Hepatit B virüsü HBcAg geninin klonlanması ve ökaryotik hücrelerde açıklanması
Cloning and expression HBcAg gene of hepatitis B virus in eukaryotic cells
- Tez No: 107773
- Danışmanlar: PROF.DR. MEHMET ZİYA DOYMAZ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Mikrobiyoloji, Microbiology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2001
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Fırat Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 68
Özet
1. ÖZET Bu çalışmada, hepatit B virüsünün kor antijeni (HBcAg) geninin Escherichia coli (E. coli)' de klonlanması ve HBcAg proteinin ökaryotik hücrelerde açıklatılması rapor edilmiştir. Çalışmada, öncelikle, HBcAg geni, hepatit B virüsle infekte hasta serumundan izole edilen DNA' dan polimeraz zincir tepkimesiyle (PCR) çoğaltıldı ve pUC19 plazmitine yerleştirildi, Elde edilen rekombinant plazmit (pHBc-1) E. coli hücrelerinin transformasyonunda kullanıldı. pHBc-1 plazmiti içindeki HBcAg gerıinin varlığı PCR ve enzim sindirme deneyleri ile doğrulandı. Daha sonra, rekombinant plazmit klonlanndan EcoKL ve Hindül restriksiyon enzimleriyle uzaklaştınlan HBcAg geni, ökaryotik eksprasyon plazmiti olan, pcDNA3 içine yerleştirildi. Oluşturulan rekombinant plazmit, pcDNA-HBc, içindeki HBcAg geninin varlığı yine restriksiyon enzim sindirimi deneyi ile test edildi. Daha sonra, pcDNA-HBc, ökaryotik Vero hücrelerine transfekte edildi ve pcDNA-HBc plazmitini istikrarlı bir şekilde taşıyan hücre hatları, Vero-HBc, genetisin içeren kültür vasatında seçildi. Vero-HBc hücrelerinde HBcAg proteinin açıklanması Western Immunoblot deneyi ile test edildi. Immunoblotlamada Vero-HBc hücrelerinde 21 kilodalton (kDa) büyüklüğünde HBcAg proteini belirlendi. Sonuç olarak, bu çalışmada günümüzün en ciddi sağlık sorunlarından birini oluşturan hepatit B virüsün kor antijenini şifreleyen gen klonlanarak ökaryotik hücrelerde açıklatılmıştır. Bir viral proteini şifreleyen genin izolasyonundan eksprâsyöriunâ kadar olan aşamaları içeren çalışma, bu alanda ülkemizdeki ilklerden birini temsil etmektedir.
Özet (Çeviri)
2. ABSTRACT In the present study, cloning of (HBcAg) gene in Escherichia coli and expression of the gene in eukaryotic cells are reported. Hepatitis B virus (HBV) core antigen gene was amplified from the sera of HBV infected patients in a polymerase chain reaction (PCR) and placed into pUC19 plasmid. The resulting recombinant plasmid, termed pHBc-1, was used in transformation of E. coli cells. The presence of HBcAg in pHBc-1, was confirmed by both PCR and restriction enzyme digestion, which has only single restriction site in HBcAg coding sequence. Later, HBcAg gene was excised from pHBc-1 and inserted into a eukaryotic expression vector pcDNA3. Again, the placement of HBcAg gene in the resulting plasmid pcDNA-HBc was tested with restriction enzyme digestion. For this purpose, EcoR I and HindUl enzymes which were also utilized in the insertion of the gene into the plasmid in the first place, were used. Afterwards, pcDNA-HBc was transfected into Vero cells. Cells stably transfected with pcDNA-HBc plasmid (Vero-HBc) were seleceted in geneticin containing culture medium. The presence of HBcAg gene in Vero-HBc cells were again confirmed with PCR assay. Additionally, the expression of HBcAg gene by Vero-HBc cells were tested in Western Immunoblotting assay. The result of immunoblotting assay demonstrated that, Vero-HBc cells indeed express a 21 kDa protein reacting with anti-HBcAg antibody. In conclusion, in the present study, it was shown that HBcAg gene of hepatitis B virus, one of the most serious health hazards of modern day world, was cloned in E.coli and expressed in Vero cells. The expressed HBcAg seems to have authentic antigenic properties as determined by Western Immunoblotting assay.
Benzer Tezler
- The effect of HLA DPB1 alleles on the immune response in chronic Hepatitis B
Kronik Hepatit B hastalığında HLA DPB1 allelerin hastalığın immun yanıta etkisi
NİLAY GURBET KARATAŞ
Yüksek Lisans
İngilizce
2014
Tıbbi Biyolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. GİZEM DİNLER DOĞANAY
- Hepatit B virüsünün HBsAg geninin polimeraz zincir reaksiyonu yöntemiyle gösterilmesi
Detection of HBsAg gene of hepatitis B virus by polymerase chain reaction
NESLİHAN KELEŞTEMUR
Yüksek Lisans
Türkçe
2002
MikrobiyolojiFırat ÜniversitesiMikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Y.DOÇ.DR. AYKUT ÖZDARENDELİ
- İnaktif hepatit B enfeksiyonunda HBsAG kaybı ile IL-28B gen polimorfizmi arasındaki ilişki
HBsAG loss of the relationship between gene polymorphism with il-28B at inactive hepatitis B infection
AYŞEN YÜMLÜ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2013
GastroenterolojiEge Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. U. SALİH AKARCA
- Hepatit B virusu (HBV) ile kronik enfekte hastalarda HBV bazal kor promoter/prekor gen mutasyonları ve genotip değerlendirilmesi
Basal core promoter/precore gene mutations in chronically infected patients with hepatitis B virus and genotype evaluation
SEDA TEZCAN
Doktora
Türkçe
2009
MikrobiyolojiMersin ÜniversitesiTıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÜROL EMEKDAŞ
- Hepatit B hastalarında prognoz biyobelirteci olarak kullanılabilecek uzun kodlanmayan RNA'ların araştırılması
Investigation of LONG NON-coding RNAS that could be used as a prognostic biomarker in hepatitis B patients
HİLAL BAŞYEĞİT
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
Tıbbi BiyolojiEge ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. SUNDE YILMAZ SÜSLÜER