Tiroid kanser hücre hattında kollajenazların lokalizasyonunun ve aktivitesinin belirlenmesi amacıyla in situ kollajen zimografi yönteminin geliştirilmesi
Development of in situ collagen zymography method to determine localization and activity of collagenases in thyroid cancer cell line
- Tez No: 984585
- Danışmanlar: PROF. DR. GÜLGÜN OKTAY
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2022
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Dokuz Eylül Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Tiroid kanseri en sık görülen ve görülme sıklığı her geçen gün artan endokrin kanserdir. Tiroid ve diğer kanserlerin tanı ve tedavilerinin doğru uygulanabilmesi için pek çok çalışma yapılmaktadır. Yapılan çalışmalardan elde edilen bilgilere göre matriks metalloproteinazlar (MMP) ailesine ait olan kollajenazların (MMP-1, -8 ve -13) tümör oluşumu, invazyonu, metastazı ve kemoterapötik ajana karşı direnç oluşumu gibi kanser üzerindeki etkileri bulunmuştur. Bunun sonucunda da tümör mikroçevresi kanser çalışmalarında yeni odak noktası haline gelmiştir. Kollajenazların analizinde kollajen jel zimografi ve in situ kollajen zimografi gibi yöntemler kullanılmaktadır. Her iki yöntemin de kendi aralarında avantajları ve dezavantajları bulunmaktadır. Kollajen jel zimografi ile kollajenazlar ayrı ayrı analiz edilebilir, fakat ölçülen aktivite değeri fizyolojik aktivite değil kollajenazların potansiyel aktivitelerini gösterir. Bunun yanında hücre veya doku içerisindeki konumları hakkında bilgi vermez. In situ kollajen zimografi ise kollajenazların sadece doku örneği içerisindeki lokasyonlarının belirlenmesine ve fizyolojik aktivitelerinin semi-kantitatif olarak ölçülmesine olanak tanır. Ayrıca MMP'lerin birden fazla substratı degrade edebilmesinden ötürü bu yöntemde substrat spesifikliği sağlanamaz ve substratı degrade eden tüm enzimler sinyal oluşturur. Bu çalışmanın amacı; çinko, metanol ve etanol fiksasyonunun etkilerini tiroid kanser hücre hattı üzerinde belirlemek, kollajenazların (MMP-1, -8, -13) totalaktivitelerini ve lokalizasyonlarını analiz etmek üzere“hücre in situ kollajen zimografi”yöntemini geliştirmek ve MMP-1, -8 ve -13'ün bireysel lokal aktivitelerini immünositokimyasal yöntemler ve seçici inhibisyon ile mikroskobik olarak analiz etmektir. Çalışma ticari olarak satın alınan 8505C anaplastik tiroid kanser ve Nthy-ori 3-1 normal tiroid hücrelerinde gerçekleştirildi. 8505C tiroid kanser hücre hattı ilk olarak çinko, metanol ve etanol ile fikse edildi. Çalışmaya devam edilecek fiksasyon tipi floresans mikroskopi görüntülerine göre belirlendi. Bunun ardından floresans mikroskopi ile kollajenazların lokal aktiviteleri analiz edildi. Kollajenazların bireysel lokal aktiviteleri immünohistokimyasal yöntemler ve seçici inhibisyon ile ölçüldü.“Hücre in situ kollajen zimografi”yönteminde kullanılmak üzere metanol fiksasyonu ve sandviç model kollajen jelin uygun olduğu gözlendi. 8505C hücre hattında MMP-13 protein düzeylerinin çok düşük olduğu belirlendi. MMP-1 ve MMP-8'in hücre içi lokasyonları ve uygulanan seçici inhibitörler ile inhibisyon yüzdeleri belirlendi. Kollajenazların lokal aktivitelerinin ayrı ayrı dedeksiyonunu sağlayan“Hücre in situ kollajen zimografi”yöntemi geliştirildi ve 96 kuyucuklu plakaya uyarlandı.
Özet (Çeviri)
Thyroid cancer is the most common endocrine cancer and its incidence is increasing day by day. Many studies are carried out to ensure the correct diagnosis and treatment of thyroid and other cancers. According to the knowledge obtained from the studies conducted, collagenases (MMP-1, -8 and -13) belonging to the matrix metalloproteinases (MMP) family, influence cancer such as tumor formation, invasion, metastasis and resistance to chemotherapeutic agents. As a result, the tumor microenvironment has become the new focus in cancer studies. Methods such as collagen gel zymography and in situ collagen zymography are used in the analysis of collagenases. Both methods have advantages and disadvantages among themselves. Collagenases can be analysed individually with collagen gel zymography, but the measured activity value indicates the potential activities of collagenases, not physiological activity. In addition, it does not give information about their location in the cell or tissue. In situ collagen zymography only allows determination of the location of collagenases in the tissue sample and semi-quantitative measurement of their physiological activities. Also, since MMPs can degrade more than one substrate, substrate specificity cannot be achieved in this method and all enzymes that degrade the substrate generate signals. The aim of this study is determining the effects of zinc, methanol and ethanol fixation on tyroid cancer cell line, developing“cell in situ collagen zymography”technique to analyse total activities and localizations of collagenases (MMP-1, -8, -13) and analysing the individual local activities of MMP-1, MMP-8 and MMP-13 microscopically with immunocytochemical methods and selective inhibition. The study was performed on a commercially purchased 8505C thyroid cancer cells and Nthy-ori 3-1 normal thyroid cells. The 8505C thyroid cancer cell line was first fixed with zinc, methanol and ethanol. The fixation type to be continued to be studied was determined according to fluorescence microscopy images. Subsequently, local activities of collagenases were analyzed by fluorescence microscopy. The individual local activities of collagenases were measured by immunohistochemical methods and selective inhibition. It was observed that methanol fixation and sandwich model collagen gel were suitable for use in the“cell in situ collagen zymography”method. It was determined that MMP-13 protein levels were very low in the 8505C cell line. The intracellular locations of MMP-1 and MMP-8 and the percentages of inhibition with the applied selective inhibitors were determined. The“cell in situ collagen zymography”method, which enables the individual detection of local activities of collagenases, was developed and adapted to a 96-well plate.
Benzer Tezler
- Anaplastik tiroid kanseri hücre hattında BIBR1532 ajanı ile telomeraz inhibisyonunun anti-kanser etkinliğinin araştırılması
Investigation of the anti-cancer effectiveness of telomerase inhibition with BİBR1532 agent in anaplastic thyroid cancer cell line
ECEM TÜRKMEN
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
Tıbbi BiyolojiEge ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ÇIĞIR BİRAY AVCI
- Tiroid kanser hücre hatları ve normal tiroid hücre hattının karşılaştırmalı morfolojik analizi
A comparative morphological analysis of thyroid cancer cell lines and normal thyroid cell line
HATİCE ÖZIŞIK
Doktora
Türkçe
2024
Endokrinoloji ve Metabolizma HastalıklarıEge ÜniversitesiKök Hücre Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HÜSEYİN AKTUĞ
- Selektif RXR ligandı Beksaroten'in Tiroid kanser hücre hatları üzerine etkinliğinin incelenmesi
İnvestigation on the effects of selective RXR ligand Bexarotene on Thyroid cancer cell lines
PINAR DAŞIYICI
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
Moleküler TıpDokuz Eylül ÜniversitesiMoleküler Tıp Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. HİLAL KOÇDOR
- Tiroid kanseri hücre hatlarında circptpn22'nin ekspresyonunun araştırılması
Investigation of the expression of circptpn22 in thyroid cancer cell lines
MADINA ALIYEVA
Yüksek Lisans
Türkçe
2025
Endokrinoloji ve Metabolizma HastalıklarıBursa Uludağ ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ ELİF UZ YILDIRIM
PROF. BALA GÜR DEDEOĞLU
- Tetrahidrocurcumin'in (THC) anaplastik tiroid kanserinde doxorubicine ve paclitaksel direnç mekanizmalarına anti-kanser parametrelere etkinliğinin incelenmesi
Investigation of the effectiveness of tetrahydrocurcumin (THC) on doxorubicine and paclitaksel resistance mechanisms and anti-cancer parameters in anaplastic thyroid cancer
MEHMET ALİ KOÇDOR