Geri Dön

Hepatit B virüsü HBcAg geninin klonlanması ve ökaryotik hücrelerde açıklanması

Cloning and expression HBcAg gene of hepatitis B virus in eukaryotic cells

PDF İndir

  1. Tez No: 107773
  2. Yazar: YASEMİN BULUT
  3. Danışmanlar: PROF.DR. MEHMET ZİYA DOYMAZ
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Mikrobiyoloji, Microbiology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2001
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Fırat Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 68

Özet

1. ÖZET Bu çalışmada, hepatit B virüsünün kor antijeni (HBcAg) geninin Escherichia coli (E. coli)' de klonlanması ve HBcAg proteinin ökaryotik hücrelerde açıklatılması rapor edilmiştir. Çalışmada, öncelikle, HBcAg geni, hepatit B virüsle infekte hasta serumundan izole edilen DNA' dan polimeraz zincir tepkimesiyle (PCR) çoğaltıldı ve pUC19 plazmitine yerleştirildi, Elde edilen rekombinant plazmit (pHBc-1) E. coli hücrelerinin transformasyonunda kullanıldı. pHBc-1 plazmiti içindeki HBcAg gerıinin varlığı PCR ve enzim sindirme deneyleri ile doğrulandı. Daha sonra, rekombinant plazmit klonlanndan EcoKL ve Hindül restriksiyon enzimleriyle uzaklaştınlan HBcAg geni, ökaryotik eksprasyon plazmiti olan, pcDNA3 içine yerleştirildi. Oluşturulan rekombinant plazmit, pcDNA-HBc, içindeki HBcAg geninin varlığı yine restriksiyon enzim sindirimi deneyi ile test edildi. Daha sonra, pcDNA-HBc, ökaryotik Vero hücrelerine transfekte edildi ve pcDNA-HBc plazmitini istikrarlı bir şekilde taşıyan hücre hatları, Vero-HBc, genetisin içeren kültür vasatında seçildi. Vero-HBc hücrelerinde HBcAg proteinin açıklanması Western Immunoblot deneyi ile test edildi. Immunoblotlamada Vero-HBc hücrelerinde 21 kilodalton (kDa) büyüklüğünde HBcAg proteini belirlendi. Sonuç olarak, bu çalışmada günümüzün en ciddi sağlık sorunlarından birini oluşturan hepatit B virüsün kor antijenini şifreleyen gen klonlanarak ökaryotik hücrelerde açıklatılmıştır. Bir viral proteini şifreleyen genin izolasyonundan eksprâsyöriunâ kadar olan aşamaları içeren çalışma, bu alanda ülkemizdeki ilklerden birini temsil etmektedir.

Özet (Çeviri)

2. ABSTRACT In the present study, cloning of (HBcAg) gene in Escherichia coli and expression of the gene in eukaryotic cells are reported. Hepatitis B virus (HBV) core antigen gene was amplified from the sera of HBV infected patients in a polymerase chain reaction (PCR) and placed into pUC19 plasmid. The resulting recombinant plasmid, termed pHBc-1, was used in transformation of E. coli cells. The presence of HBcAg in pHBc-1, was confirmed by both PCR and restriction enzyme digestion, which has only single restriction site in HBcAg coding sequence. Later, HBcAg gene was excised from pHBc-1 and inserted into a eukaryotic expression vector pcDNA3. Again, the placement of HBcAg gene in the resulting plasmid pcDNA-HBc was tested with restriction enzyme digestion. For this purpose, EcoR I and HindUl enzymes which were also utilized in the insertion of the gene into the plasmid in the first place, were used. Afterwards, pcDNA-HBc was transfected into Vero cells. Cells stably transfected with pcDNA-HBc plasmid (Vero-HBc) were seleceted in geneticin containing culture medium. The presence of HBcAg gene in Vero-HBc cells were again confirmed with PCR assay. Additionally, the expression of HBcAg gene by Vero-HBc cells were tested in Western Immunoblotting assay. The result of immunoblotting assay demonstrated that, Vero-HBc cells indeed express a 21 kDa protein reacting with anti-HBcAg antibody. In conclusion, in the present study, it was shown that HBcAg gene of hepatitis B virus, one of the most serious health hazards of modern day world, was cloned in E.coli and expressed in Vero cells. The expressed HBcAg seems to have authentic antigenic properties as determined by Western Immunoblotting assay.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    389407

    The effect of HLA DPB1 alleles on the immune response in chronic Hepatitis B

    Kronik Hepatit B hastalığında HLA DPB1 allelerin hastalığın immun yanıta etkisi

    NİLAY GURBET KARATAŞ

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2014

    Tıbbi Biyolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. GİZEM DİNLER DOĞANAY

  2. Tez No

    118445

    Hepatit B virüsünün HBsAg geninin polimeraz zincir reaksiyonu yöntemiyle gösterilmesi

    Detection of HBsAg gene of hepatitis B virus by polymerase chain reaction

    NESLİHAN KELEŞTEMUR

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2002

    MikrobiyolojiFırat Üniversitesi

    Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    Y.DOÇ.DR. AYKUT ÖZDARENDELİ

  3. Tez No

    344274

    İnaktif hepatit B enfeksiyonunda HBsAG kaybı ile IL-28B gen polimorfizmi arasındaki ilişki

    HBsAG loss of the relationship between gene polymorphism with il-28B at inactive hepatitis B infection

    AYŞEN YÜMLÜ

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    GastroenterolojiEge Üniversitesi

    İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. U. SALİH AKARCA

  4. Tez No

    248448

    Hepatit B virusu (HBV) ile kronik enfekte hastalarda HBV bazal kor promoter/prekor gen mutasyonları ve genotip değerlendirilmesi

    Basal core promoter/precore gene mutations in chronically infected patients with hepatitis B virus and genotype evaluation

    SEDA TEZCAN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2009

    MikrobiyolojiMersin Üniversitesi

    Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GÜROL EMEKDAŞ

  5. Tez No

    815034

    Hepatit B hastalarında prognoz biyobelirteci olarak kullanılabilecek uzun kodlanmayan RNA'ların araştırılması

    Investigation of LONG NON-coding RNAS that could be used as a prognostic biomarker in hepatitis B patients

    HİLAL BAŞYEĞİT

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    Tıbbi BiyolojiEge Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. SUNDE YILMAZ SÜSLÜER

Geri Dön