Tahin ve fındık ezmesinde aflatoksinlerin yüksek basınçlı sıvı kromatografisi (HPLC) florimetre ve enzimle etiketli immunolojik tayin (ELISA) yöntemleri ile analizi
The Analysis of aflatoxins in tahini and Hazelnut paste by high performance liquid chromatography (HPLC), fluorometer and enzme linked immonosorbent assay (ELISA)
- Tez No: 101154
- Danışmanlar: DOÇ.DR. DİLEK BOYACIOĞLU
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Gıda Mühendisliği, Food Engineering
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2000
- Dil: Türkçe
- Üniversite: İstanbul Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 109
Özet
TAHİN VE FINDIK EZMESİNDE AFLATOKSİNLERİN YÜKSEK BASINÇLI SIVI KROMATOGRAFİSİ (HPLC), FLORİMETRE VE ENZİMLE ETİKETLİ İMMÜNOLOJİK TAYİN (ELISA) YÖNTEMLERİ İLE ANALİZİ ÖZET Aspergillus flavus ve A. parasiticus küflerinin oluşturduğu kanserojen metabolitler olan aflatoksinler, Bı, Gı, B2 ve G2 türleri ile özellikle yağ ve karbonhidrat içeriği yüksek; fıstık, fındık gibi yağlı kuruyemişler ve ürünleri, mısır, kuru meyveler ve baharatlar gibi gıdalarda risk oluşturmaktadırlar. Gıdaların aflatoksinler ile kontaminasyonu belirli tolerans değerleri ile kontrol edilmektedir. Bu toksik bileşiklerin gıdalarda sınır değerlerden yüksek düzeylerde bulunması, hem insan sağlığına olan etkileri açısından, hem de ihraç edilen ürünün iade edilmesinden ötürü ekonomik açıdan sorunlar yaratmaktadır. Aflatoksin sorununun yıldan yıla mevsimsel farklılıklara bağlı olarak değişmesi ve beklenmedik zamanlarda ortaya çıkması, riskli gıdaların rutin olarak kontrol edilmesi gerekliliğini doğurmuştur. Aflatoksinlerin tarımsal ürünlerde milyarda bir kısım (ppb) konsantrasyonlarında bulunmaları duyarlı ve doğru sonuç veren metotların geliştirilmesini zorunlu kılmıştır. Yasal olarak belirlenen limit değerlere uygunluğun tespiti, doğruluğu ve kesinliği yüksek, onaylanmış analitik yöntemler ile mümkündür. Aflatoksin tayin yöntemlerinin performanslarının, analizlenen gıda yapısından etkilenmesi nedeniyle yöntemlerin her gıda grubu için uygulanabilirliğinin araştırılması gerekmektedir. Aflatoksin analizlerinde genel eğilim hızlı, doğru, basit, spesifik yöntemlere doğrudur. Dünyada 1990'lı yıllardan bu yana kullanım bulan immünolojik yöntemler, bazı gıda grupları için resmi metot olarak kabul görürken, daha birçok gıda grubu için uygunluklarına dair çalışmaların sürdürülmesi ve yöntemlerin birbirleriyle ilişkilerinin saptanması gerekmektedir. Bu amaçla; ülkemize özgü gıda ürünleri olan tahin ve fındık ezmesinde aflatoksin analizleri, yüksek basınçlı sıvı kromatografisi (HPLC), florimetre ve enzimle etiketli immünolojik tayin (ELISA) yöntemleri ile yapılmıştır. HPLC ve florimetre yönteminde saflaştırma ve temizleme işlemleri immünolojik yöntemlerden olan immunoafinite kolon (Vicam Aflatest) kullanılmak suretiyle gerçekleştirilmiştir. ELISA yönteminde Neogen firmasının Veratox toplam aflatoksin kiti kullanılmıştır. Bu üç yöntem doğruluk, kesinlik, basitlik, süre, kullanım kolaylığı gibi faktörler açısından incelenmiş ve metotlar arası ilişkiler saptanmıştır.Tahin ve fındık ezmesi numuneleri, yüksek miktarlarda yağ içerikleri nedeniyle, aflatoksin analizlerinde kritik bir aşama olan ekstrakt saflaştırma işlemi zor olan ürünlerdir. Hammaddeleri, aflatoksin açısından riskli gıda grupları içerisinde yer alan bu ürünler için aflatoksin analizi çalışması mevcut literatürde bulunamamıştır. Çalışmada kullanılan metotların doğruluğu ve kesinliğini ölçebilmek amacıyla; numunelere 10:3:10:3 oranlarında standart aflatoksin Bı, B2, Gı ve G2 içeren çalışma çözeltisinden, numunede 6.5, 13.0 ve 19.5 ug/kg (ppb) düzeyleri elde edilecek şekilde eklenmiştir. Ekstraksiyondan gelebilecek hataları engellemek amacıyla aym ekstrakt kısımlara ayrılarak üç yöntem ile analizlenmiştir. Her üç analiz yöntemi ile analizlenen numunelerden elde edilen sonuçlar, SPSS programı ile istatistiksel olarak değerlendirilmiştir. Metotlar arası farklılık tek yollu varyans analizi ile değerlendirilirken, varyans analizi sonucunda istatistiksel olarak önemli derecede farklılık bulunan yöntemlerin ortalama değerleri, Duncan Yeni Çoklu Aralık Testi ile analizlenmiştir. Tahin ve fındık ezmesi numunelerinde HPLC yöntemi, florimetrik yöntem ve ELISA yöntemi verileri arasında basit lineer regresyon analizi uygulanmıştır. Tahin ve fındık ezmesi numuneleri arasında bu üç analiz yöntemi için farklılıklar eşli karşılaştırmalar ile t-testi yapılarak analizlenmiştir. Çalışma sonucunda tahin numunesinde HPLC tayin yöntemi için elde edilen analiz verileri Tablo l'de, fındık ezmesi için elde edilen veriler Tablo 2'de, her iki numunenin toplam aflatoksin miktarlarını gösteren florimetrik tayin verileri Tablo 3'de, ELISA tayini verileri Tablo 4'de görülmektedir. Tahin numunesi için HPLC yönteminde toplam aflatoksin sonuçlarındaki % geri kazanım değerleri % 62.7-78.1, % varyasyon katsayıları ise % 3.17-20.77 aralığındadır. Fındık ezmesi için ise; % geri kazanım değerleri % 64.4-79.9 ve % varyasyon katsayıları % 3.90-28.85 arasında değişim göstermiştir. Tablo 1. Üç farklı konsantrasyonda aflatoksin Bı, B2, Gı ve G2 (10:3:10:3) aşılanan tahin numunelerinin HPLC sonuçları a 1 İki kez enjeksiyon ile elde edilen sonuçların ortalaması. b Aflatoksin Bı için HPLC de tayin limiti (ppb) ' Aflatoksin Eh için HPLC de tayin limiti (ppb) * Aflatoksin G1 için HPLC de tayin limiti (ppb) * Aflatoksin G2 için HPLC de tayin limiti (ppb) fToplam aflatoksin için HPLC de tayin limiti (ppb) XITablo 2. Üç farklı konsantrasyonda aflatoksin Bı, B2, Gı ve G2 (10:3:10:3) aşılanan fındık ezmesi numunelerinin HPLC sonuçlan a * İki kez enjeksiyon ile elde edilen sonuçların ortalaması. b Aflatoksin B, için HPLC de tayin limiti (ppb) c Aflatoksin B2 için HPLC de tayin limiti (ppb) " Aflatoksin d için HPLC de tayin limiti (ppb) * Aflatoksin G2 için HPLC de tayin limiti (ppb) fToplam aflatoksin için HPLC de tayin limiti (ppb) Florimetre yöntemi sonuçlarındaki % geri kazanım değerleri, tahin numunesi için %128.2-133.3, % varyasyon katsayıları ise % 2.57-21.84 aralığında bulunurken, fındık ezmesi analizleri için % geri kazanım değerleri % 107.7-155.1 ve % varyasyon katsayıları % 9.39-21.53 aralığında değişmiştir. Tablo 3. Üç farklı konsantrasyonda aflatoksin aşılanan tahin ve fındık ezmesi numunelerinin Florimetre sonuçları ELISA yöntemi sonuçlarındaki % geri kazanım değerleri, tahin numunesi için %145.6-161.4, % varyasyon katsayıları ise % 27.16-39.94 aralığında bulunurken fındık ezmesi analizleri için % geri kazanım değerleri % 38.2-95.9 ve % varyasyon katsayıları % 48.16-83.90 arasında oldukça fazla bir değişkenlik göstermiştir. XIITablo 4. Üç farklı konsantrasyonda aflatoksin aşılanan tahin ve fındık ezmesi numunelerinin ELISA sonuçları Elde edilen sonuçlar değerlendirildiğinde, tahin ve fındık numunesinin analizinde kullanılan üç farklı aflatoksin analiz metodunun aralarında istatistiksel açıdan önemli bir farklılık bulunmuştur (P^ 0.05). Doğruluk ve kesinlik açısından HPLC yöntemi üstün bulunurken, ELISA yöntemi her iki numunedeki yüksek varyasyonu ile dikkat çekmiştir. HPLC-florimetre yöntemleri arasındaki regresyon, analizlenen her iki numune için istatistiksel açıdan önemlidir (P^ 0.05). Yalnızca ELISA yöntemi, % 95 güven aralığında, toplam aflatoksin konsantrasyonu ve geri kazanım değerleri açısından tahin ve fındık ezmesi numunelerinde farklı sonuç vermiştir. HPLC ile ilişkili sonuçlan nedeniyle afinite kolon sonrası florimetre ile analiz yönteminin, toplam aflatoksin kontaminasyonunun tahminlenmesi için kullanılması uygun bulunmuştur. Afinite kolon sonrası HPLC yöntemi aflatoksinlerin her birini yüksek doğruluk ile belirleyebilmekte, ancak yüksek maliyeti ve yetişmiş eleman ihtiyacı nedeniyle kullanımı sınırlı olmaktadır. ELISA yöntemi ise gıda yapılarına göre farklık göstermesi ve yüksek varyasyon nedenleriyle genel bir eleme yöntemi olarak kullanılabileceği sonucuna varılmıştır. Ayrıca, ülkemizde üretilen 14 ticari firmaya ait tahin numunesinde genel anlamda aflatoksin riskini belirleyebilmek için, immunoafinite kolon ile saflaştırma ve temizleme sonrası HPLC ile analiz yöntemi kullanılarak aflatoksin tarama çalışması gerçekleştirilmiştir. Analizlenen 14 tahin numunesinin yalnızca birinde, insanlarda ciddi sağlık sorunları yaratabilecek düzeyde aflatoksin (toplam 175 ppb) tahminlenmiştir. Susam içeren ürünlerin tümünde aflatoksin kontrollerinin ciddi bir şekilde yapılması gerekliliği vardır. X1I1
Özet (Çeviri)
THE ANALYSIS OF AFLATOXINS IN TAHİNİ AND HAZELNUT PASTE BY HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (HPLC), FLUOROMETRY AND ENZYME LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY (ELISA) SUMMARY Aflatoxins Bı, Gı, B2, and G2 which are the secondary metabolites of the molds Aspergillus flavus and Aspergillus parasiticus produce great risk by contaminating a wide variety of agricultural commodities and food products, especially having high carbohydrate and fat contents, such as nuts and nut products (peanuts, pistachio, hazelnut etc.), corn, dried fruits and spices. The aflatoxin contamination of foods is regulated through tolerance levels by national and international authorities. The higher levels of those toxic compounds have an adverse effect on human health and also on for the economics as the exported goods may be rejected by importer countries. The unexpected occurrence and the variation of the contamination level of aflatoxin depending on the local climatic differences required the routine control of the susceptible commodities. The occurrence of aflatoxins in food commodities at parts per billion (ppb) levels demands the development of both sensitive and accurate analytical methods. Low legal limits can only be determined by validated methods which have high repeatability and reproducibility values. The applicability of the analytical method to each food commodity should be evaluated since the efficiency of methods highly depends on the food matrix. In recent years there is an increase in demand for simple, quick, accurate, and specific methods for the determination of aflatoxins. The immunological methods, that are being used since 1990's, are accepted as official methods for some food commodities, however, it is still necessary to evaluate their efficiency in different foodstuffs and to correlate their results with those of other analytical methods. The objective of this study was to analyze aflatoxins in tahini (sesame paste) and hazelnut paste, which are the Turkish special foods, by high performance liquid chromatography (HPLC), fluorometer and enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) methods. Immunoaffinity column (Vicam Aflatest), which is also an immunological method, was used to clean-up and purify extracts prior to HPLC and fluorometer methods. Veratox kits of Neogen was used as ELISA method. Correlations of three aflatoxin analytical methods were determined and methods were evaluated by considering accuracy, precision, simplicity, analysis time and the ease of use. XIVClean-up and purification procedures which are very critical steps in aflatoxin analysis, are difficult in tahini and hazelnut paste due to their high fat contents. There is no available literature related to aflatoxin contamination for these products of which have raw materials possessing high aflatoxin risk. In order to determine the accuracy and precision of the methods performed, samples were spiked at 6.5, 13.0, 19.5 ug / kg (ppb) levels with mixed aflatoxin standard solutions of Bi, B2, Gi and G2 at a ratio of 10:3:10:3, respectively. To eliminate the errors from the extraction step, the same extract was divided into three parts and each part was analyzed by each method. The results of both samples obtained from three different analytical methods were evaluated statistically by the SPSS software program. Difference between methods was determined by one way ANOVA experimental design where the variance component was accepted as the concentration of aflatoxins. Significant differences were analyzed by comparing the mean values using Duncan's New Multiple Range Test. A simple linear regression analysis was performed between the results of HPLC, Fluorometer and EL1SA methods for each type of samples, tahini and hazelnut paste. The results of each analytical method were also analyzed for differences in tahini and hazelnut paste samples using t-test. The results of the HPLC method for tahini and hazelnut paste are given in Table 1 and Table 2, respectively. The total aflatoxin levels of both samples measured by fluorometer is given in Table 3 and by ELISA in Table 4. Table 1. The HPLC results of tahini samples spiked with three different levels of aflatoxins B,, B2, G, and G2 (10:3:10:3) a a The average of two injections.“Detection limit of HPLC for aflatoxin B, (ppb) * Detection limit of HPLC for aflatoxin Gi (ppb) 'Detection limit of HPLC for total aflatoxins (ppb) c Detection limit of HPLC for aflatoxin B2 (ppb) e Detection limit of HPLC for aflatoxin G2 (ppb) For the HPLC analysis of tahini sample; recovery percentage of total aflatoxins was found to be between 62.7-78.1 % and the coefficient of variation was found to be in the range of 3.17-20.77 %. Whereas, in hazelnut paste samples; recovery % changed from 64.4 to 79.9 % and the coefficient of variation from 3.90 to 28.85 %. XVFluorometer analysis of tahini had recovery values of 128.2-133.3 % and coefficient of variations of 2.57-21.84 %. For hazelnut paste, 107.7-155.1 % recovery and 9.39- 21.53 % coefficient of variation values were obtained. Table 2.The HPLC results of hazelnut paste samples spiked with three different levels of aflatoxins B|, B2, Gi and G2 (10:3:10:3) a ”The average of two injections. "Detection limit of HPLC for aflatoxin Bi (ppb) i Detection limit of HPLC for aflatoxin G, (ppb) detection limit of HPLC for total aflatoxins (ppb) ! Detection limit of HPLC for aflatoxin B2 (ppb) 'Detection limit of HPLC for aflatoxin G2 (ppb) Table 3. The Fluorometer results of tahini and hazelnut paste samples spiked with three different levels of aflatoxins. For the ELISA analysis of tahini sample; recovery percentage was between 145.6- 161.4 % and the coefficient of variation was found to be in the range of 27.16-39.94 %. For hazelnut paste; wide ranges of recovery changes of 38.2-95.9 % and coefficient of variation range of 48.16-83.90 % were obtained. Statistical evaluation of data showed that there were significant differences between three analytical methods for both tahini and hazelnut paste samples (P
Benzer Tezler
- Ultrases uygulamalarının fındık pürelerinde aflatoksinlerin detoksifikasyonu ve kalite parametrelerine etkisi
The detoxification of aflatoxins and the effect on quality parameters in hazelnut pastes by ultrasonic applications
ONUR CİVİL
Yüksek Lisans
Türkçe
2024
Gıda MühendisliğiGiresun ÜniversitesiBiyosüreç Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ LEVENT ŞEN
- Yumuşak çeliğin korozyonuna bazı kuruyemiş özütlerinin inhibitör etkisinin araştırılması
Investigation of the inhibitory effect of some nut shell extracts on mild steel corrosion
HACER EBRU SİNGER
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
Kimya MühendisliğiHitit ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ABDURRAHMAN ASAN
DR. MERVE OKUTAN
- Quality evaluation of pomegranate arils with chickpea starch based edible film
Nohut nişastası bazlı yenilebilir film ile kaplanmış nar tanelerinin kalite değerlendirmesi
TAYFUN YAMAN
Yüksek Lisans
İngilizce
2013
Gıda Mühendisliğiİstanbul Teknik ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
ÖĞR. GÖR. FATMA EBRU FIRATLIGİL DURMUŞ
- Alerjik proktokolitli süt çocuklarının karakteristik özellikleri ve klinik seyri etkileyen faktörler
Factors affecting characteristic features and clinical patternof allergic proctocolitis in infants
MELİKE KURTULUŞ ÇOKBOZ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2018
Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıBalıkesir ÜniversitesiÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SEZİN AKMAN
- Kayseri ilinde, endüstriyel tesislerde, termal güneş enerjisini ve proses atık ısısını kullanabilecek potansiyeli belirleme
Determining the potential of solar thermal energy and waste heat recovery utilization in industrial plants in Kayseri
RAVZA EKEN
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
EnerjiMarmara ÜniversitesiÇevre Bilimleri Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET ARİF NEŞET KADIRGAN
YRD. DOÇ. DR. GÖKÇEN ALEV ÇİFTÇİOĞLU