini (Stupp protokolü) içeren güncel standart tedavilere rağmen, nüks ve direnç hâlâ sıkça görülmektedir. Bu çalışmada, kromatin yeniden şekillenmesi ve transkripsiyonel kontrolle ilişkili bromodomain içeren bir protein olan epigenetik düzenleyici BRD9'u hedefleyerek GBM'de radyoterapiye yanıtı artırmayı amaçladık. U373 ve U87MG hücrelerinde seçici bir inhibitör (I-BRD9) ve CRISPR aracılı BRD9 silinmesini iyonizan radyasyon (IR) ile birleştirdik. BRD9 kaybı hücre canlılığını azalttı ve IR ile kombinasyonda klonojenik sağkalımı daha da düşürdü. Erken kromatin etkilerini değerlendirmek için BRD9 ile ilişkili asetilasyon işaretlerini içeren bir histon Western blot paneli uyguladık ve BRD9 inhibisyonu/knock-out sonrası aktif kromatin imzalarında küresel bir azalma tespit ettik. Bu bulgular, BRD9'un epigenetik manzarayı yeniden şekillendirerek gözlenen radyosensitizasyona katkıda bulunabileceğini gösterdi.BRD9 kaybıyla değişen yolakları ortaya koymak için, iki GBM hücre hattında (U373 ve U87MG) BRD9 inhibisyonu veya genetik silinmeye maruz bırakarak transkriptomik profilleme gerçekleştirdik. BRD9'un aşağı düzenleyici etkisi nedeniyle, çalışmalarımız dört farklı RNA-seq analizinde kesişen ve ekspresyonu azalan genlere odaklandı. Farklı koşullarda ortak olarak 31 genin aşağı regüle edildiği bulundu ve yolak analizi bu genlerin MYC sinyalleşmesi ve translasyon makinesi ile ilişkili olduğunu gösterdi. BRD9 bozulması, translasyon, MYC sinyalleşmesi ve ribozom biyogenezi programlarını sürekli olarak yeniden şekillendirdi; 31 genin çoğu translasyon makinesi ve tRNA aminoaçilasyonu bileşenlerini kodluyordu. Çalışmamızda özellikle aminoaçil-tRNA sentetazları (AARS1, CARS1, GARS1, WARS1, YARS1) ve EIF2S2'ye odaklandık. qPCR, bu hedeflerin koordineli baskılanmasını doğruladı. Mekanistik olarak verilerimiz, aaRS/EIF2S2 ekspresyonunu ve ribozom biyogenezini koordine eden işlevsel bir BRD9–MYC eksenini desteklemektedir. MYC aşırı ekspresyonu, translasyonla ilişkili transkriptleri ve ribozom biyogenezi belirteçlerini geri kazandırarak BRD9 inhibisyonunun etkilerini tersine çevirdi ve bu bağımlılığı pekiştirdi. Buna paralel olarak, ribozom üretimi için gerekli rRNA türlerinin (47S, 28S, 18S, 5.8S, 5S) transkriptleri BRD9 inhibisyonu/knock-out sonrasında azaldı; bu durum epigenetik kaymayla uyumlu olup BRD9'un translasyon kapasitesini sürdürdüğünü destekledi. Tüm bu bulgular, BRD9'un GBM'de kromatin erişilebilirliğini protein sentezi lehine düzenleyen bir epigenetik düzenleyici olduğunu ve hedeflenmesinin translasyon makinesini bozarak radyoterapiye duyarlılığı artırabileceğini göstermektedir. İleriye dönük çalışmalar BRD9 ve MYC'nin genomik bağlanma bölgelerini ve etkileşim ortaklarını ortaya çıkaracak, ayrıca BRD9–MYC–aaRS/EIF2S2 devresinin bozulmasının GBM'yi in vivo koşullarda radyasyona kalıcı olarak duyarlılaştırıp duyarlılaştırmadığını test edecektir.

Özet (Çeviri)

Glioblastoma (GBM) remains one of the most aggressive and treatment-resistant forms of brain cancer, marked by high heterogeneity, invasive growth, and limited therapeutic options. Despite current standard therapies such as surgical resection, radiotherapy, and temozolomide chemotherapy (Stupp protocol), recurrence and resistance are still frequently seen. In this study, we aimed to enhance the radiotherapeutic response in GBM by targeting the epigenetic regulator BRD9, a bromodomain-containing protein implicated in chromatin remodeling and transcriptional control. Using U373 and U87MG cells, we combined a selective inhibitor (I‑BRD9) and CRISPR‑mediated BRD9 knockout with ionizing radiation (IR). BRD9 loss impaired viability and further reduced clonogenic survival in combination with IR. To capture early chromatin effects, we performed a histone Western‑blot panel that included BRD9‑linked acetylation marks, revealing a global reduction in active‑chromatin signatures upon BRD9 inhibition/knockout. These data indicated that BRD9 remodeling the epigenetic landscape may underlie the observed radiosensitization. To uncover the pathways altered by BRD9 loss, we next carried out transcriptomic profiling in two glioblastoma models (U373 and U87MG) exposed either to BRD9 inhibition or genetic knockout. Due to the downregulatory effect of BRD9, our studies focused more on genes with decreased expression that are intersecting in four different RNA sequencings. 31 downregulated genes were common in different conditions, which were linked to MYC signaling and translation machinery as a result of pathway analysis. BRD9 perturbation consistently rewired translation, MYC signaling, and ribosome biogenesis programs, with 31 genes reproducibly downregulated; many encode components of the translational machinery and tRNA aminoacylation. We focused on a MYC‑associated axis involving aminoacyl‑tRNA synthetases (AARS1, CARS1, GARS1, WARS1, YARS1) and EIF2S2. qPCR validated the coordinated suppression of these targets. Mechanistically, our data support a functional BRD9–MYC axis that coordinates aaRS/EIF2S2 expression and ribosome biogenesis. MYC overexpression restored translation‑related transcripts and ribosome‑biogenesis markers, reversing the effects of BRD9 inhibition and reinforcing this dependency. In parallel, transcripts for rRNA species essential to ribosome production (47S, 28S, 18S, 5.8S, 5S) decreased upon BRD9 inhibition/knockout, aligning with the epigenetic shift and supporting a model in which BRD9 sustains translational capacity. Together, these findings nominate BRD9 as an epigenetic regulator that regulates chromatin accessibility for protein synthesis in GBM and suggest that targeting BRD9 can disrupt the translational machinery and enhance radiotherapeutic response. Further studies will elucidate the direct genomic occupancy for BRD9 and MYC while also revealing the interacting partners of BRD9. Moreover, test in vivo whether disrupting the BRD9–MYC–aaRS/EIF2S2 circuit durably sensitizes GBM to radiation.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    903822

    Investigation of the GFPT2 expression in glioblastoma bulk and cancer stem cells and efficacy on macrophage phagocytosis

    Glioblastoma bulk ve kanser kök hücrelerinde GFPT2 ekspresyonunun makrofaj fagositozu üzerindeki etkinliğinin araştirilmasi

    GAMZE GÜRSOY

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2024

    Tıbbi BiyolojiAnkara Üniversitesi

    Kök Hücre ve (Rejeneratif) Yenileyici Tıp Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ASUMAN SUNGUROĞLU

  2. Tez No

    684284

    İnsan glioblastoma U87 hücre hattında piceatannol ve EGFR inhibitörü erlotinib kombinasyonunun hücre proliferasyonu, hücre döngüsü ve apoptoz üzerine etkisi

    The effects of piceatannol and EGFR inhibitor erlotinib combination on cell proliferation, cell cycle and apoptosis in human glioblastoma U87 cell line

    TOURKIAN CHASAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    BiyoteknolojiTrakya Üniversitesi

    Biyoteknoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. OĞUZHAN DOĞANLAR

  3. Tez No

    672718

    Epibrassinolid ve/veya temozolomidin apoptotik etkilerinin temozolomid dirençli LN-18 glioblastoma multiforme hücrelerinde incelenmesi

    Investigation of the apoptotic effects of epibrassinolide and/or temozolomide in temozolomide resistant LN-18 glioblastoma multiforme cells

    EREN YÜKSELOĞLU

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    Morfolojiİstanbul Kültür Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. PINAR OBAKAN YERLİKAYA

  4. Tez No

    911108

    Radyoterapide kullanılan yüksek enerjili X-ışınlarının meme kanseri üzerine olan etkilerinin mikroRNA ifade düzeyinde incelenmesi

    Investigation of the effects of high energy X-rays used in radiotherapy on breast cancer at the level of microRNA expression

    MERVE GİRGİN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    Radyasyon OnkolojisiYıldız Teknik Üniversitesi

    Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. DİLEK BALIK

  5. Tez No

    943653

    LINAC ve CBCT izomerkez karşılaştırmalarında yer çekimi etkisi, optik ve mekanik hataların incelenmesi

    Analysis of gravity, optical and mechanical errors in LINAC and CBCT isocenter alignment

    GÜLİSTAN ASLAN TEMEL

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2025

    Fizik ve Fizik Mühendisliğiİstanbul Aydın Üniversitesi

    Sağlık Fiziği Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ EYLEM GÜLCE ÇOKER

Geri Dön