Bacillus subtilis'e ait selülaz geninin klonlanması ve rekombinant sentezi
Cloning and recombinant synthesis of bacillus subtilis cellulas gene
- Tez No: 982966
- Danışmanlar: DOÇ. DR. ERMAN ORYAŞIN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Klonlama, Rekombinant DNA teknolojisi, Cloning, Recombinant DNA technology
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Aydın Adnan Menderes Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Amaç: Selülaz enzimini Rekombinant olarak üretmek. Gereç ve Yöntem: Adnan Menderes Üniversitesi Rekombinant DNA ve Rekombinant Protein Araştırma uygulama Merkezi REDPROM laboratuvarının envanterinde bulunan 12 farklı Bacillus subtilis izolatının gen kaynağı adayı olarak kullanıldı. Spesifik olarak hazırlanan Forward ve Reverse primerler ile PCR yöntemi ile klonlanan selülaz geni yine aynı laboratuvarın envanterinde bulunan Escherichia coli BL21 bakterisine kimyasal transformasyon yöntemi ile aktarıldı. Aktarılma sonrasında kompetent hücreler besiyerinde inkübe edildikten sonra plasmid izolasyonu ile pET30a+ plazmidi izole edildi ve restriksiyon enzimi ile kesilerek spesifik primerler ile PCR işlemine tabi tutuldu. Bu işlemden sonra agaroz jelde görüntüleme yapılarak doğrulanan insert DNA dizi analizi yapmak üzere sekansa gönderildi. DNA sekansı gen bankası ile karşılaştırılıp doğrulandıktan sonra protein üretimi sağlandı ve IMAC ile saflaştırılma işlemi gerçekleştirildi. Saflaştırılan protein SDS-PAGE yöntemi ile görüntülendi. En son işlem olarak, seçilen koloni %1 Kongo kırmızısı içeren Ksilan agar besiyerine ekilerek enzimatik aktivitesi teste tabi tutuldu. Bulgular: Bacillus subtilis izolatlarından iki suşun selülaz genine sahip olduğu PCR yöntemi ile doğrulandı. Ardından transformasyonu gerçekleştirilen inser+pET30a(+) Rekombinant gen içeren transformant E. coli BL21 hücrelerinden DNA izolasyonu sonrası klonlama primerleri ile PCR yapılarak sekans dizisi gen bankası ile karşılaştırılıp doğrulandı. Proteinin saflaştırılması sonrasında SDS-PAGE yöntemi ile beklenen aralıkta bir sonuç alındı ve son olarak aktivite ölçümü gerçekleştirildi. Sonuç: Bu çalışma sonucunda Bacillus subtilis'e ait olan selülaz geni Rekombinant DNA teknolojisi kullanılarak E.coli BL21'e klonlandı. Bu sayede selülazın laboratuvar ortamında büyük ölçekte üretilmesi adına büyük bir adım atılmış oldu.
Özet (Çeviri)
Objective: Recombinant production of cellulase enzyme. Material and Methods: Twelve different Bacillus subtilis isolates in the inventory of the REDPROM laboratory at Adnan Menderes University's Recombinant DNA and Recombinant Protein Research Center were used as candidate gene sources. The cellulase gene, cloned using PCR using specifically prepared forward and reverse primers, was transferred to Escherichia coli BL21 bacteria, also in the inventory of the same laboratory, via chemical transformation. After the transfer, competent cells were incubated in the medium. The pET30a+ plasmid was isolated by plasmid isolation. The insert was digested with restriction enzymes and subjected to PCR using specific primers. After this process, the confirmed insert was visualized on agarose gel and sent for DNA sequencing. After the DNA sequence was compared and confirmed with the Gene Bank, protein production was achieved, and purification was performed using IMAC. The purified protein was visualized by SDS-PAGE. As a final step, the selected colony was cultured on Xylan agar medium containing 1% Congo red and its enzymatic activity was tested. Results: Two strains of Bacillus subtilis isolates were confirmed to possess cellulase genes by PCR. DNA was then isolated from the transformed E. coli BL21 cells containing the insert+pET30a(+) recombinant gene. The sequence was compared with the Gene Bank and confirmed by PCR using cloning primers. Following protein purification, SDS-PAGE yielded results within the expected range, and activity was measured. Conclusion: As a result of this study, the cellulase gene from Bacillus subtilis was cloned into E. coli BL21 using recombinant DNA technology. This marked a major step toward large-scale production of cellulase in a laboratory environment.
Benzer Tezler
- Termofilik Bacillus licheniformis KG9'a ait ß-galaktosidaz geninin Escherichia coli'ye aktarılması ve enzimin karakterizasyonu
Cloning of ß-galaktosidase gene of thermophilic Bacillus licheniformis KG9 to Escherichia coli and its characterization
FATMA MATPAN BEKLER
- Bacillus subtilis'e ait selülaz genlerinin e.coli'de klonlanması
Cloning of Bacillus subtilis cellulase genes in e.coli
BAHRİ DEVRİM ÖZCAN
- Nanokristal selüloz ve lignin katkılı polilaktik asit esaslı tek ve iki katmanlı aktif gıda ambalaj filmlerinin geliştirilmesi ve karakterizasyonu
Development and characterization of polylactic acid based mono- and bilayer active food packaging films incorporated with nanocrystalline cellulose and lignin
EZGİ İNAL
Yüksek Lisans
Türkçe
2026
Gıda MühendisliğiSakarya ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ZEHRA AYHAN
- Mikrobiyal kaynaklı selülaz enziminin E.coli'de rekombinant olarak üretilmesi
Expression of recombinant microbial cellulase in E.coli
HÜLYA KUDUĞ
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
BiyomühendislikGaziosmanpaşa ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İSA GÖKÇE
- Balıklarda probiyotik olarak kullanılabilecek bakterilerin toprak solucanından izolasyonu ve enzim üreten bakterilerin kısmi karakterizasyonu
Isolation and partial characterization of enzyme producing bacteria from earthworm for potential use as probiotics in fish
BERİTAN BATUR
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
BiyoteknolojiÇukurova ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ FATMAGÜN AYDIN