İnsan göbek kordonu stromasında telosit benzeri hücrelerin tanımlanması
Identification of telocyte-like cells in the stroma of the human umbilical cord
- Tez No: 986984
- Danışmanlar: PROF. DR. ALP CAN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Histoloji ve Embriyoloji, Histology and Embryology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ankara Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Bu çalışmada, insan göbek kordonu stromasında, mezenkimal stroma hücreleri (MSH) dışında, daha önce farklı organlarda tanımlanmış interstisiyel hücre türü olan telositlerin varlığı araştırılmıştır. Telositler, uzun ve ince uzantılarıyla, hücreler arası iletişim ve doku organizasyonunda rol oynadığı düşünülen hücrelerdir. Göbek kordonu stromasında bu hücrelerin varlığının saptanması, hem kök hücre nişinin daha iyi anlaşılmasına hem de yenileyici tıpta potansiyel hedeflerin tanımlanmasına olanak sağlayabilir. Bu bağlamda; telosit benzeri hücreler, daha önceki çalışmalarda tanımlanmış özgün moleküler belirteçler ve iyi tanımlanmış MSH belirteçleriyle karşılaştırmalı olarak analiz edilmiştir. Araştırmada, sağlıklı sezaryen doğumlardan elde edilen 16 göbek kordonu örneği kullanılmış; doku kesitleri rutin histolojik boyamaların yanı sıra, moleküler işaretlenerek süper çözünürlüklü konfokal mikroskobu, ince kesitler geçirimli elektron mikroskobu (TEM) ile incelenmiştir. Göbek kordonu örneklerinin hücre kültürleri yapılmış; akım sitometri deneyleri gerçekleştirilmiş, ayrıca hücreler moleküler işaretlenerek süper çözünürlüklü konfokal mikroskobunda ve taramalı elektron mikroskobunda (SEM) incelenmiştir. Rutin histolojik incelemeler sonucu elde edilen bulgular; ince ve uzun sitoplazmalı telosit benzeri hücrelerin özellikle yüzeyel intervasküler stromada (İVS) ceplerin etrafında ve perivasküler stromada (PVS) yoğunlaştığını göstermiştir. İnce kesitler TEM'de incelendiğinde yoğun kollajen sentezleyen daha geniş ve küçük sitoplazmalı stroma hücrelerinin yanı sıra çok ince ve uzun sitoplazmalı telosit benzeri hücreler izlenmiştir. Hücre kültürü işlemleri sonrasında iki farklı hücre popülasyonunun büyüme dinamiklerinin de birbirlerinden farklı olduğu ve özellikle SEM'de yapılan gözlemlerle hücrelerin birbirleriyle ve kendi aralarında temas edebildiği bulunmuştur. İnce uzantılı telosit benzeri hücreleri floresan ile aktive edilmiş hücre ayrıştırma (FACS) yöntemi ile ayrıştırarak alt kültürlerini yapmak amacıyla literatürde telosit belirteçleri olarak yer alan CD34, PDGFR-α ve c-Kit işaretlemeleri akım sitometri deneylerinde tek ve ikili olarak kullanılmış; fakat anlamlı sayıda pozitif hücre elde edilememiştir. Göbek kordonu kesitlerinin ve kültür hücrelerinin süper çözünürlüklü konfokal mikroskobu gözlemlerinde ise hücreler güçlü vimentin ve F-aktin pozitif izlenirken farklı yoğunluklarda α-SMA (α-düz kas aktini), α-aktinin ve sitokeratin pozitif izlenmiştir. MSH belirteçleri hem daha geniş ve küçük sitoplazmalı hem de ince ve uzun sitoplazmalı telosit benzeri hücrelerde pozitif bulunmuştur. Telosit hücre belirteçlerinden CD34 göbek kordonu kesitlerinde oldukça zayıf pozitiflik gösterirken kültür hücrelerinde negatif bulunmuştur. PDGFR-α (Trombosit Kaynaklı Büyüme Faktörü Reseptörü-α) kesitlerde özellikle yüzeyel İVS'deki ceplerin etrafındaki ince ve uzun sitoplazmalı telosit benzeri hücrelerde ve kültürdeki ince ve uzun sitoplazmalı hücrelerin de uzantılarında pozitif izlenirken; c-Kit ise hücre zarı ve sitoplazmada noktasal pozitif izlenmiştir. Son olarak caveolin-1 daha geniş ve küçük sitoplazmalı stroma hücrelerinde ve ince ve uzun sitoplazmalı telosit benzeri hücrelerde farklı yoğunluklarda ifadeye sahip bulunmuştur ve pozitifliğinin de Golgi aygıtı ve endoplazma retikulumu (ER) ilişkili olduğu izlenmiştir. Ayrıca sonuçlar qRT-PCR ile doğrulanmıştır. Elde edilen bulgular, insan göbek kordonu stromasında telosit benzeri hücrelerin ilk kez tanımlanmasıyla literatüre bir katkı sunmakta ve kök hücre mikronişinin hücre çeşitliliğine ışık tutmaktayız. Aynı zamanda, MSH'ne eşlik eden yeni bir hücre tipinin varlığı, mikroçevrenin potansiyel biyolojik rollerini yeniden değerlendirme gerekliliğini gündeme getirmektedir.
Özet (Çeviri)
In this study, the presence of telocytes –an interstitial cell type previously identified in various organs– was investigated in the stroma of the human umbilical cord, alongside mesenchymal stromal cells (MSCs). Telocytes are characterized by their long and slender extensions and are thought to play a role in intercellular communication and tissue organization. Identifying the presence of these cells in umbilical cord stroma could contribute to a better understanding of the stem cell niche and aid in the identification of potential targets in regenerative medicine. In this context, telocyte-like cells were analyzed in comparison with unique molecular markers identified in previous studies and well-established MSC markers. In this study, 16 umbilical cord samples obtained from healthy cesarean deliveries were used. Tissue sections were examined through routine histological staining, as well as with molecular markers using super-resolution confocal microscopy and ultrathin sections with transmission electron microscopy (TEM). Cell cultures were established from the umbilical cord samples; flow cytometry analyses were conducted, and molecularly labeled cells were further examined under super-resolution confocal and scanning electron microscopy (SEM). The findings of routine histologic examinations showed that telocyte-like cells with thin and long extensions were concentrated around stromal clefts in the superficial intervascular stroma (IVS) and in the perivascular stroma (PVS). When thin and long sections were examined in TEM, stromal cells with larger and smaller cytoplasm synthesizing dense collagen as well as telocyte-like cells with very thin and long extensions were found. Following cell culture, differences in the growth dynamics of these two populations were observed. SEM analysis indicated that these cells were capable of forming contacts with each other and within their own populations. To isolate and subculture fine-extended telocyte-like cells using fluorescence activated cell sorting (FACS), single and double staining for telocyte markers described in the literature –CD34, PDGFR-α, and c-Kit– was performed in flow cytometry, however, a significant number of positive cells could not be obtained. In super-resolution confocal microscopy observations of both cryosections and cultured cells, strong positivity for vimentin and F-actin was noted, along with varying intensity levels of α-SMA (α-smooth muscle actin), α-actinin, and cytokeratin. MSC markers were positive in both stromal cells with larger and small cytoplasm and telocyte-like cells with thin and long extensions. CD34, a telocyte cell marker, was weakly positive in umbilical cord cryosections and negative in cultured cells. PDGFR-α (Platelet Derived Growth Factor Receptor-α) was positive in cryosections, especially in telocyte-like cells with thin and long extensions around the stromal clefts in the superficial IVS and in the extensions of the cells with thin and long extensions in culture, while c-Kit exhibited punctate positivity in the cell membrane and cytoplasm. Finally, caveolin-1 was found to be expressed at different intensities in stromal cells with larger and smaller cytoplasm and in telocyte-like cells with thin extensions, and its positivity was associated with the Golgi apparatus and endoplasmic reticulum (ER). Furthermore, the results were validated by qRT-PCR. As a result of the findings, the study makes a unique contribution to the literature in terms of the first identification of telocyte-like cells in human umbilical cord stroma and sheds light on the cell diversity of stem cell microniches. At the same time, the presence of a new cell type accompanying MSC raises the need to re-evaluate the potential biological roles of the microenvironment.
Benzer Tezler
- Kök hücrelerinin ileri/geri farklanma aşamalarında hücresel karakterinin belirlenmesi
Cellular characterization of stem cells during differentiation/dedifferentiation
SERÇİN KARAHÜSEYİNOĞLU
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2006
MorfolojiAnkara ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
PROF.DR. ESRA ERDEMLİ
- İnsan göbek kordonu stroması kaynaklı kök hücrelerin in vitro koşullarda gerçekleştirdiği hücresel dönüşümün epitel mezenkim geçişi çerçevesinde değerlendirilmesi
The assessment of cellular transformation in view of epithelial-mesenchymal transition of human umbilical cord-derived stromal stem cells upon in vitro culture conditions
HAKAN COŞKUN
- İnsan göbek kordonu endotel hücre kültüründe anjiyotensin-II AT1 reseptör antagonistlerinin anjiyotensin-II'ye bağlı apoptoza etkisi
Effects of losartan and superoxide dismutase on ANG II induced apoptosis in human umblical vein endothelial cells
VEDAT ÇİMEN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2002
Fizyolojiİstanbul ÜniversitesiFizyoloji Ana Bilim Dalı
PROF.DR. ZEYNEP SOLAKOĞLU
- İnsan göbek kordonu stroma dokusunun kök hücresi transplantasyonları amacıyla kullanılmak üzere kontrollü dondurulması koşullarının belirlenmesi
The assessment of the controlled cryopreservation conditions of human umbilical cord stroma with a potential usage for stem cell transplantations
DENİZ BALCI
Yüksek Lisans
Türkçe
2009
BiyoteknolojiAnkara ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ALP CAN
- İnsan göbek kordonu stroması mezenkimal kök hücrelerinden mitokondri izolasyonu ve saklama koşullarının optimize edilmesi
Optimizing the isolation and storage conditions of mitochondria from human umbilical cord stroma mesenchymal stem cells
FATIMA ELMUSA
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
BiyoteknolojiAnkara ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ DURU ARAS TOSUN
ÖĞR. GÖR. MOHAMMADREZA DASTOURI