Retinoid ve D-vitamini türevlerinin YAP1 aracılı skar oluşumu üzerindeki etkilerinin araştırılması
Başlık çevirisi mevcut değil.
- Tez No: 1012713
- Danışmanlar: DOÇ. DR. NİLAY DUMAN
- Tez Türü: Tıpta Uzmanlık
- Konular: Dermatoloji, Dermatology
- Anahtar Kelimeler: Yara İyileşmesi, Fibroblastlar, Skarlaşma, Tretinoin, Kalsitriol, YAP1 (Yes-associated) protein, Wound Healing, Fibroblasts, Cicatrization, Tretinoin, Calcitriol, YAP1 (Yes-associated) protein
- Yıl: 2026
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ege Üniversitesi
- Enstitü: Tıp Fakültesi
- Ana Bilim Dalı: Deri ve Zührevi Hastalıklar Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Amaç Bu çalışmada retinoid türevi tretinoinin (ATRA) ve D vitamini türevi 1α,25- dihidroksivitamin D₃'ün (kalsitriol) L929 fibroblast hücrelerinde YAP1 aracılı fibrotik yanıt ve skar biyolojisi üzerindeki etkilerinin in vitro olarak değerlendirilmesi amaçlandı. Gereç ve Yöntem L929 fibroblastlarında MTT testi ile ATRA ve kalsitriolün hücre canlılığı üzerine etkileri incelendi ve sitotoksik olmayan dozlar belirlendi. Moleküler analizlerde ATRA (1, 10, 20 µM) ve kalsitriol (1, 10, 100 nM) uygulandı. Yara kapanması (migrasyon) scratch (wound healing) testi ile 0., 12. ve 60. saatlerde ölçülen yara açıklığı değerlerinden kapanma yüzdesi hesaplanarak değerlendirildi. qRT-PCR ile YAP1, COL1A1 ve TGF-β mRNA düzeyleri β- aktine normalize edilerek analiz edildi; MMP-1 için Ct değerleri değerlendirildi. Western blot ile YAP1 protein ekspresyonu β-aktine normalize edilerek hesaplandı. ELISA ile hücre süpernatantında MMP-1, COL1A1 ve TGF-β protein düzeyleri kantitatif olarak ölçüldü. Bulgular ATRA L929 hücrelerinde doza bağlı sitotoksisite gösterirken, kalsitriol 1–100 nM aralığında sitotoksik etki oluşturmamış ve 72 saatte bazı dozlarda proliferatif artış izlenmiştir. qRT-PCR analizinde 10 µM ATRA grubunda YAP1 mRNA düzeyi anlamlı azalırken; 20 µM ATRA'da COL1A1 mRNA düzeyi artmıştır. ATRA'nın tüm dozlarında TGF-β mRNA düzeyi anlamlı şekilde baskılanmıştır. Kalsitriol uygulamasında 1–10 nM dozlarında YAP1 mRNA düzeyi anlamlı azalırken, COL1A1 ve TGF-β mRNA düzeyleri tüm dozlarda belirgin biçimde baskılanmıştır. MMP-1 için yüksek Ct (>30) değerleri nedeniyle gen ekspresyonu istatistiksel olarak değerlendirilememiştir. Western blot analizinde ATRA özellikle 1 ve 10 µM dozlarında YAP1 protein düzeyini yaklaşık iki kat artırırken, kalsitriol gruplarında YAP1 protein düzeyi kontrol grubuna yakın bulunmuştur. ELISA sonuçlarında kontrol grubunda yüksek olan MMP-1 salınımı her iki ajanda da saptanamaz düzeye düşmüştür. ATRA süpernatantında COL1A1 düzeyleri doza bağlı azalırken, kalsitriol gruplarında hafif artış görülmüştür. TGF-β proteini ATRA gruplarında ölçüm sınırının altında seyrederken, kalsitriol ile doza bağlı artmış ve 100 nM'de en yüksek düzeye ulaşmıştır. Scratch testinde hem ATRA hem kalsitriol tüm dozlarda fibroblast migrasyonunu baskılamış; bazı erken zaman ölçümlerinde negatif kapanma yüzdeleri gözlenmiştir. Sonuç: ATRA ve kalsitriol L929 fibroblastlarında YAP1 eksenli fibrotik yanıtın farklı basamaklarını ve fibroblast migrasyonunu anlamlı biçimde modüle etmektedir. ATRA, YAP1 protein düzeyini artırmasına karşın TGF-β sekresyonunu ve kollajen salınımını baskılayıcı bir profile sahipken; kalsitriol mRNA düzeyinde baskılama göstermesine rağmen TGF-β sekresyonunu ve kollajen salınımını artırıcı yönde etki gösterebilmiştir. Bulgular, skar biyolojisinde YAP1 ilişkili mekanizmaların çok düzeyli düzenlenebileceğini düşündürmektedir.
Özet (Çeviri)
Objective This study aimed to evaluate in vitro the effects of the retinoid derivative tretinoin (ATRA) and the vitamin D derivative 1α,25-dihydroxyvitamin D₃ (calcitriol) on YAP1- mediated fibrotic response and scar biology in L929 fibroblast cells. Materials and Methods The effects of ATRA and calcitriol on cell viability in L929 fibroblasts were assessed using the MTT assay, and non-cytotoxic doses were determined. For molecular analyses, ATRA (1, 10, 20 µM) and calcitriol (1, 10, 100 nM) were administered. Wound closure (migration) was evaluated using a scratch (wound healing) assay by calculating the percentage of closure from wound width measurements obtained at 0, 12, and 60 hours. mRNA levels of YAP1, COL1A1, and TGF-β were analyzed by qRT-PCR after normalization to β-actin; Ct values were evaluated for MMP-1. YAP1 protein expression was quantified by Western blot and normalized to β-actin. Protein levels of MMP-1, COL1A1, and TGF-β in cell supernatants were quantitatively measured by ELISA. Results ATRA exhibited dose-dependent cytotoxicity in L929 cells, whereas calcitriol did not induce cytotoxicity within the 1–100 nM range, and an increase in proliferation was observed at some doses at 72 hours. In qRT-PCR analyses, YAP1 mRNA levels significantly decreased in the 10 µM ATRA group, while COL1A1 mRNA levels increased at 20 µM ATRA. TGF-β mRNA levels were significantly suppressed at all ATRA doses. With calcitriol treatment, YAP1 mRNA levels significantly decreased at 1–10 nM, and COL1A1 and TGF-β mRNA levels were markedly suppressed at all doses. Due to high Ct values (>30), MMP-1 gene expression could not be statistically evaluated. In Western blot analyses, ATRA increased YAP1 protein levels approximately twofold, particularly at 1 and 10 µM, whereas YAP1 protein levels in calcitriol groups were comparable to those in the control group. In ELISA results, MMP-1 release—high in the control group—decreased to undetectable levels with both agents. COL1A1 levels in ATRA supernatants decreased in a dose-dependent manner, whereas a slight increase was observed in calcitriol groups. TGF-β protein remained below the detection limit in ATRA groups, while it increased dose-dependently with calcitriol and reached the highest level at 100 nM. In the scratch assay, both ATRA and calcitriol inhibited fibroblast migration at all doses; negative closure percentages were observed at some early time points. Conclusion ATRA and calcitriol significantly modulate different steps of the YAP1-axis fibrotic response and fibroblast migration in L929 fibroblasts. Although ATRA increased YAP1 protein levels, it displayed a profile suppressing TGF-β secretion and collagen release; conversely, calcitriol, despite suppressing mRNA levels, may increase TGF-β secretion and collagen release. These findings suggest that YAP1-related mechanisms in scar biology may be regulated at multiple levels.
Benzer Tezler
- Ratlarda bir vitamin A türevi retinoid olan asitretinin epifizyal büyüme plağına etkilerinin biyokimyasal ve histopatolojik olarak değerlendirilmesi
Assessment of biochemical and histopathological effect of acitretin which is a derivate of vitamin A on epiphyseal growth plate in rats
SEVDA ÖNDER
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2014
DermatolojiYüzüncü Yıl ÜniversitesiDermatoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. SERAP GÜNEŞ BİLGİLİ
- Steroid'in HL-60 (insan akut miyeloid lösemi) hücre hattında, apoptoz ve farklılaşma üzerindeki etkisi
The effect of steroid on the apoptosis and differentiation in HL-60 (human acute myeloid leukemia) cell line
AHMET ÖZÇİMEN
Doktora
Türkçe
2005
Tıbbi BiyolojiHacettepe ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
PROF.DR. AHMET KART
- İktiyoz hastalarında oral D vitamini kullanımının iktiyozun klinik bulgularına etkisi
The effect of oral vitamin D supplementation on the clinical findings of ichthyosis patients
ÖZGE ALTUNOK
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2025
DermatolojiMarmara ÜniversitesiDeri Hastalıkları ve Frengi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AYŞE DENİZ YÜCELTEN
- Hiperlipidemik olgularda A vitamini ve beta-karoten düzeyleri ile çeşitli plazma lipidleri arasındaki ilişkilerin incelenmesi
Başlık çevirisi yok
ENGİN ULUKAYA
- Tüberküloz hastalarında FokI ve TaqI vitamin D reseptörü polimorfizmlerinin araştırılması
Investigation of FokI and TaqI vitamin D receptor polymorphisms in tuberculosis patients
DOĞAN CAN ASLAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
Eczacılık ve FarmakolojiMersin ÜniversitesiFarmasötik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ MAHMUT ÜLGER