K562 hücre hattının traıl dirençliliğinde TRAIL-R2 tirozin fosforilasyonunun rolünün incelenmesi
Elucidating the role of TRAIL-R2 tyrosine phosphorylation in mediating trail resistance in the K562 cell line
- Tez No: 969659
- Danışmanlar: DOÇ. DR. SEZİN YAKUT UZUNER
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoloji, Tıbbi Biyoloji, Biology, Medical Biology
- Anahtar Kelimeler: TRAIL-R2, tirozin fosforilasyonu, K562 TRAIL dirençliliği, TRAIL, TRAIL-R2, tyrosine phosphorylation, TRAIL resistance in K562 cells
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Akdeniz Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Tıbbi Genetik Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Amaç: Ölüm reseptörleri, immün sistemin malignant hücreleri elimine etmede kullandığı en önemli silahlardan biridir. TRAIL, reseptörleri aracılığıyla çeşitli insan kanser hücre hatlarında etkin olarak apoptozu tetiklemektedir. Ancak bazı tümör hücrelerinin TRAIL dirençli olması, bazılarınınsa uzun süreli maruz kalım sonucunda TRAIL'e dirençlilik geliştirebilmesi hücrelerin apoptozdan kaçmasına sebep olmaktadır. İnsan KML hücre hattı olan K562 hücreleri, normalde TRAIL dirençli iken, uzun süreli imatinib muamelesi sonucunda TRAIL'e duyarlılık kazanmaktadır. Dolayısıyla TRAIL-R2 dirençliliğinde TRAIL-R2'nin, henüz bilinmeyen bir kinaz tarafından tirozin fosforilasyonu, proliferatif yolakların aktivasyonunda rol oynuyor olabilir. Biz, K562 hücre hattında TRAIL-R2 tirozin fosforilasyonunu, bu fosforilasyonu sağlayan tirozin kinazı ve TRAIL-R2 fosforilasyonunun TRAIL duyarlılığındaki etkilerini açığa çıkarmayı amaçladık. Yöntem: K562 ve HeLa hücre hattındaki TRAIL-R2 tirozin fosforilasyonu ile bu fosforilasyonda rol oynayabilecek kinazların inhibitörleriyle muamele sonrasındaki lizatlarda TRAIL-R2 ve Py20 immünopresipitasyonu sonrasında western blot yöntemi ile, bu inhibitörlerin, sodyum ortavanadatın ve tirozin fosforilasyonunu taklit eden ve önleyen mutantların TRAIL duyarlılığına etkileri ise Resazurin testi ile belirlendi. Bulgular: K562 hücre hatlarında TRAIL-R2 tirozin fosforilasyonu TRAIL muamelesi ile sabit kalmaktadır. TRAIL-R2, c-Src, JAK2 ve Abl ile aynı protein kompleksinde bulunmakta; TRAIL-R2 tirozin fosforilasyonunun Abl kinazına doğrudan bağımlı olmayıp, bu modifikasyonun ağırlıklı olarak JAK2 ve c-Src ailesi tarafından düzenlenmektedir. Imatinib, Dasatinib, Jak inhibitörleri ve PP1 fosforilasyonda belirgin bir azalma sağlarken, Imatinib dirençli hücrelerde Abl aktivitesi oldukça az olup tirozin fosforilasyonu korunmuştur. Ayrıca, Na₃VO₄'ün TRAIL ve Imatinib ile birlikte kullanımı, yabanıl tip hücrelerde hücre ölümünü anlamlı düzeyde artırırken; TRAIL-R2 nakavt hücrelerde bu etki gözlenmemiştir. Sonuç: K562 hücre hattında TRAIL-R2 tirozin fosforilasyonu sürekli olup, Abl'dan ziyade Src ve JAK2 kinazlar tarafından regüle edilmektedir. NA3VO4' ün K562 hücrelerinde toksik etki göstermesinde, TRAIL-R2 ve Abl tirozin kinazı içeren bir mekanizmanın rol oynadığını göstermektedir.
Özet (Çeviri)
Objective: Death receptors are the key mediators used by immune system to eliminate malignant cells. TRAIL, effectively induces apoptosis in various human cancer cells through its receptors. However, TRAIL-resistance in some tumor cells, or development of resistance following prolonged exposure, allow cells to evade apoptosis. K562 cells are normally TRAIL-resistant, but can acquire TRAIL-sensitivity following prolonged treatment with imatinib. Therefore, tyrosine phosphorylation of TRAIL-R2, potentially mediated by an as-yet unidentified kinase, may contribute to the activation of proliferative pathways and TRAIL-resistance. In this study, we aimed to investigate the tyrosine phosphorylation of TRAIL-R2 in K562 cells, to identify the tyrosine kinase responsible, and to evaluate the impact of this phosphorylation on TRAIL sensitivity. Method: TRAIL-R2 tyrosine phosphorylation in K562 and HeLa, and potential associated kinases were assessed through immunoprecipitation using TRAIL-R2 and PY20 antibodies, followed by western blotting. The effects of sodium orthovanadate, inhibitors and TRAIL-R2 mutants mimicking or blocking tyrosine phosphorylation, on TRAIL sensitivity were evaluated via Resazurin assay. Results: TRAIL-R2 tyrosine phosphorylation in K562 cells remained constant upon TRAIL treatment. TRAIL-R2 is found to be part of complexes with c-Src, JAK2, and Abl. However, tyrosine phosphorylation appears to be largely regulated by JAK2 and Src family kinases, rather than directly by Abl. Treatment with imatinib, dasatinib, JAK inhibitors, and PP1 resulted in significant decreased phosphorylation. In contrast, Abl activity was found to be low in imatinib-resistant cells, yet tyrosine phosphorylation of TRAIL-R2 was preserved. Moreover, co-treatment with Na₃VO₄ and TRAIL or imatinib significantly enhanced cell death in wild-type cells, while no such effect was observed in TRAIL-R2 knockout cells. Conclusion: In K562 cells, TRAIL-R2 tyrosine phosphorylation is constitutive, predominantly regulated by Src and JAK2 kinases rather than Abl. The cytotoxic effect of Na₃VO₄ in K562 cells appears to involve mechanism dependent on TRAIL-R2 and Abl tyrosine kinase activity.
Benzer Tezler
- İnsan kemik iliği kaynaklı mezenkimal kök hücrelerin K562 (Kronik myeloid lösemi hücre hattı) hücreleri üzerine sitotoksik ve antiproliferatif etkilerinin araştırılması
Investigation of cytotoxic and anti-proliferative effects of mesenchymal stem cells derived from human bone marrow on K562 (Human chronic myeloid leukemia cell line)cells
BELMA AKPINAR YILMAZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2014
Tıbbi BiyolojiKocaeli ÜniversitesiKök Hücre Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. GÜLÇİN GACAR
- Kanser hücre modeli olarak uyarılmış kanser kök hücre benzeri hücrelerin oluşturulması
Forming of induced cancer stem-like cells as a model of cancer cell
SEVİL GONCA
Yüksek Lisans
Türkçe
2017
GenetikUludağ ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SEZAİ TÜRKEL
PROF. DR. CUMHUR GÜNDÜZ
- Kronik myeloid lösemi kök hücre hattı üretimi
Chronic myeloid leukemia stem cell line production
SİBEL AZİZENUR ÖZTÜRK
- Inertial focusing in curvilinear channels
Dönel kanallarda atalet etkisi ile fokuslama
ARZU ÖZBEY
Doktora
İngilizce
2017
Mekatronik MühendisliğiSabancı ÜniversitesiMekatronik Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ALİ KOŞAR
- Normal ve kanser kromozomlarında histon modifikasyonlarının ı̇mmunfloresan yöntem ile ı̇ncelenmesi
Examination of histone modifications in normal and cancer chromosomes by immunofluorescence method
FARDI MAHMUDZADE
Yüksek Lisans
Türkçe
2024
Genetikİstanbul Üniversitesi-CerrahpaşaTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. YELDA TARKAN ARGÜDEN
PROF. DR. GAMZE TANRIVERDİ